ゲルろ過クロマトグラフィー

ゲルろ過クロマトグラフィー用途

ゲルろ過クロマトグラフィーは、サイズ排除クロマトグラフィーの一種であり、試料中の分子および複合体を特定のサイズ範囲の画分に分画するか、特定のサイズよりも大きな分子を試料から除去するか、または両方の操作の組み合わせに使用することができる。 ゲルろ過クロマトグラフィーは、水溶液中で小分子、タンパク質、タンパク質複合体、多糖類、核酸などの化合物を分離するために使用することができます。 有機溶媒が移動相として使用される場合、このプロセスは代わりにゲル透過クロマトグラフィーと呼ばれる。

ゲルろ過クロマトグラフィーはまたに使用することができます:

• 所定のサイズ範囲内の分子および複合体の分画
• サイズ分析および決定
• 大きなタンパク質および複合体の除去
• 緩衝液交換
• 脱塩
• ヌクレオチド、プライマー、色素、汚染物質などの小分子の除去
• ヌクレオチド、プライマー、色素、汚染物質などの小分子の除去
• サンプル純度の評価
• 未結合放射性同位体からの結合の分離

上記のすべての用途のためのゲルろ過クロマトグラフィー媒体は、プリパックされた重力流 中圧クロマトグラフィーカラム、およびボトル入り樹脂。

ゲルろ過クロマトグラフィー機構

ゲルろ過クロマトグラフィーカラムでは、固定相は多孔質マトリックスで構成され、移動相はマトリックスビーズの間を流れる緩衝液である。 ビーズは、分画範囲として知られている定義された細孔サイズ範囲を有する。 細孔に入るには大きすぎる分子および複合体は、移動相にとどまり、緩衝液の流れとともにカラムを通って移動する。 細孔内に移動することができるより小さな分子および複合体は、固定相に入り、ビーズの細孔を通るより長い経路によってゲル濾過カラムを通って

特定のゲルろ過クロマトグラフィーカラムの分画範囲を超える分子または複合体は、固定相に入ること したがって、分画範囲を超える試料中の任意の成分は、分画範囲にあるものの前に最初に（ボイド体積内で）溶出する。 移動相に残り、静止相に入らない最小サイズは、排除限界として知られています。 バイオ-ラッドは、100ダルトンから100,000ダルトン（100kDa）まで、三桁以上の範囲の除外限界を持つゲルろ過クロマトグラフィー媒体とカラムを提供しています。

定常相に入ることができる分子および複合体は、それらのサイズに応じて分画されます。 より小さい分子は気孔に深く移動し、そう容易に気孔に入らない、従ってコラムからよりすぐに溶離されるより多くを遅らせられますより大きい分子。 細孔移動におけるこの差は、最初に最大の溶出を伴うサイズによる成分の分画をもたらす。

脱塩、緩衝液交換、ヌクレオチドなどの小分子の除去のために設計されたゲルろ過クロマトグラフィーカラムでは、塩および小化合物は容易に細孔に入り、遅延され、より大きなタンパク質または核酸よりもカラムを通ってゆっくりと移動する。 したがって、試料中の関心のある成分は、塩、ヌクレオチドなどの前に溶出される。 この機構を用いたDNAクリーンアップキットには、ゲルろ過スピンカラムが含まれていることがよくあります。

解像度は、ここではサイズ分数間の境界の鮮明さとして定義され、ビードサイズおよび他の多くの要因によって決定されます。 より小さいビードのサイズは一般にゲルのろ過クロマトグラフィーカラムの高解像をもたらします。 コンパクト分子は、直線分子よりも速く静止相を通って拡散する。 タンパク質の複雑な混合物の分画のために、溶出時間とサイズ排除限界は経験的に決定する必要があるかもしれません。

ゲルろ過クロマトグラフィー媒体

ゲルろ過クロマトグラフィー媒体の重要な基準は、媒体が不活性であり、サンプルまたは緩衝液には何も結合し 別の考慮事項は、使用されているゲルろ過カラムの種類と、加圧クロマトグラフィーシステムまたは重力流またはスピンカラムで使用されるかどうか 加圧クロマトグラフィーシステムを使用する場合は、カラムと媒体の両方が使用される圧力と流量に耐えることができなければなりません。

ゲルろ過クロマトグラフィーに一般的に使用される媒体は、アガロースまたはポリアクリルアミドビーズ、重力または低圧システムのデキストロース、中圧シ 媒体の選択は、分離される成分の特性および他の実験因子に依存する。 ゲルろ過クロマトグラフィー媒体の選択を決定する際の一般的な考慮事項は次のとおりです:

• 分画範囲
• サイズ排除限界
• 操作圧力
• 流量
• サンプル粘度
• pH範囲
• オートクレーブ性
• 水混和性の許容範囲
• 有機溶媒;いくつかのサンプルは、洗剤、カオトロピック剤、ホルムアミドなどのための水-有機ミックス
• 耐性でより可溶性であってもよいです。
• 動作温度

サンプルの種類、メディアの選択、およびクロマトグラフィーシステムの設定により、特定の精製アプリケーションにとって最も重要なパラ