17.4.4.3 Saponins
In an attempt to study the contribution of saponins to the antidiabetic and antiobesity effect of fenugreek seeds, Uemura et al. (2011) examinou o metabolismo lipídico hepático/lipogénese em ratos KK-Ay obesos diabéticos que foram alimentados com HFD (60% da energia como gordura) durante 4 semanas na presença ou ausência de 0, 5% ou 2% de feno-grego. Eles observaram que os níveis de expressão hepática e plasmática TG e mRNA dos genes lipogênicos foram reduzidos pela suplementação de 2%, mas não 0,5% de sementes. Curiosamente, estudos in vitro utilizando células hepatócitos HepG2 mostraram que foi a fracção da saponina hidrolisada, mas não a saponina inteira, que foi responsável pela inibição observada da acumulação de TG. Um outro estudo de fraccionamento guiado pelo bioensaio revelou que a diosgenina era o princípio activo, uma vez que a concentração de 5 ou 10 µM foi suficiente para inibir a acumulação de TG e a expressão de genes lipogénicos nas células HepG2. Outros testes de mudança da luciferase e do gel confirmaram que a diosgenina inibe a transactivação do fígado-x-receptor-α (LXR α). No modelo de teste IGGT em ratinhos a receber HFD, observou-se uma melhoria do controlo da glucose por saponinas furostanólicas do feno-grego, juntamente com o TG sérico que foi elevado após a alimentação com HFD (Hua et al., 2015).
em experiências em animais que imitam o T1D e o T2D, a diosgenina surgiu como um princípio activo proeminente que deve ser seriamente considerado como um potencial agente terapêutico. Nos modelos de rato induzidos pela STZ e outros modelos de rato T2D, por exemplo, efeitos hipoglicémicos (Kalailingam et al., 2014; Pari et al., 2012; Saravanan et al., 2014; Sangeetha et al., 2013) foram bem demonstrados, enquanto outros marcadores de diabetes como a HbA1c também foram mostrados como suprimidos (Kalailingam et al., 2014; Pari et al., 2012). As anomalias associadas à diabetes evidenciadas pela supressão dos níveis séricos de marcadores, tais como ALT e AST, aumento das defesas antioxidantes, tal como evidenciado pelo aumento da dose de SOD, CAT, GSH, GSH-peroxidase (GPx) ou redução das doses de TBARS e ROS (Kalailingam et al., 2014; Pari et al., 2012; Sangeetha et al., 2013; Son et al., 2007; Tharaheswari et al., 2014) são todos observados para este composto. Outra actividade biológica interessante deste composto nestes modelos animais relevantes para o controlo glicémico é o seu efeito supressivo na glucose-6-fosfatase (G6Pase), enquanto a actividade da GK é aumentada e o nível de glicogénio hepático é aumentado (Kalailingam et al., 2014; Tharaheswari et al., 2014). O efeito de redução dos lípidos do composto também foi demonstrado nos vários modelos diabéticos, HFD e ratos obesos diabéticos (por exemplo, ratos KK-Ay). Assim, foi documentada uma redução nas LDL séricas, TC sérico, FFAs, TG sérico, colesterol hepático, esteatose hepática, tamanho adipócito menor, e um aumento das HDL séricas, excreção de colesterol, secreção de colesterol biliar, aumento da adipogénese (Kalailingam et al., 2014; Sangeetha et al., 2013; Tang et al., 2011; Tharaheswari et al., 2014; Turer et al., 2012). A melhoria na lipídico e glicémico controle o composto também pode resultou do seu conhecido efeito anti-inflamatório, tanto in vitro e in vivo, como evidenciado a partir da supressão de nível e atividade de macrófagos chemoattractant protein-1 (MCP-1), TNF-α, interleucina-6 (IL-6), NF-kB, e o aumento de leptina, PPAR-γ, a redução na infiltração de macrófagos e adipócito inflamação (Hirai et al., 2010; Tharaheswari et al., 2014; Uemura et al., 2010). Foram também notificadas reduções da activação da SREBP-1c, FAS, estearoil-CoA desaturase (SCD-1), da acetil-CoA carboxilase (ACC) e da LXRa em modelos celulares (HEPO-G2) e em modelos diabéticos animais obesos (Turer et al., 2012). O potencial anti-inflamatório e antioxidante deste composto esteróide nas várias células primárias cultivadas (por exemplo, células endoteliais, Manivannan et al., 2013a) e modelos animais de isquemia (Badalzadeh et al., 2014; Liu et al., 2012b; Manivannan et al., 2013b), lesão renal (Manivannan et al., 2014; Salimeh et al., 2013) também foram amplamente relatados. Todos estes dados mostraram que uma redução do nível de citoquinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1 e IL-6), sinais pró-inflamatórios (IKK-β e NF-kB), inflamação intestinal (por exemplo, Yamada et al., 1997); ROS, NO, lipid peroxidation and LDH; increased in antioxidant defences (GSH, SOD, and CAT) are induced by this compound. Os efeitos supressivos nas alterações inflamatórias dentro de interacções específicas entre adipócitos e macrófagos também foram bem documentados (Hirai et al., 2010).
Tratamento de KK-Ay ratos com uma ração hl suplementado com 2% de feno-grego tem sido mostrado para melhorar a diabetes, juntamente com a redução do tamanho dos adipócitos e aumento nos níveis de expressão de mRNA de diferenciação relacionados a genes no tecido adiposo; inibição da infiltração de macrófagos no tecido adiposo e diminuição nos níveis de expressão de mRNA de genes inflamatórios (Uemura et al., 2010). Da mesma forma, a diosgenina promove a diferenciação adipocitária e inibe os níveis de expressão de vários candidatos moleculares associados à inflamação em células 3T3-L1 (Uemura et al., 2010). As propriedades hipocolesterolémicas do extracto de etanol de sementes de feno-grego desengorduradas também foram investigadas por Stark e Madar (1993). O fraccionamento do extracto de etanol bruto por diálise levou ao agrupamento das saponinas, identificadas com o seu perfil TLC e propriedades hemolíticas. O dialisato, que se verificou conter saponinas quando avaliado por cromatografia de camada fina, demonstrou inibir a absorção de taurocolato e deoxicolato de uma forma dose-dependente; enquanto em dois experimentos de alimentação separados (30 ou 50 g de extrato de etanol/kg durante um período de 4 semanas), ratos hipercolesterolêmicos mostraram uma redução nos níveis de colesterol plasmático variando de 18% a 26%. Foi também observada uma tendência para concentrações mais baixas de colesterol hepático. O extracto etanol de sementes de feno-grego enriquecido com saponinas é, assim, capaz de apresentar efeito hipocolesterolémico através da interacção com sais biliares no tracto digestivo.
Petit et al. (1995) demonstraram que as saponinas (tipo furostanol) concentradas em, pelo menos, 90% do extracto têm um efeito profundo no comportamento alimentar e alterações endócrinas metabólicas em ratos diabéticos normais e STZ quando administradas cronicamente (12, 5 mg/dia por 300 g de peso corporal, P.O.). Observaram um aumento significativo na ingestão de alimentos e na motivação para comer em ratos normais, ao mesmo tempo que modificaram o ritmo circadiano do comportamento alimentar. As saponinas do feno-grego estabilizaram também o consumo alimentar em ratos diabéticos, o que resultou num aumento progressivo de peso nestes animais. Tanto em ratos normais como em ratos diabéticos, as saponinas esteróides diminuíram TC sem qualquer alteração na TG.
uma vez que todas as experiências em animais acima mencionadas demonstraram que a diosgenina é bem tolerada com uma toxicidade limitada nas doses terapeuticamente aplicáveis, o composto tem potencial terapêutico para ser explorado como agente antidiabético e hipolipemiante. Os estudos de toxicidade subcrónica sobre o composto também estão de acordo com esta conclusão (Qin et al., 2009). Considerando a longa lista de saponinas isoladas a partir de sementes de feno-grego (secção 17.3.2), não há dúvida de que mais princípios ativos baseados na saponina seriam descobertos a partir de sementes de feno-grego no futuro. Estes compostos também são altamente solúveis em água e passam por membranas devido à sua natureza anfifílica. De facto, após a administração oral de uma dose única (200 mg/kg) em ratos, os glicosídeos de furostanol puderam ser detectados no pulmão e mesmo no cérebro, o que indicava que podiam atravessar a barreira hemato–encefálica. Eles também exibem uma distribuição lenta para os tecidos, mas tem rápida eliminação renal (Kandhare et al., 2015).