2 R6/2 Transgene Mus
r6-linjen ble utviklet i laboratoriene Til Gill Bates fra en pronukleær injeksjon av Et 1,9 kb Sacl-EcoRI-fragment ved bruk av 5′ enden av det humane hs-genet avledet fra EN HS-pasient. Den består av ∼1 kb av 5 ‘ UTR-sekvenser, ekson 1 som bærer CAG-gjentakelser av ∼130 enheter, og de første 262 bp av intron 1. R6 / 2-linjen var DEN første transgene musemodellen AV HD. Den har en topp størrelse på 144-150 gjenta enheter på exon 1 (Mangiarini et al., 1996). Det er en av de mest brukte genetiske modellene FOR HS. R6 / 2-modellen viser en progressiv homogen HD – lignende fenotype, med overlevelse fra 14 til 21 uker, avhengig av bolig-og anleggsforhold. Forskjeller i overlevelsesvarighet kan være et resultat av variasjoner i bolig, håndtering, miljøberikelse og den tillatte tilstedeværelsen av virale og bakterielle symbionter, i tillegg til andre faktorer. Gitt at berikede miljøer kan endre utviklingen av atferdsfenotype I r6 / 2-mus(Hannan, 2004), står det til grunn at forskjeller mellom laboratorier kan endre r6/2-fenotypen. R6 / 2 mus som for tiden er tilgjengelige i kommersielle vivaria har en mye lavere cag-gjentakelse enn de som tidligere ble brukt i eksperimentelle studier. Ovennevnte problemer mandat som, innenfor en koloni Av R6 / 2 mus, cag gjenta størrelse er avgjørende for eventuelle funn og en repeterbar måling av overlevelse og andre fenotypiske utfallsmål er avgjørende for hver påfølgende » f » generasjon for sammenligning med andre studier.
Atferdsanalyser av R6 / 2 mus showage-relaterte svekkelser i dystoniske bevegelser, motorytelse, grepsstyrke og kroppsvekt som gradvis forverres til døden. R6 / 2 mus er utsatt anfallsaktivitet (status epilepticus) og plutselig død, spesielt i sluttstadiet sykdom, selv om anfall kan oppstå så tidlig som 60 dager. Overhandling og andre stressfaktorer forverrer anfallsaktiviteten. Nevropatologiske følger som inkluderer økende markert reduksjon i hjernevekt, er tilstede fra 30 dager, mens redusert hjernevolum og hyperventrikulær forstørrelse er tilstede fra 60 dager, begge et kjennetegn på den menneskelige sykdommen. I tillegg, redusert neostriatal volum, striatal neuron atrofi, økt astrogliosis, og en reduksjon i striatal neuron antall, er til stede ved 90 dagers alder (Stack et al., 2005). I tillegg, i samsvar med TIDLIG hs i voksen ALDER, reduseres enkefalin striatale nevroner sammenlignet med substance-P striatale projeksjonsneuroner (Sun et al., 2002) med lik bevaring av enkefalin og substans-p striatonigral projeksjoner. Huntingtin-positive aggregater er tilstede ved postnatal dag 1 og øker i antall og størrelse med alderen, noe som tyder på at sykdomsutbrudd og progresjon oppstår før kliniske fenomener foreligger (Stack et al., 2005). Inneslutninger av huntingtin er omfattende og finnes i store mengder i hjernen, et fenomen som er uforenlig med det som er observert hos HS-pasienter. Det har blitt foreslått at sistnevnte kan være et resultat av å bruke bare en del AV hs-genet, transgene effekter og / eller bruk av utenlandske promotorer som øker ekspresjonsnivåene. Det ser ikke ut til å være noen kjønnsforskjeller i den patologiske fenotypen. Det er parallellisme mellom de rapporterte mekanismene for sykdomspatogenese observert hos HS-pasienter og de som finnes I r6 / 2-musene, som inkluderer endret proteolyse og proteosomale aktiviteter, økt proteinkryssing, indusert chaperonuttrykk og defekter i vitale cellulære prosesser som omfatter endocytose, intraneuronal trafficking, transkripsjonell regulering, postsynaptisk signalering, apoptotiske kaskader og endringer i bioenergetisk metabolisme og mitokondriell funksjon (Beal and Ferrante, 2004; Ryu et al.( 2005; Stack Og Ferrante, 2007). Mens r6 / 2-modellen har mange av de kliniske og nevropatologiske trekkene som er observert hos HS-pasienter, er det ikke en eksakt genetisk og nevropatologisk match med HS-pasienter. Likevel har r6 / 2-modellen en godt karakterisert progressiv fenotype med moderat variabilitet, slik at eksperimentelle grupper kan inneholde så få som 10 mus og gi kraft til å oppdage forskjeller i mange utfallsmål. Det er mulig å utføre overlevelsesstudier, en viktig potensiell surrogatindikator for nevrobeskyttelse, i ca 3 måneder fra fødselen. Effektiviteten og klare eksperimentelle endepunkter For R6/2-musene forblir en stor fordel.
det kan være stor variasjon i fenotypepresentasjon, som er avhengig AV CAG-repetisjonsstørrelse. Antall cag-repetisjoner I r6 / 2-linjen er 148-153 med 500-550 bp, som bestemt AV PCR-analyse (Stack et al., 2005). Et økt antall basepar > 550 resulterer i en moderering Av r6 / 2 fenotype alvorlighetsgrad. Med økende basepar tall, er det en samtidig økning I cag gjenta størrelse. Basepar som varierer mellom 600 og 800 har cag-repetisjonsstørrelser mellom 175 og 192 i r6/2-mus, og gjennomsnittlig overlevelsesforlengelse øker signifikant til omtrent 131 dager, i motsetning til 500-550 bp ved 98 dager. Basepar tall på 1000 og over har cag gjenta størrelser konsekvent over 200, med en gjennomsnittlig overlevelse på 148 dager. Variabiliteten i overlevelse og forbedring av atferds-og nevropatologisk fenotype I r6/2-mus med økt baseparnummer og cag-repetisjonsstørrelse kan redusere deres nytte i terapeutiske studier og kan forvirre eksperimentelle resultater (Stack et al., 2005). Selv om stor variasjon i kliniske tiltak er vanlig i menneskelige studier, minimerer målevariabilitet øker kraften til å oppdage forskjeller, spesielt i musemedisinforsøk. Dermed skal laboratorier som bruker disse musene sikre at genetisk variabilitet reduseres, noe som gir en relativt homogen populasjon av mus innenfor eksperimentelle kohorter.