Aktivitet og Spesifisitet
DPP8 og DPP9 har svært lik substrat-og inhibitorspesifisitet. Siden MANGE AV DE TIDLIGERE brukte dppiv-hemmere også ser ut til å hemme DPP8 og DPP9, er det mulig at disse enzymene er ansvarlige for noen av funksjonene som tilskrives DPPIV.
SOM DPPIV og DPP8, FORETREKKER DPP9 Pro På p1-posisjonen til syntetiske underlag . Med Pro fast På P1, (X-Pro-NHPhNO2) restene mest favoriserte AV DPP9 (OG DPP8) På p2 posisjon er hydrofobe og grunnleggende rester, og de minst favoriserte er sure rester (Arg/Met/Leu/Lys>>Ala/Ser/Gly>>Glu/Asp/Asn). De fleste tilgjengelige data indikerer at grunnleggende Arg-Pro-NHPhNO2 er et foretrukket substrat når det gjelder affinitet. Omsetningsraten er derimot mye langsommere sammenlignet Med Ala-Pro-og Gly-Pro-NHPhNO2 . Dette er i kontrast til DEN mye mindre diskriminerende substratspesifikiteten TIL DPPIV. Spaltningen Av Val-Ala-NHPhNO2 ved DPP9892aa var mindre effektiv enn substratene Med Pro ved P1 og Gly-Gly-, Ala-Ala – og Ala-Phe-NHPhNO2 ble ikke hydrolysert .
dpp9 hydrolyserte de fluorogene substratene Ala-Pro-7-amino-3-trifluormetylkoumarin (-AFC) og Ala-Pro-, Gly-Pro-, Lys-Pro-, Trp-Pro-, Val-Pro – og Asp-Pro-AMC . Når Det gjelder kromogene-NHPhNO2-substrater, Var Asp-Pro-AMC det minst foretrukne substratet FOR DPP9 i denne serien.
DPP8 og DPP9 viser Svært like Michaelis-Menten kinetikk. Den katalytiske effektiviteten mot substratene er imidlertid generelt lavere enn DPPIVS. Ved sammenligning av litteraturdata på katalytiske parametre, observerer man flere avvik mellom de flere studiene FOR DPP8 og DPP9 enn det SOM er tilfelle FOR DPPIV. På grunn Av den brede tilgjengeligheten brukes De ala-Pro – og Gly-Pro – holdige kromogene og fluorogene substratene oftest til å bestemme DPP9-aktivitet. I biologiske prøver er det obligatorisk å inkludere en spesifikk dppiv-hemmer for å eliminere interferens AV DPPIV i analysene .
ved Bruk Av Ala-Phe-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Ala-NHPhNO2 Og Z-Gly-Pro-NHPhNO2 som substrater mangler rDPP9 tripeptidase-og endopeptidaseaktivitet . Nedbryting AV dpp8 eller dpp9 i celler med siRNA hadde ingen effekt på spaltningen Av Arg-, Ala-Ala-Phe – Og Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC . Maksimal DPP9-aktivitet på dipeptid-avledede kromogene og fluorogene substrater ble observert i ph-området pH 7,4–8,5 . Under pH 6,3-6,5 liten aktivitet av både rekombinant OG naturlig DPP9 ble påvist. Den nøytrale ph optimum støtter cytoplasmisk lokalisering.
Noen hemmere opprinnelig utviklet FOR DPPIV hemmer OGSÅ DPP8 / 9-aktivitet. Boronsyrepeptider, inkludert Val-boroPro, Også Kjent Som Talabostat, ble vist å være potente hemmere av en rekke prolinselektive serin-type proteaser (DPPII, DPPIV, DPP8, Dpp9 og FAP) . Allo-isoleukyltiazolidin, lys(Z-(NO2))pyrrolidin og Lys(Z-(NO2))tiazolidin var litt mer selektive mot DPP8/9 i forhold TIL DPPIV . En serie av α-aminoacyl – ((2S,4S)-4-azido-2-cyanopyrrolidiner) resulterte i forbindelser med Ki-verdier i nanomolarområdet FOR DPP8 / 9 og en beskjeden samlet selektivitet mot DPPIV og DPPII .
Substitusjon av tiazolidinringen av allo-isoleukyltiazolidin med en isoindolingruppe økte DPP8 – og DPP9-hemmingen, MENS dppiv-hemmingen var signifikant redusert . Jiaang et al. oppdaget selektive dpp8 / 9-hemmere som inneholder en isoindolin ved P1. Isoindolin med en 1 – (4,4 ‘ – difluorobenzhydryl)piperazin På p2-stedet (1g244; PTX1210) ER en svært potent og selektiv dpp8 / 9-hemmer. 1G244 har IC50-verdier på henholdsvis 14 og 53 nM mot DPP8 og dpp9 . MED IC50-verdier større enn 100 µ, kan man konkludere med AT 1G244 ikke hemmer DPPIV, FAP eller DPPII signifikant. Interessant nok er det en langsom bindende konkurrerende hemmer AV DPP8, men forbindelsen oppfører seg som en konkurransedyktig og reversibel hemmer AV DPP9 . I motsetning til allo-Ile-isoindolin penetrerte 1g244 plasmamembranen og forårsaket ikke signifikante toksikologiske symptomer hos rotter . I en annen serie isoindolinmimetikk viste forbindelsen (2S,3r)-2-amino-1-(5-fluoroisoindolin-2-yl)-3-metylpentan-1-one den beste balansen mellom styrke og selektivitet. Selv om det hemmende potensialet mot DPP8 var lik det for foreldrestrukturen, var det en beskjeden, firefold økning i potens mot DPP9 sammenlignet MED DPP8 . Hittil er det ingen inhibitorer rapportert hvis affinitet for DPP8 og DPP9 er forskjellig mer enn ti ganger.
ved å holde den dipeptidbaserte strukturen og introdusere en diarylfosfonatdel I p1-posisjonen, ble irreversible dpp8/9-hemmere utviklet. Bis (4-acetamidofenyl)pyrrolidin-2-yl og isoindolin-1-yl-derivater med en dibasisk p2-lysinrest var potente hemmere FOR DPP8 / 9. En rekke isoindolin-avledede hemmere i denne serien viste seg å kombinere en god affinitet og uttalt selektivitet FOR DPP8 og DPP9 med HENSYN TIL DPPIV og DPPII .