niniejszym opisujemy przypadek 15-letniego chłopca, u którego zdiagnozowano ciężką alergię na jaja, który został skierowany do naszej kliniki, ponieważ nigdy nie otrzymał szczepienia MMR, mimo że było to obowiązkowe. W związku z tym nie mógł zostać przyjęty do szkoły, dalej. Jego rodzice uznali szczepienie MMR za wysoce ryzykowne ze względu na jego alergię na jaja.
przeprowadzono dokładne badania alergologiczne.
jeśli chodzi o historię kliniczną, odnotowano pojedyncze działanie niepożądane na jaja, które wystąpiło we wczesnym dzieciństwie (9 miesięcy), po pierwszym spożyciu gotowanego jaja. Zazwyczaj objawy obejmowały świszczący oddech, duszność, zmiany głosu, kaszel, płacz i bladość. Szybki udział dróg oddechowych wskazywał, że reakcja była ciężka (dziecko było hospitalizowane i leczone kortykosteroidami i lekami przeciwhistaminowymi). Po tym wydarzeniu jaja zostały całkowicie wyłączone z diety dziecka. Ponadto, gdy dziecko miało 9 lat, cierpiał na wstrząs anafilaktyczny, po spożyciu orzeszków piniowych.
ilościowe SPT przeprowadzono z szeregiem 36 dostępnych na rynku alergenów spożywczych (Lofarma, Mediolan, Włochy), odzwierciedlających spektrum alergii pokarmowej w południowych Włoszech (gdzie ludzie spożywają typową dietę śródziemnomorską). Wykryto wiele uczuleń, w tym orzeszki ziemne, migdały, orzechy laskowe, pszenicę, a zwłaszcza białko jaja (Fig. 1a). Wykonywaliśmy również „kutas po ukłuciu”, testując również upieczone ciasto (biszkopt; dobrze ugotowane jajka) i ugotowane jajko (ugotowane na twardo; rys. 1B). Wyniki wyrażono w postaci stosunku powierzchni bąbla alergenowego do powierzchni bąbla egzogennego histaminowego (tzw. Skin Index). Ponadto bąble uzyskane z białka jaja, białka jajka gotowanego na twardo i jajka pieczonego były większe niż 5 mm (średnia średnica), co w dzieciństwie uważano za związane z wysoką specyficznością . Badania te wykazały, że chłopiec był uczulony na wiele alergenów pokarmowych i że alergia na jaja była nadal obecna. Jeśli chodzi o inne wykryte uczulenia na żywność, młody pacjent stwierdził, że może jeść produkty pochodzenia pszennego (chleb, makaron itp.), migdały, fasola i nasiona słonecznika, bez żadnych objawów alergii. Miał skromne objawy (obrzęk naczynioruchowy warg) po sporadycznym spożyciu zielonego groszku i orzechów laskowych, podczas gdy nie pamiętał, że kiedykolwiek jadł orzeszki ziemne, mątwy, ośmiornice i małże, wszelkiego rodzaju, co sugeruje istnienie prawdziwej nietolerancji dla tych pokarmów.
wykrywanie IgE In vivo i in vitro. ilościowy SPT dla dostępnego w handlu zestawu alergenów spożywczych. Wyniki są wyrażone w kategoriach wskaźnika skóry, i.e. stosunek między obszarem bąbla alergenowego a obszarem egzogennej histaminy (10 mg / ml) bąbla referencyjnego. b ilościowe SPT dla dostępnego w handlu ekstraktu jajecznego (białko jaja i żółtko), i ukłucie po ukłuciu z gotowanym jajkiem (białko jaja i żółtko) i jajkiem pieczonym (biszkopt). Wyniki wyrażone w kategoriach indeksu skóry, również. c całkowite IgE w surowicy i IgE swoiste dla alergenów jaj, mierzone za pomocą ImmunoCAP. D ilościowe SPT ze szczepionką MMR (nierozcieńczoną); ilościowe testy śródskórne ze szczepionką MMR, odpowiednio w rozcieńczeniach 1:100 i 1:10. Wyniki są wyrażone jako obszary bąbla (mm2). Egzogenna histamina (0,002 mg/ml) została wykorzystana do pozytywnej kontroli w testach śródskórnych
ponadto, za pomocą ImmunoCAP (Thermo Fisher Scientific, Milan), oceniliśmy specyficzny poziom IgE w surowicy dla białka jaja, OVM, komórek jajowych i OVT. Wykryte wartości były prognostyczne dla klinicznie istotnych reakcji po spożyciu jaj, potwierdzając wyniki testu skórnego (rys. 1c). Całkowite poziomy IgE były szczególnie wysokie (rys. 1c).
po ocenie alergii na jaja wykonaliśmy SPT z czystą szczepionką MMR, która okazała się negatywna. Następnie wykonaliśmy testy śródskórne z dwoma zwiększającymi się rozcieńczeniami szczepionki MMR (tj. 1/100, 1/10). Zgodnie z oczekiwaniami, również ta procedura okazała się negatywna (rys. 1d). Ponadto 100 µl 1/10 rozcieńczenia szczepionki MMR wstrzyknięto podskórnie (test iniekcyjny). Nie obserwowano natychmiastowej reakcji, zarówno miejscowej, jak i ogólnoustrojowej.
wreszcie, w celu potwierdzenia braku specyficznych dla szczepionek klonów limfocytów B, co potwierdzałoby wyniki uzyskane in vivo, wykonaliśmy również test proliferacji limfocytów B ex vivo (Fig. 2a-d). Dzięki takiemu podejściu badano również możliwą opóźnioną reakcję alergiczną na składniki szczepionki MMR (proliferację swoistych dla szczepionki komórek T). Tak więc, komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) wyizolowano zgodnie z opisem i zabarwiono estrem sukcynimidylu karboksyfluoresceiny (CFSE; 5 µM) przez 5 minut, przemyte i hodowane w zmodyfikowanym pożywce Dulbecco 's Eagle’ s medium (DMEM), uzupełnione 10% surowicy pacjenta. Te PBMC wystawiono na działanie 3 różnych rozcieńczeń szczepionki (odpowiednio 1/4000, 1/400 i 1/40), w trzykrotnych mikro hodowlach (2 × 105 PBMC w 200 µl), utrzymywanych w temperaturze 37 °C w 5% nasyconej parą atmosferze CO2. Jako kontrolę negatywną zastosowano hodowle bez dodatku szczepionki. Po 48 godzinach PBMC zebrano, przemyto i zabarwiono przeciwciałami anty-CD19 i anty-CD3 sprzężonymi z fluorochromem, przez 20 minut. Po dalszym przemywaniu komórki analizowano metodą cytometrii przepływowej (navios 3L 10C, Beckman Coulter, Milan) w celu wykrycia proliferacji limfocytów B I T. Co ważne, nie zaobserwowano proliferacji limfocytów B (komórek CD19+) w obecności szczepionki MMR (Fig. 2a-e). Nie zaobserwowano także proliferacji komórek CD3+ (dane nie zostały przedstawione).
test proliferacji komórek B ex vivo. Proliferacja komórek oceniana przez zmniejszenie intensywności CFSE: a w mikrokulturach nieleczonych komórek B; B-limfocyty B inkubowane przy rozcieńczeniu szczepionki 1:4000 MMR; C-limfocyty B inkubowane przy rozcieńczeniu szczepionki 1:400 MMR; i wreszcie d-limfocyty B inkubowane przy rozcieńczeniu szczepionki 1: 40 MMR. Wyniki odnoszą się do jednego z 2 przeprowadzonych testów proliferacyjnych. W wskaźnikach stymulacji E dla powyższych rozcieńczeń szczepionki 3 MMR. Średnie z 2 testów. Wskaźnik stymulacji jest stosunkiem między szybkością proliferacji komórek narażonych na potencjalny czynnik proliferacyjny a podstawową szybkością proliferacji komórek kontrolnych. Wskaźnik stymulacji ≥ 2 wskazuje na znaczącą specyficzną aktywność proliferacyjną. Rozpraszacz boczny SSC, ester sukcymydylu karboksyfluoresceiny cfse
opierając się na tych dalszych dowodach, podaliśmy chłopcu szczepionkę MMR w dwóch 50% dawkach, po 250 µl każda, w odstępie jednej godziny między dwoma wstrzyknięciami. Pacjent pozostawał pod obserwacją przez 1 godzinę (po drugim wstrzyknięciu). Zgodnie z oczekiwaniami nie obserwowano natychmiastowych ani opóźnionych działań niepożądanych. W związku z tym mógł zostać ponownie przyjęty do szkoły.
dziewięć miesięcy później powtórzono test proliferacji limfocytów B z podobnymi wynikami (Fig. 2e). Następnie przeprowadzono drugie podanie szczepionki MMR, zgodnie z określonym schematem szczepienia.