2 R6 / 2 Transgenic Mice
The R6 line was developed in the laboratories of Gill Bates from a pronuclear injection of a 1.9 kb Sacl-EcoRI fragment using the 5′ end of the human HD gene derived from an HD patient. É composto por 262 1 kb de 5′ sequências UTR, exon 1 Carregando repetições de CAG de 130 130 unidades, e o primeiro 262 bp do intron 1. A linha R6/2 foi o primeiro modelo transgênico do mouse HD. Tem um pico de 144-150 unidades repetitivas em exon 1 (Mangiarini et al., 1996). É um dos modelos genéticos mais utilizados de HD. O modelo R6/2 exibe um fenótipo semelhante ao HD progressivo, com Sobrevivência variando de 14 a 21 semanas, dependendo das condições de alojamento e instalação. As diferenças na duração de sobrevivência podem ser o resultado de variações no alojamento, manipulação, enriquecimento ambiental e a presença permitida de simbiontes virais e bacterianos, além de outros fatores. Dado que ambientes enriquecidos podem alterar a progressão do fenótipo comportamental em ratos R6/2 (Hannan, 2004), é lógico que as diferenças entre laboratórios podem alterar o fenótipo R6/2. Os ratos R6 / 2 actualmente disponíveis em vivaria comercial apresentam uma repetição de GAC muito inferior à utilizada anteriormente em estudos experimentais. As questões acima mandatam que, dentro de qualquer colônia de ratos R6/2, O tamanho de repetição do GAC é fundamental para quaisquer achados e uma medição repetível da sobrevivência e outras medidas de resultado fenotípico são fundamentais para cada geração “f” sucessiva para comparação com outros estudos.
análises comportamentais das deficiências relacionadas com a exposição do rato em movimentos distónicos, desempenho motor, força de aderência e peso corporal que se agravam progressivamente até à morte. Os ratinhos R6/2 são propensos à ocorrência de crises (estado epiléptico) e de morte súbita, particularmente na doença em fase terminal, embora as crises possam ocorrer logo aos 60 dias. O excesso de mão e outros factores de stress exacerbam a actividade convulsiva. As sequelas neuropatológicas que incluem o aumento de reduções marcadas no peso do cérebro, estão presentes a partir de 30 dias, enquanto que a diminuição do volume do cérebro e o aumento hiperventricular estão presentes a partir de 60 dias, ambos um traço característico da doença humana. Além disso, diminuição do volume neostriatal, atrofia neuronal estriatal, aumento da astrogliose, e uma redução no número de neurônios estriatais, estão presentes aos 90 dias de idade (Stack et al., 2005). Além disso, consistente com o aparecimento precoce de HD em adultos, os neurónios estriados de enkephalin são reduzidos em comparação com os neurónios estriatais de substância-P (Sun et al., 2002) com a mesma preservação das projecções estriatonigrais enkephalin e substance-P. Os agregados Huntingtin-positivos estão presentes no dia 1 pós-natal e aumentam em número e tamanho com a idade, sugerindo que o aparecimento e progressão da doença ocorrem antes da presença de fenómenos clínicos (Stack et al., 2005). As inclusões huntingtin são extensas e encontradas em grande número em todo o cérebro, um fenômeno que é inconsistente com o observado em pacientes HD. Tem sido sugerido que este último pode ser o resultado de usar apenas uma parte do gene HD, efeitos transgênicos, e/ou o uso de promotores estrangeiros que aumentam os níveis de expressão. Não parecem existir diferenças de género no fenótipo patológico. Não há paralelismo entre o relatado mecanismos de patogênese da doença observada nos doentes de huntington e os encontrados no R6/2 ratos, que incluem mudança proteólise e proteosomal atividades, o aumento de proteína de reticulação induzida acompanhante de expressão, e defeitos em processos celulares vitais que compõem endocitose, intraneuronal tráfico, transcricional regulamento, pós-sinápticos de sinalização, apoptótico cascatas, e alterações no metabolismo bioenergético e função mitocondrial (Beal e Ferrante, 2004; Ryu et al., 2005; Stack and Ferrante, 2007). Embora o modelo R6 / 2 tenha muitas das características clínicas e neuropatológicas observadas em pacientes HD, não é uma combinação genética e neuropatológica exata com pacientes HD. No entanto, o modelo R6/2 tem um fenótipo progressivo bem caracterizado com variabilidade moderada, tal que grupos experimentais podem conter apenas 10 ratos e fornecer o poder de detectar diferenças em muitas medidas de resultado. É possível realizar estudos de sobrevivência, um importante indicador potencial substituto para a neuroprotecção, em aproximadamente 3 meses a partir do nascimento. A eficiência e os objectivos experimentais claros dos ratos R6/2 continuam a ser uma grande vantagem.
pode haver uma grande variabilidade na apresentação fenótipo, que depende do tamanho de repetição do CAG. O número de repetições de GAC na linha R6/2 é de 148-153 com 500-550 bp, determinado pela análise PCR (Stack et al., 2005). Um aumento do número de pares de bases > 550 resulta numa moderação da gravidade do fenótipo R6/2. Com o aumento do número de pares de base, há um aumento concomitante no tamanho de repetição do GAC. Os pares de Base que variam entre 600 e 800 têm tamanhos repetidos de CAG entre 175 e 192 em ratinhos R6/2 e a extensão média de sobrevivência aumenta significativamente para aproximadamente 131 dias, em contraste com 500-550 bp a 98 dias. Os números de pares de Base de 1000 ou mais têm CAG tamanhos repetidos consistentemente acima de 200, com uma sobrevivência média de 148 dias. A variabilidade na sobrevivência e a melhoria do fenótipo comportamental e neuropatológico em ratinhos R6/2 com um número de pares de base aumentado e tamanho repetido de CAG podem reduzir a sua utilidade em ensaios terapêuticos e podem confundir os resultados experimentais (Stack et al., 2005). Embora grande variabilidade nas medidas clínicas seja comum em ensaios em seres humanos, a minimização da variabilidade da medição aumenta o poder de detectar diferenças, particularmente em ensaios clínicos em ratos. Assim, os laboratórios que utilizam estes ratos devem assegurar a redução da variabilidade genética, proporcionando uma população relativamente homogénea de ratos dentro de coortes experimentais.