aktiivisuus ja spesifisyys
DPP8: lla ja dpp9: llä on hyvin samanlainen substraatti-ja inhibiittorispesifisyys. Koska monet aiemmin käytetyt dppiv-estäjät näyttävät myös estävän dpp8: aa ja DPP9: ää, on mahdollista, että nämä entsyymit ovat vastuussa joistakin dppiv: lle kuuluvista toiminnoista.
dppivin ja DPP8: n tavoin dpp9 suosii synteettisten substraattien P1-asemassa olevaa Pro-kantaa . Kun Pro on kiinnitetty P1: een, (X-Pro-Nhphno2) dpp9: n (ja dpp8: n) suosimia jäämiä P2-asemassa ovat hydrofobiset ja emäksiset jäämät, ja vähiten suosittuja ovat happamat jäämät (Arg/met/Leu/Lys>>Ala/ser/Gly>>Glu/Asp/Asn). Useimmat tähän mennessä saatavilla olevat tiedot osoittavat, että perusarg-Pro-Nhphno2 on affiniteetin kannalta parempi substraatti. Liikevaihto sen sijaan on paljon hitaampaa kuin Ala-Pro – ja Gly-Pro-nhphno2 . Tämä on vastakohta dppivin paljon vähemmän erottelevalle substraattispesifisyydelle. Val-Ala-Nhphno2: n pilkkoutuminen dpp9892aa: lla oli tehottomampaa kuin pro at P1-substraateilla, eikä Gly-Gly -, Ala – Ala-ja Ala-Phe-nhphno2: ta hydrolysoitu .
DPP9 hydrolysoi Fluorogeeniset substraatit Ala-Pro-7-amino-3-trifluorimetyylikumariini (-AFC) ja Ala-Pro-, Gly-Pro-, Lys-Pro-, Trp-Pro-, Val-Pro – ja Asp-Pro-AMC . Kromogeenisten nhphno2-substraattien osalta Asp-Pro-AMC oli vähiten suosittu substraatti dpp9: lle tässä sarjassa.
DPP8: lla ja DPP9: llä on hyvin samankaltainen Michaelis-Menten-kinetiikka. Katalyyttiset hyötysuhteet niiden substraatteihin nähden ovat kuitenkin yleensä alhaisemmat kuin DPPIV: ssä. Vertailtaessa katalyyttiparametreja koskevia kirjallisuustietoja voidaan todeta, että dpp8: n ja DPP9: n tutkimuksissa on enemmän eroavaisuuksia kuin DPPIV: n kohdalla. Laajan käytettävyyden vuoksi Dpp9-aktiivisuuden määrittämiseen käytetään useimmiten Ala – Pro-ja Gly – Pro-yhdisteitä sisältäviä kromogeenisia ja fluorogeenisia substraatteja. Biologisissa näytteissä on pakollista sisällyttää erityinen dppiv-inhibiittori dppivin aiheuttaman häiriön poistamiseksi määrityksissä .
käytettäessä Ala-Phe-Pro-nhphno2: ta, Ala-Ala-Pro-Nhphno2: ta, Ala-Ala-Ala-Nhphno2: ta ja Z-Gly-Pro-nhphno2: ta substraatteina rdpp9: llä ei ole tripeptidaasi-ja endopeptidaasiaktiivisuutta . DPP8: n tai dpp9: n vähenemisellä siRNA: n soluissa ei ollut vaikutusta Arg-, Ala-Ala-Phe – ja Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC: n pilkkoutumiseen . Suurin dpp9-aktiivisuus dipeptidijohdannaisilla kromogeenisilla ja fluorogeenisilla substraateilla havaittiin pH-alueella pH 7, 4-8, 5 . Alle pH 6, 3–6, 5: n havaittiin vain vähän sekä rekombinantin että luonnollisen dpp9: n aktiivisuutta. Neutraali pH-optimi tukee sytoplasman lokalisointia.
jotkut alun perin DPPIV: lle suunnitellut estäjät estävät myös DPP8/9: n aktiivisuutta. Boronihappopeptidien, mukaan lukien Val-boroPro, joka tunnetaan myös Talabostaattina, on osoitettu olevan voimakkaita proliiniselektiivisten seriinityyppisten proteaasien (DPPII, DPPIV, DPP8, DPP9 ja FAP) estäjiä . Allo-isoleusyylitiatsolidiini, Lys(Z-(NO2))pyrrolidiini ja LYS(Z – (NO2))tiatsolidiini olivat hieman selektiivisempiä dpp8/9: ää kohtaan kuin DPPIV . Α-aminoasyyli-((2S,4S)-4-atsido-2-syanopyrrolidiinit) – sarjan tuloksena syntyi yhdisteitä, joiden Ki-arvot ovat nanomolaarisella alueella dpp8/9: lle ja joiden yleinen selektiivisyys dppiv: tä ja DPPII: tä kohtaan on vaatimaton .
allo-isoleusyylitiatsolidiinin tiatsolidiinirenkaan korvaaminen isoindoliiniosalla voimisti dpp8: n ja DPP9: n estoa, kun taas dppiv: n esto väheni merkittävästi . Jiaang ym. löydettiin selektiivisiä dpp8 / 9-estäjiä, jotka sisältävät isoindoliinia P1: ssä. Isoindoliini, jossa on 1-(4,4′ – difluoribentshydryyli)piperatsiinia P2-kohdassa (1G244; PTX1210) on erittäin voimakas ja selektiivinen dpp8/9-estäjä. 1G244: n IC50-arvot ovat 14 nM ja 53 nM dpp8: aa ja DPP9: ää vastaan . Kun IC50-arvot ovat yli 100 µM, voidaan päätellä, että 1G244 ei estä merkittävästi DPPIV -, FAP-tai dppii-toimintaa. Mielenkiintoista on, että se on dpp8: n hitaasti sitova kilpaileva inhibiittori, mutta yhdiste käyttäytyy dpp9: n kilpailevana ja reversiibelinä inhibiittorina . Toisin kuin allo-Ile-isoindoliini, 1G244 läpäisi plasman kalvon eikä aiheuttanut merkittäviä toksikologisia oireita rotilla . Toisessa isoindoliinimimeettien sarjassa yhdiste(2s, 3R)-2-amino-1-(5-fluoroisoindolin-2-yyli)-3-metyylipentan-1-oni osoitti parhaan tasapainon voimakkuudessa ja selektiivisyydessä. Vaikka sen inhibitorinen potentiaali dpp8: aa kohtaan oli samanlainen kuin emorakenteessa, oli Teho dpp9: ää kohti vaatimaton, nelinkertainen verrattuna DPP8: aan . Toistaiseksi ei ole raportoitu inhibiittoreita, joiden affiniteetti dpp8: aan ja DPP9: ään eroaa yli kymmenkertaisesti.
dipeptidipohjaisen rakenteen säilyttäminen ja diaryylifosfonaattiosan asettaminen P1-asentoon johti peruuttamattomiin dpp8/9-estäjiin. Bis (4-asetamidofenyyli)pyrrolidin-2-yyli ja isoindolin-1-yylijohdokset, joissa on kaksiemäksinen P2-lysiinijäämä, estivät voimakkaasti DPP8/9: ää. Useat isoindoliinijohdannaiset inhibiittorit tässä sarjassa osoittautuivat yhdistävän hyvän affiniteetin ja selvän selektiivisyyden DPP8: lle ja DPP9: lle suhteessa DPPIV: iin ja DPPII: hen .