aktivitás és specificitás
a DPP8 és a DPP9 nagyon hasonló szubsztrát és inhibitor specifitással rendelkezik. Mivel a korábban alkalmazott DPPIV inhibitorok közül sok szintén gátolja a DPP8-at és a DPP9-et, lehetséges, hogy ezek az enzimek felelősek a DPPIV-nek tulajdonított egyes funkciókért.
a dppiv-hez és a DPP8-hoz hasonlóan a Dpp9 a Pro-t részesíti előnyben a szintetikus szubsztrátok P1 pozíciójában . Ha a Pro-t P1-re rögzítik (X-Pro-NHPhNO2), a DPP9 (és DPP8) által a P2 helyzetben leginkább kedvelt maradékok hidrofób és bázikus maradványok, és a legkevésbé kedvezőek a savas maradékok (Arg/Met/Leu/Lys>>Ala/Ser/Gly>>Glu/Asp/Asn). Az eddig rendelkezésre álló legtöbb adat azt jelzi, hogy az alapvető Arg-Pro-NHPhNO2 előnyös szubsztrát az affinitás szempontjából. Ezzel szemben a forgalom sokkal lassabb az Ala-Pro – és Gly-Pro-NHPhNO2-hez képest . Ez ellentétben áll a DPPIV sokkal kevésbé diszkriminatív szubsztrát-specifitásával. A Val-Ala-NHPhNO2 hasítása a DPP9892aa által kevésbé volt hatékony, mint a Pro P1 szubsztrátjai, és a Gly-Gly -, Ala-Ala – és Ala-Phe-NHPhNO2 nem hidrolizált .
a dpp9 hidrolizálta az ALA-Pro-7-amino-3-trifluor-metil-kumarin (- AFC) és az Ala-Pro -, Gly-Pro -, Lys-Pro -, Trp-Pro -, Val-Pro-és Asp-Pro-AMC fluorogén szubsztrátokat . Ami a kromogén-NHPhNO2 szubsztrátokat illeti, az Asp-Pro-AMC volt a legkevésbé előnyös szubsztrát a DPP9 számára ebben a sorozatban.
a DPP8 és a DPP9 nagyon hasonló Michaelis-Menten kinetikát mutat. A szubsztrátjaikkal szembeni katalitikus hatékonyság azonban általában alacsonyabb, mint a DPPIV. A katalitikus paraméterekre vonatkozó szakirodalmi adatok összehasonlításakor a dpp8 és a DPP9 számos vizsgálata között több eltérés figyelhető meg, mint a DPPIV esetében. A széles körű rendelkezésre állás miatt az Ala-Pro-és Gly – Pro-tartalmú kromogén és fluorogén szubsztrátokat leggyakrabban a DPP9 aktivitás meghatározására használják. A biológiai mintákban kötelező egy specifikus DPPIV inhibitor felvétele a dppiv interferenciájának kiküszöbölésére a vizsgálatokban .
Ala-Phe-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Ala-NHPhNO2 és Z-Gly-Pro-NHPhNO2 szubsztrátként történő felhasználásával az rDPP9 nem rendelkezik tripeptidáz és endopeptidáz aktivitással . A DPP8 vagy dpp9 kiürülése siRNS-sel rendelkező sejtekben nem befolyásolta az Arg-, Ala-Ala-Phe – és Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC hasadását . A maximális DPP9 aktivitást a dipeptid eredetű kromogén és fluorogén szubsztrátokon a pH 7,4–8,5 pH tartományban figyelték meg . PH 6,3–6,5 alatt mind a rekombináns, mind a természetes DPP9 kis aktivitását észlelték. A semleges pH optimum támogatja a citoplazmatikus lokalizációt.
néhány eredetileg DPPIV-re tervezett inhibitor szintén gátolja a DPP8/9 aktivitást. A bórsav peptidek, köztük a Val-boroPro, más néven Talabosztát, különböző prolin szelektív szerin típusú proteázok (DPPII, DPPIV, DPP8, DPP9 és FAP) erős inhibitorainak bizonyultak . Az Allo-izoleucil-tiazolidin, A Lys(Z-(NO2))pirrolidin és a Lys(Z-(NO2)) – tiazolidin kissé szelektívebben viszonyultak a DPP8/9-hez, mint a DPPIV-hez . A((2s,4s)-4-azido-2-cianopirrolidinok) sorozata olyan vegyületeket eredményezett, amelyek ki-értéke a dpp8/9 nanomoláris tartományában van, és a dppiv és a DPPII iránti általános szelektivitás mérsékelt .
az allo-izoleucil-tiazolidin tiazolidin gyűrűjének izoindolin résszel történő helyettesítése fokozta a DPP8 és DPP9 gátlást, míg a DPPIV gátlás szignifikánsan csökkent . Jiaang et al. felfedezett szelektív DPP8 / 9 inhibitorok, amelyek izoindolint tartalmaznak a P1-en. Izoindolin 1-(4,4′ – difluor-benzhidril) piperazinnal a P2 helyén (1G244; PTX1210) egy nagyon erős és szelektív dpp8/9 inhibitor. Az 1G244 IC50 értéke 14, illetve 53 nM a DPP8, illetve a DPP9 ellen . Ha az IC50 értéke nagyobb, mint 100 ons, arra lehet következtetni, hogy az 1G244 nem gátolja szignifikánsan a DPPIV, FAP vagy DPPII. Érdekes módon a dpp8 lassú, szoros kötésű kompetitív inhibitora, de a vegyület a dpp9 kompetitív és reverzibilis inhibitoraként viselkedik . Az allo-Ile-izoindolinnal ellentétben az 1g244 behatolt a plazmamembránba, és patkányokban nem okozott jelentős toxikológiai tüneteket . Az izoindolin-mimetikumok egy másik sorozatában a (2s,3R)-2-amino-1-(5-fluoroizoindolin-2-IL)-3-metilpentán-1-on vegyület mutatta a legjobb hatékonyságot és szelektivitást. Bár gátló potenciálja a DPP8 felé hasonló volt a szülőszerkezetéhez, a dpp9 felé mérsékelt, négyszeres növekedés volt tapasztalható a dpp8-hoz képest . Eddig nem jelentettek olyan inhibitorokat, amelyek affinitása a DPP8 és a DPP9 iránt több mint tízszeresére nőtt volna.
a dipeptid alapú szerkezet megtartásával és egy diaril-foszfonát rész P1 pozícióban történő bevezetésével irreverzibilis DPP8/9 inhibitorokat fejlesztettek ki. A kétbázisú P2 lizin maradékkal rendelkező bisz(4-acetamidofenil)pirrolidin-2-IL és izoindolin-1-Il származékok a DPP8/9 hatékony inhibitorai voltak. Számos izoindolinból származó inhibitor ebben a sorozatban jó affinitást és kifejezett szelektivitást mutatott a DPP8 és a DPP9 iránt a DPPIV és a DPPII tekintetében .