In this blog post, the differences between molecular absorption, excitation and emission spectra are explained.
Absorption Spectra
Figure 1: Absorption spectrum of anthracene in cyclohexane measured using the FS5 Spectrofluorometer. Experimental parameters: Δλ = 1 nm.
Absorpční spektra (také známý jako UV-Vis spektra, absorpční spektra a elektronických spekter) ukazují změny v absorbanci vzorku jako funkce vlnové délky dopadajícího světla (Obrázek 1), a jsou měřeny pomocí spektrofotometru. Absorpční spektra se měří změnou vlnové délky dopadajícího světla pomocí monochromátoru a zaznamenáním intenzity přenášeného světla na detektoru. Intenzitu světla přenášen přes vzorek, ISample, (jako analytu rozpuštěného v rozpouštědle) a intenzitu světla přes prázdný, IBlank, (rozpouštědlo) jsou zaznamenány a absorbance vzorku se vypočítá pomocí:
absorbance je lineárně úměrná molární koncentrace vzorku; který umožňuje koncentrace vzorku se vypočítá z absorpční spektrum pomocí Beer-Lambert Zákon.
Obrázek 2: Schéma měření absorpčních spekter ve spektrofotometru.
Excitační Spektra
Obrázek 3: Fluorescenční excitační spektrum anthracenu v cyklohexanu měří pomocí FS5 Spectrofluorometer. Experimentální parametry: λem = 420 nm, Δλem = 1 nm, Δλex = 1 nm.
fluorescenční excitační spektra ukazují změnu intenzity fluorescence v závislosti na vlnové délce budicího světla (obrázek 3) a měří se pomocí spektrofluorometru. Vlnová délka emisní monochromator je nastavena na vlnové délce známý fluorescenční emise vzorku a vlnové délce excitace monochromator je snímán přes požadované excitační spektrum a intenzita fluorescence zaznamenáno na detektor jako funkci excitační vlnové délce. Pokud se vzorek řídí Kashovým pravidlem a Vavilovovým pravidlem, bude excitační spektrum a absorpční spektrum identické (porovnejte Obrázky 1 a 3). Excitační spektra lze proto považovat za fluorescenční detekovaná absorpční spektra.
Figure 4: Schematic of the measurement of excitation spectra in a spectrofluorometer.
Emission Spectra
Figure 5: Fluorescence emission spectrum of anthracene in cyclohexane measured using the FS5 Spectrofluorometer. Experimental parameters: λex = 340 nm, Δλex = 1nm, Δλem= 1 nm
Fluorescenční emisní spektra ukazují změny fluorescence intenzita jako funkce vlnové délce emise světla (viz Obrázek 5), a jsou měřeny pomocí spectrofluorometer. Vlnová délka excitace monochromator je nastavena na vlnové délce známo, že absorpce vzorku a vlnové délce emise monochromator je snímán přes požadovaný rozsah emisí a intenzita fluorescence zaznamenáno na detektor jako funkce emisních vlnových délek.
obrázek 6: schéma měření emisních spekter ve spektrofluorometru.
zjistit více …
další informace o teorii absorpce a fluorescenční spektroskopie naleznete v sekci Často kladené otázky na našem blogu.
Alternativně, proč ne procházet naši nabídku spektrofotometry a spectrofluorometers pro měření absorpční, excitační a emisní spektra vzorků. Můžete se k nám připojit na sociálních médiích, přihlásit se k našemu enewsletteru nebo nás kontaktovat a zjistit více.