겔 여과 크로마토그래피

겔 여과 크로마토그래피 응용

겔 여과 크로마토그래피,크기 배제 크로마토그래피의 일종 인 겔 여과 크로마토그래피는 샘플에서 특정 크기보다 큰 모든 분자 또는 두 작업의 조합을 제거하기 위해 샘플 내의 분자 및 복합체를 특정 크기 범위의 분획으로 분류하는 데 사용될 수 있습니다. 겔 여과 크로마토 그래피는 수용액에있을 때 작은 분자,단백질,단백질 복합체,다당류 및 핵산과 같은 화합물을 분리하는 데 사용할 수 있습니다. 유기 용매가 이동상으로 사용될 때,과정은 젤 침투 착색인쇄기로 대신 불립니다.

젤 여과 착색인쇄기는 또한을 위해 이용될 수 있습니다:

• 소정 크기 범위 내의 분자 및 복합체의 분별
• 크기 분석 및 결정
• 대형 단백질 및 복합체의 제거
• 완충액 교환
• 탈염
• 뉴클레오티드,프라이머,염료 및 오염물질과 같은 작은 분자의 제거
• 시료 순도 평가
• 결합되지 않은 방사성 동위 원소로부터의 결합 분리

위의 모든 용도에 대한 겔 여과 크로마토 그래피 매체는 사전 포장 된 중력 흐름 컬럼,스핀 컬럼,저압 및 저압 및 저압 및 저압 및 저압 및 저압 및 저압 및 저압 및 저압 및 저압 및 저압 및 저압 중간 압력 착색인쇄기 란 및 병에 넣어진 수지.

겔 여과 크로마토그래피 메커니즘

겔 여과 크로마토그래피 칼럼에서,고정상은 다공성 매트릭스로 구성되고,이동상은 매트릭스 비드 사이에서 흐르는 완충이다. 구슬은 분별 범위로 알려진 정의 된 기공 크기 범위를 가지고 있습니다. 모공에 들어가기에는 너무 큰 분자 및 복합체는 이동 단계에 머물며 버퍼의 흐름과 함께 열을 통해 이동합니다. 모공으로 이동할 수있는 더 작은 분자 및 복합체는 정지 상으로 들어가고 구슬의 기공을 통해 더 긴 경로에 의해 겔 여과 열을 통해 이동합니다.

특정 겔 여과 크로마토그래피 컬럼에 대한 분별 범위 이상의 임의의 분자 또는 복합체는 정지상으로 들어갈 수 있는 임의의 분자보다 더 빠르게 컬럼을 통해 이동할 것이다. 따라서 분별 범위 위에 있는 샘플의 모든 구성 요소는 분별 범위에 있는 모든 구성 요소보다 먼저(무효 볼륨에서)용출됩니다. 이동 단계에 남아 있고 정지 단계에 들어 가지 않는 최소 크기를 제외 제한이라고합니다. 바이오 라드는 젤 여과 크로마토그래피 매체와 100 달톤에서 100,000 달톤(100 달톤)에 이르는 3 개 이상의 배타 한계가있는 컬럼을 제공합니다.

고정상으로 들어갈 수 있는 분자와 복합체는 그 크기에 따라 분별 될 것이다. 더 작은 분자는 숨구멍으로 깊은 곳에서 이동하고 이렇게 쉽게 숨구멍에 들어가지 않는 더 큰 분자 보다는 좀더 지체되고,란에서 이렇게 더 빨리 용출됩니다. 기 공 마이그레이션이 차이 가장 큰 용리 먼저 크기에 의해 구성 요소의 분별 화를 리드.

탈염,완충 교환 및 뉴클레오티드와 같은 작은 분자의 제거를 위해 설계된 겔 여과 크로마토 그래피 컬럼에서 염 및 작은 화합물은 쉽게 기공에 들어가고,지체되고,더 큰 단백질 또는 핵산보다 컬럼을 통해 더 천천히 이동합니다. 따라서,샘플에 대한 관심 성분은 염,뉴클레오티드 등을 미리 용출한다. 이 메커니즘을 사용하는 유전자 정리 키트에는 종종 젤 여과 스핀 컬럼이 포함되어 있습니다.

여기서 크기 분수 사이의 경계의 선명도로 정의 된 해상도는 비드 크기 및 기타 여러 요인에 의해 결정됩니다. 더 작은 구슬 크기는 일반적으로 젤 여과 착색인쇄기 란에 있는 고해상을 열매를 산출합니다. 소형 분자는 선형 분자보다 고정상을 통해 빠르게 확산됩니다. 단백질의 복잡한 혼합물의 분별 화를 위해,용리 시간 및 크기 배제 한계는 경험적으로 결정되어야 할 수도 있습니다.

겔 여과 크로마토그래피 매체

겔 여과 크로마토그래피 매체에 대한 중요한 기준은 매체가 불활성이고 시료 또는 임의의 완충액 중 아무 것도 매체에 결합하지 않는다는 것이다. 또 다른 고려 사항은 사용되는 겔 여과 컬럼의 유형 및 가압 크로마토 그래피 시스템 또는 중력 흐름 또는 스핀 컬럼에 사용되는지 여부입니다. 가압 크로마토그래피 시스템이 사용되는 경우,컬럼과 미디어 모두 사용되는 압력 및 유량을 견딜 수 있어야 합니다.

겔 여과 크로마토 그래피에 일반적으로 사용되는 매질은 아가로스 또는 폴리 아크릴 아미드 비드,중력 또는 저압 시스템 용 덱 스트로스 및 중압 시스템 용 고분자 수지를 기본으로합니다. 미디어의 선택은 분리 할 구성 요소의 속성 및 기타 실험 요인에 따라 다릅니다. 다음은 겔 여과 크로마토 그래피 매체의 선택을 결정할 때 일반적인 고려 사항입니다:

• 분별 범위
• 크기 배제 한계
• 작동 압력
• 유량
• 시료 점도
• 산도 범위
• 오토 클레이브
• 물-혼합 가능한 유기 용매;일부 샘플은 세제,카오 트로픽 제,포름 아미드 등에 대한 물-유기 혼합
• 내성에 더 잘 용해 될 수 있습니다.
• 작동 온도

샘플 유형,매체 선택 및 크로마토그래피 시스템 설정에 따라 주어진 정화 응용 분야에서 가장 중요한 매개 변수가 결정됩니다.