In this blog post, the differences between molecular absorption, excitation and emission spectra are explained.
Absorption Spectra
Figure 1: Absorption spectrum of anthracene in cyclohexane measured using the FS5 Spectrofluorometer. Experimental parameters: Δλ = 1 nm.
az abszorpciós spektrumok (más néven UV-Vis spektrumok, abszorbancia spektrumok és elektronikus spektrumok) a minta abszorbanciájának változását mutatják a beeső fény hullámhosszának függvényében (1.ábra), és spektrofotométerrel mérik. Az abszorpciós spektrumokat úgy mérik, hogy a beeső fény hullámhosszát egy monokromátor segítségével változtatják, és rögzítik az átvitt fény intenzitását egy detektoron. A minta (például egy oldószerben oldott analit) által átvitt fény intenzitását és a vakpróba (iblank, csak oldószer) által átvitt fény intenzitását feljegyezzük, és a minta abszorbanciáját a következő módszerrel számítjuk ki::
az abszorbancia lineárisan arányos a minta moláris koncentrációjával; amely lehetővé teszi a minta koncentrációjának kiszámítását az abszorpciós spektrumból a Beer-Lambert törvény.
2. ábra: Az abszorpciós spektrumok spektrofotométerben történő mérésének vázlata.
gerjesztési spektrumok
3.ábra: az antracén fluoreszcens gerjesztési spektruma ciklohexánban FS5 Spektrofluorométerrel mérve. Kísérleti paraméterek: = 420 nm, = 1 nm, = 1 nm.
a fluoreszcencia gerjesztési spektrumok a fluoreszcencia intenzitásának változását mutatják a gerjesztő fény hullámhosszának függvényében (3.ábra), és spektrofluorométerrel mérjük. Az emissziós monokromátor hullámhosszát a minta által ismert fluoreszcencia-emisszió hullámhosszára állítjuk be, és a gerjesztési monokromátor hullámhosszát a kívánt gerjesztési tartományon át szkenneljük, és a fluoreszcencia intenzitását a detektoron a gerjesztési hullámhossz függvényében rögzítjük. Ha a minta megfelel Kasha és Vavilov szabályának, akkor a gerjesztési spektrum és az abszorpciós spektrum azonos lesz (hasonlítsa össze az 1.és a 3. ábrát). A gerjesztési spektrumok ezért fluoreszcenciával detektált abszorpciós spektrumoknak tekinthetők.
Figure 4: Schematic of the measurement of excitation spectra in a spectrofluorometer.
Emission Spectra
Figure 5: Fluorescence emission spectrum of anthracene in cyclohexane measured using the FS5 Spectrofluorometer. Experimental parameters: a fluoreszcencia-emissziós spektrumok a fluoreszcencia-intenzitás változását mutatják az emissziós fény hullámhosszának függvényében (5.ábra), és spektrofluorométerrel mérjük őket. A gerjesztési monokromátor hullámhosszát a minta által ismert abszorpciós hullámhosszra állítjuk be, és az emissziós monokromátor hullámhosszát a kívánt emissziós tartományon át szkenneljük, és a detektoron a fluoreszcencia intenzitását az emissziós hullámhossz függvényében rögzítjük.
6.ábra: az emissziós spektrumok spektrofluorométerben történő mérésének vázlata.
Tudjon meg többet…
az abszorpció elméletével és a fluoreszcencia spektroszkópiával kapcsolatos további információkért tekintse meg blogunk Gyakran Ismételt Kérdések részét.
Alternatív megoldásként keresse meg spektrofotométereinket és spektrofluorométereinket a minták abszorpciós, gerjesztési és emissziós spektrumának mérésére. Csatlakozhat hozzánk a közösségi médiában, iratkozzon fel hírlevelünkre, vagy lépjen kapcsolatba velünk, hogy többet megtudjon.