Resultater og Diskusjon
PCR-Rflp analyse viste restriksjonsmønstre kompatibel med i silico analyse. Alle hunder med halefeil presenterte samme mønster (3 fragmenter, 2 synlige bånd), som var forskjellig fra det som presenteres av hunder med normal hale (2 fragmenter, 1 synlig bånd) (Fig.1). En annen analyse, også BASERT PÅ PCR-RFLP, ble vellykket brukt til å identifisere den samme mutasjonen I t-genet hos hunder, men ved hjelp av et polyakrylamidgelelektroforese system (Gruszczynska & Czapla 2011). Utførelsen av polyakrylamidgelelektroforese kan forbedre oppløsningen av bånd i forhold TIL DNA-fragmenter i den foreliggende studien. Men praktisk vil bli redusert, siden dette systemet er mer arbeidskrevende. I denne studien, selv om det ikke var mulig å visualisere ALLE DNA-fragmentene generert etter fordøyelsen, var det mulig å enkelt skille genotyper ved hjelp av agarose gelelektroforese.
Fig.1. PCR-RFLP for påvisning AV c189g-mutasjon. Markør av basepar (M), berørte hunder-kort hale (1-7) og dyr med normal hale (8).
i analysen av sekvenserte prøver ble heterozygositet C (cytosin) G (guanin) observert i nukleotid 189 av ekson 1 bare hos hunder med halefeil. Plasseringen av mutasjonen var basert På t-genet mRNA-sekvensen tilgjengelig I Genbank (tiltredelsesnummer: AJ245513).
ved silikoanalysen ble det også observert endring av aminosyre 63 fra isoleucin til metionin. ALLE DNA-sekvenser oppnådd i denne studien ble deponert I Genbank under tiltredelsesnumre: MF495488 (kort hale), MF495489 (fravær av hale), MF495490 (fravær av hale) og MF495491 (normal hale).
Selv om bare en genotype ble funnet for den nåværende tilstanden (CG for dyr med halefeil), ble det observert en fenotypisk variasjon hos berørte hunder, som er halestørrelsen. Noen dyr presenteres kort hale (ca 3-4 ryggvirvler), og andre viste fravær av halen (ca 1-2 ryggvirvler) (Fig.2). Lignende fenotyper ble også observert Av Haworth et al. (2001) i hunder. Selv om en forklaring på dette ennå ikke er kjent hos hunder, Buckingham et al. (2013), studerer medfødt hale størrelse variasjon i katter, funnet bevis for haploinsufficiency forårsaket av flere mutasjoner I t-genet. C. 1199delc, c.1169delc og c.998delT mutasjoner var assosiert med forskjellige nivåer av genuttrykk, noe som kunne forklare de forskjellige fenotypene blant hunder med halefeil (Buckingham et al. 2013).
Fig.2. (A) Hund som bærer mutasjon C189G I t-genet. (B) Hund fra samme kull uten c189g mutasjon.
den arvelige karakteren av mutasjonen kan påvises ved heredogramanalysen(Fig .3) av kullet studert. Det var mulig å verifisere at mutasjonen har et autosomalt dominant arvemønster. Imidlertid ble det ikke funnet noen dominerende homozygot (GG) genotype i denne studien, og forsterker observasjonene at når det er homozygose, forårsaker det muterte t-genet fosterdød (Haworth et al. 2001). Hytonen et al. (2009) observert at kull fra kryss mellom normalhale dyr (CC genotype) var 29% større enn kull fra kryssbredde mellom misdannede haledyr (CG genotype). Dette resultatet er kompatibelt med den forventede reduksjonen på 25% hos avkom fra kryss som involverer dødelige alleler.
Fig.3. Heredogram som viser arvemønsteret TIL C189G-mutasjonen I T-genet Av Labrador Retriever. Kryssing mellom morforeldre (I), kull av den berørte hunden og krysset med normal mann (II) og kull analysert (III).
Mutasjoner I t-genet har vært assosiert med hale misdannelse i andre arter som mus og katter (Wilson et al. 1995, Buckingham et al. 2013). Og i noen av dem observeres også andre endringer, som urin og fekal inkontinens hos katter (Robinson 1993). Men i hunder, til dags dato, bare hale misdannelse har blitt observert i heterozygote dyr (CG) (Indrebo et al. 2008). Selv om det i noen hunderaser» hale misdannelse » fenotype ikke var forbundet MED c189g mutasjon (Boston Terrier, engelsk Bulldog, King Charles Spaniel, Miniatyr Schnauzer, Parson Russell Terrier, Og Rottweiler), det store antallet raser berørt antyder en gammel mutasjon(Hytonen et al. 2009), å være til stede i forfedre hunder før dannelsen av mange raser. Imidlertid kan interracial kryssing også ha bidratt til mutasjonsdiffusjonen, siden CG heterozygote dyr ser ut til å ha ingen libido eller reproduktive ytelsesendringer. En annen faktor som kan ha bidratt til mutasjonsdiffusjon var bruken i reproduksjon av hunder uten hale, når estetisk kaudektomi fortsatt var tillatt. I denne perioden er det sannsynlig at mange dyr med halegenese har blitt brukt som reproducere, siden halefravær var ønskelig hos noen raser, noe som bidro til mutasjonsdiffusjonen.
for Tiden er praksis med caudektomi (kirurgisk halefjerning) en forbudt prosedyre i flere land i verden, for eksempel Eu og Brasil (Haworth et al . 2001, CFMV 2013). I Noen Eu-land brukes genetiske tester for å identifisere c189g-mutasjonen I t-genet for å verifisere om fraværet av hale i noen raser er av medfødt opprinnelse eller dyrene gjennomgikk uregelmessig kirurgisk prosedyre. PCR-RFLP brukt i denne studien var en enkel og nøyaktig teknikk for å identifisere denne mutasjonen og kunne brukes som bevis for å identifisere ulovlig caudectomy praksis.
på grunn av mangel på INFORMASJON OM c189g mutasjon i t-genet av hunder, er det ingen ytterligere informasjon om sin tilknytning til andre morfologiske eller fysiologiske tegn, og derfor må undersøkes.