Aktivity a Specifičnosti
DPP8 a DPP9 mají velmi podobné substrátu a inhibitoru specifičnost. Jako mnoho DPPIV inhibitorů předtím použity také zdá, že inhibují DPP8 a DPP9, je možné, že tyto enzymy jsou odpovědné za některé funkce připisované DPPIV.
stejně jako DPPIV a DPP8 preferuje dpp9 Pro v poloze P1 syntetických substrátů . S Pro fixní na P1, (X-Pro-NHPhNO2) reziduí nejvíce zvýhodněný DPP9 (a DPP8) v P2 pozici jsou hydrofobní a základní zbytků, a nejméně oblíbené jsou kyselých zbytků (Arg/Met/Leu/Lys>>Ala/Ser/Gly>>Glu/Asp/Asn). Většina dosud dostupných údajů naznačuje, že základní Arg-Pro-NHPhNO2 je výhodným substrátem z hlediska afinity. Míra obratu je naopak mnohem pomalejší ve srovnání s Ala-Pro – a Gly-Pro-NHPhNO2 . To je v kontrastu s mnohem méně diskriminační substrátovou specificitou dppiv. Štěpení Val-Ala-NHPhNO2 pomocí DPP9892aa bylo méně účinné než substráty s Pro at P1 a Gly-Gly-, Ala-Ala – a Ala-Phe-NHPhNO2 nebyly hydrolyzovány .
DPP9 hydrolyzován na fluorogenic substráty Ala-Pro-7-amino-3-trifluoromethylcoumarine (-AFC) a Ala-Pro-, Gly-Pro-, Lys-Pro-Trp-Pro-Val-Pro – Asp-Pro-AMC . Pokud jde o chromogenní substráty NHPhNO2, Asp-pro-AMC byl nejméně preferovaným substrátem pro DPP9 v této sérii.
DPP8 a DPP9 vykazují velmi podobnou kinetiku Michaelis-Menten. Katalytická účinnost vůči jejich substrátům je však obecně nižší než účinnost DPPIV. Při porovnání publikovaných údajů o katalytické parametry, pozoruje větší rozdíly mezi několika studií pro DPP8 a DPP9, než je tomu u DPPIV. Vzhledem k široké dostupnosti se chromogenní a fluorogenní substráty obsahující Ala-Pro a Gly – Pro nejčastěji používají ke stanovení aktivity DPP9. V biologických vzorcích je povinné zahrnout specifický inhibitor DPPIV k eliminaci interference DPPIV v testech .
Použití Ala-Phe-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Ala-NHPhNO2 a Z-Gly-Pro-NHPhNO2 jako substráty, rDPP9 postrádá tripeptidase a endopeptidase činnosti . Vyčerpání DPP8 nebo DPP9 v buňkách s siRNA neměla žádný vliv na štěpení Arg-Ala-Ala-Phe – a Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC . Maximální aktivita DPP9 na chromogenních a fluorogenních substrátech odvozených od dipeptidů byla pozorována v rozmezí pH 7,4-8,5. Pod pH 6,3-6,5 byla zjištěna malá aktivita rekombinantního i přirozeného DPP9. Neutrální pH optimum podporuje cytoplazmatickou lokalizaci.
některé inhibitory původně určené pro DPPIV také inhibují aktivitu DPP8/9. Kyselina boritá peptidy, včetně Val-boroPro, také známý jako Talabostat, se ukázaly být účinnými inhibitory různých prolin selektivní serin-typ proteázy (DPPII, DPPIV, DPP8, DPP9 a FAP) . Allo-isoleucyl thiazolidin, Lys (z – (NO2))pyrrolidin a Lys(Z-(NO2))thiazolidin byly mírně selektivnější vůči DPP8 / 9 oproti DPPIV . Řada α-aminoacyl-((2S,4S)-4-azido-2-cyanopyrrolidines) mělo za následek sloučeniny s Ki hodnoty v nanomol rozsah pro DPP8/9 a skromný celkovou selektivitu vůči DPPIV a DPPII .
Nahrazení thiazolidine prsten z alo-isoleucyl thiazolidine o isoindoline skupinu posílenou DPP8 a DPP9 inhibice, vzhledem k tomu, že inhibice DPPIV byla výrazně snížil . Jiaang et al. objeveny selektivní inhibitory DPP8 / 9 obsahující isoindolin na P1. Isoindolin s 1-(4,4′ – difluorbenzhydryl)piperazinem v místě P2 (1G244; PTX1210) je velmi účinný a selektivní inhibitor DPP8 / 9. 1G244 má hodnoty IC50 14 a 53 nM proti DPP8 a DPP9 . Při hodnotách IC50 větších než 100 µM lze usoudit, že 1G244 významně neinhibuje DPPIV, FAP nebo DPPII. Zajímavé je, že to je pomalý-těsné vazby konkurenční inhibitor DPP8, ale sloučenina se chová jako kompetitivní a reverzibilní inhibitor DPP9 . Na rozdíl od allo-Ile-izoindolinu pronikl 1G244 do plazmatické membrány a nezpůsobil významné toxikologické příznaky u potkanů . V další sérii isoindoline mimetika, látky (2S,3R)-2-amino-1-(5-fluoroisoindolin-2-yl)-3-methylpentan-1-one ukázala, že nejlepší poměr účinnosti a selektivity. Ačkoli jeho inhibiční potenciál vůči DPP8 byl podobný jako u mateřské struktury, došlo k mírnému, čtyřnásobnému zvýšení účinnosti vůči DPP9 ve srovnání s DPP8 . Dosud nebyly hlášeny žádné inhibitory, jejichž afinita k DPP8 a DPP9 se liší více než desetkrát.
udržováním struktury založené na dipeptidech a zavedením diarylfosfonátové složky v poloze P1 byly vyvinuty ireverzibilní inhibitory DPP8/9. Bis(4-acetamidophenyl)pyrrolidin-2-yl a isoindolin-1-yl deriváty s hydrogenfosforečnan P2 lysin reziduí byly silné inhibitory pro DPP8/9. Počet isoindoline-získané inhibitory v této sérii dokázal spojit dobrou afinitou a výraznou selektivitu pro DPP8 a DPP9 s ohledem na DPPIV a DPPII .