活性と特異性
DPP8とdpp9は基質と阻害剤の特異性が非常に似ています。 以前に使用されたDPPIV阻害剤の多くもDPP8およびDPP9を阻害するように見えるので、これらの酵素がDPPIVに起因する機能のいくつかに関与している可
DPPIVやDPP8と同様に、dpp9は合成基質のP1位でProを好む。 Ｘ−Ｐｒｏ−Ｎｈｐｈｎｏ２）は疎水性および塩基性残基であり、最も好ましい残基は酸性残基である（Ａｒｇ／Ｍｅｔ／Ｌｅｕ／Ｌｙｓ＜５ ２ ３ ８＞＜５ ２ ３ ８＞Ａｌａ／Ｓｅｒ／Ｇｌｙ＜５ ２ ３ ８＞Ｇｌｕ／Ａｓｐ／Ａｓｎ）。 これまでに入手可能なほとんどのデータは、塩基性Arg-Pro-Nhphno2が親和性の点で好ましい基質であることを示している。 対照的に、回転率は、Ａｌａ−Ｐｒｏ−およびＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｈｐｈｎｏ２と比較してはるかに遅い。 これは、DPPIVのはるかに少ない識別基質特異性とは対照的である。 Dpp9892AaによるVal-Ala-Nhphno2の切断は、P1およびGly-Gly-、Ala-Ala-およびAla-Phe-Nhphno2が加水分解されなかったProと基板よりも効率的ではなかった。
DPP9は、蛍光発生基質Ala-Pro-7-アミノ-3-トリフルオロメチルクマリン（-AFC）およびAla-Pro-、Gly-Pro-、Lys-Pro-、Trp-Pro-、Val-Pro-およびAsp-Pro-AMCを加水分解した。 発色性-Nhphno2基板に関しては、Asp-Pro-AMCは、このシリーズのDPP9のための最も好ましい基板であった。
DPP8とDPP9はMichaelis-Mentenの動態が非常によく似ています。 しかしながら、それらの基質に対する触媒効率は、一般にＤＰＰＩＶの触媒効率よりも低い。 触媒パラメータに関する文献データを比較すると、dpp8とDPP9のいくつかの研究の間には、DPPIVの場合よりも多くの不一致が観察される。 広い利用可能性のために、Ａｌａ−Ｐｒｏ−およびＧｌｙ−Ｐｒｏ−含有発色基質および蛍光生成基質が、ＤＰＰ９活性を決定するために最も頻繁に使用される。 生物学的試料では、アッセイにおけるＤＰＰＩＶによる干渉を排除するために、特定のＤＰＰＩＶ阻害剤を含むことが義務付けられている。Ala-Phe-Pro-Nhphno2、Ala-Ala-Pro-Nhphno2、Ala-Ala-Ala-Nhphno2およびZ-Gly-Pro-Nhphno2を基質として使用すると、RDPP9はトリペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼ活性を欠いている。 SiRNAを有する細胞におけるDPP8またはDPP9の枯渇は、Arg-、Ala-Ala-Phe-およびSuc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMCの切断に影響を及ぼさなかった。 ジペプチド由来の発色および蛍光基質上の最大DPP9活性は、pH範囲pH7.4-8.5で観察された。 PH6.3–6.5の下で組換えおよび自然なDPP9の少し活動は検出されませんでした。 中性ｐ ｈ最適は細胞質局在を支持する。
dppivのために最初に設計されたいくつかの阻害剤はまた、DPP8/9活性を阻害する。 また、タラボスタットとして知られているVal-ボロプロを含むボロン酸ペプチドは、プロリン選択的セリン型プロテアーゼ（DPPII、DPPIV、DPP8、DPP9およびFAP）の様々な強力な阻害剤であることが示された。 アロイソロイシルチアゾリジン、Lys（Z-（NO2））ピロリジンとLys（Z-（NO2））チアゾリジンは、DPPIV上のDPP8/9に向かってわずかに選択的であった。 Α-アミノアシル-（（2S、4S）-4-アジド-2-シアノピロリジン）のシリーズは、DPP8/9とdppivとDPPIIに向かって適度な全体的な選択性のためのナノモル範囲のKi値を持つ化合
イソインドリン部分によるアロイソロイシルチアゾリジンのチアゾリジン環の置換は、DPP8およびDPP9阻害を強化したが、DPPIV阻害は有意に減少した。 Jiaang et al. イソインドリンを含む選択的DPP8/9阻害剤をP1で発見した。 イソインドリンは、P2部位に1-(4,4′-ジフルオロベンジヒドリル)ピペラジンを有する(1G244; PTX1210）は非常に有効で、選択的なDPP8/9抑制剤です。 1G244のIC50値は、それぞれDPP8およびDPP9に対して14および53nMである。 IC50値が100μ Mを超えると、1G244はDPPIV、FAP、またはDPPIIを有意に阻害しないと結論付けることができる。 興味深いことに、それはDPP8の遅い堅い結合の競争の抑制剤ですが、混合物はDPP9の競争およびリバーシブルの抑制剤としてします。 アロイルイソインドリンとは対照的に、1G244は、原形質膜に浸透し、ラットで有意な毒性症状を引き起こさなかった。 イソインドリン模倣の別のシリーズでは、化合物（2S、3R）-2-アミノ-1-（5-フルオロイソインドリン-2-イル）-3-メチルペンタン-1-oneは、効力と選択性の最良のバラン DPP8に対するその抑制可能性は親構造のそれに類似していたが、dpp8と比較してdpp9に対する効力の控えめな、4倍の増加があった。 これまで、DPP8とDPP9の親和性が10倍以上異なる阻害剤は報告されていません。
ジペプチドベースの構造を維持し、p1位置にジアリールホスホネート部分を導入することにより、不可逆的なDPP8/9阻害剤が開発されました。 ビス（4-アセトアミドフェニル）ピロリジン-2-イルと二塩基性P2リジン残基とイソインドリン-1-イル誘導体は、DPP8/9のための強力な阻害剤であった。 このシリーズのイソインドリン由来の阻害剤の数は、DPPIVとDPPIIに関してDPP8とDPP9の良好な親和性と顕著な選択性を組み合わせることが証明されました。