activitatea și specificitatea
DPP8 și DPP9 au o specificitate foarte asemănătoare a substratului și inhibitorului. Deoarece mulți dintre inhibitorii dppiv utilizați anterior par să inhibe și DPP8 și DPP9, este posibil ca aceste enzime să fie responsabile pentru unele dintre funcțiile atribuite DPPIV.
la fel ca DPPIV și DPP8, DPP9 preferă Pro în poziția P1 a substraturilor sintetice . Cu Pro fixat la P1, (X-Pro-NHPhNO2) reziduurile cele mai favorizate de DPP9 (și DPP8) în poziția P2 sunt reziduurile hidrofobe și bazice, iar cele mai puțin favorizate sunt reziduurile acide (ARG/Met/Leu/Lys>>Ala/Ser/Gly>>Glu/Asp/Asn). Majoritatea datelor disponibile până în prezent indică faptul că Arg-Pro-Nhphno2 de bază este un substrat preferabil în ceea ce privește afinitatea. Rata cifrei de afaceri, în schimb, este mult mai lentă în comparație cu Ala-Pro – și Gly-Pro-NHPhNO2 . Acest lucru este în contrast cu specificitatea substratului mult mai puțin discriminativ al DPPIV. Scindarea Val-Ala-NHPhNO2 de către DPP9892aa a fost mai puțin eficientă decât substraturile cu Pro la P1 și Gly-Gly -, Ala – Ala-și Ala-Phe-NHPhNO2 nu au fost hidrolizate .
DPP9 a hidrolizat substraturile fluorogene Ala-Pro-7-amino-3-trifluormetilcumarină (-AFC) și Ala-Pro-, Gly-Pro-, Lys-Pro-, Trp-Pro-, Val-Pro – și Asp-Pro-AMC . În ceea ce privește substraturile cromogene-nhphno2, Asp-Pro-AMC a fost cel mai puțin preferat substrat pentru DPP9 din această serie.
DPP8 și DPP9 prezintă cinetică Michaelis-Menten foarte asemănătoare. Cu toate acestea, eficiența catalitică față de substraturile lor este în general mai mică decât cea a DPPIV. Atunci când se compară datele din literatură privind parametrii catalitici, se observă mai multe discrepanțe între mai multe studii pentru DPP8 și DPP9 decât este cazul pentru DPPIV. Datorită disponibilității largi, substraturile cromogene și fluorogene care conțin Ala-Pro și Gly – Pro sunt cele mai des utilizate pentru a determina activitatea DPP9. În probele biologice, este obligatoriu să se includă un inhibitor specific DPPIV pentru a elimina interferențele DPPIV în teste .
folosind Ala-Phe-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Pro-Nhphno2, Ala-Ala-Ala-Nhphno2 și Z-Gly-Pro-Nhphno2 ca substraturi, rDPP9 nu are activitate tripeptidază și endopeptidază . Depleția DPP8 sau DPP9 în celulele cu siARN nu a avut niciun efect asupra scindării Arg-, Ala-Ala-Phe – și Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC . Activitatea maximă a DPP9 pe substraturi cromogene și fluorogene derivate din dipeptide a fost observată în intervalul pH pH 7,4–8,5 . Sub pH 6,3-6,5 a fost detectată o activitate redusă atât a DPP9 recombinant, cât și a dpp9 natural. Optimul pH neutru susține localizarea citoplasmatică.
unii inhibitori concepuți inițial pentru DPPIV inhibă, de asemenea, activitatea DPP8/9. Peptidele acidului Boronic, inclusiv Val-boroPro, cunoscute și sub numele de Talabostat, s-au dovedit a fi inhibitori puternici ai unei varietăți de proteaze selective de serină prolină (DPPII, DPPIV, DPP8, DPP9 și FAP) . Alo-izoleucil tiazolidina, Lys(z-(NO2))pirolidina și Lys (Z – (NO2))tiazolidina au fost puțin mai selective față de DPP8/9 față de DPPIV . O serie de-aminoacil-((2S,4S)-4-azido-2-cianopirolidine) a avut ca rezultat compuși cu valori Ki în intervalul nanomolar pentru DPP8/9 și o selectivitate globală modestă față de DPPIV și DPPII .
Substituirea inelului tiazolidinic al Alo-izoleucil tiazolidinei cu un fragment de izoindolină a sporit inhibarea DPP8 și DPP9, în timp ce inhibarea DPPIV a scăzut semnificativ . Jiaang și colab. s-au descoperit inhibitori selectivi ai DPP8/9 care conțin o izoindolină la P1. Izoindolină cu 1-(4,4′ – difluorobenzhidril)piperazină la locul P2 (1G244; PTX1210) este un inhibitor foarte puternic și selectiv al DPP8 / 9. 1G244 are valori IC50 de 14 și 53 nM față de DPP8 și, respectiv, DPP9 . Cu valori IC50 mai mari de 100 de metri cubi, se poate concluziona că 1G244 nu inhibă semnificativ DPPIV, FAP sau DPPII. Interesant este că este un inhibitor competitiv de legare lentă a DPP8, dar compusul se comportă ca un inhibitor competitiv și reversibil al DPP9 . Spre deosebire de Alo-Ile-izoindolină, 1g244 a pătruns în membrana plasmatică și nu a provocat simptome toxicologice semnificative la șobolani . Într-o altă serie de mimetice izoindoline, compusul (2s,3R)-2-amino-1-(5-fluoroizoindolin-2-IL)-3-metilpentan-1-one a arătat cel mai bun echilibru al potenței și selectivității. Deși potențialul său inhibitor față de DPP8 a fost similar cu cel al structurii părinte, a existat o creștere modestă, de patru ori a potenței față de DPP9 comparativ cu DPP8 . Până în prezent, nu au fost raportate inhibitori a căror afinitate pentru DPP8 și DPP9 diferă de mai mult de zece ori.
prin menținerea structurii pe bază de dipeptidă și introducerea unui fragment de diaril fosfonat în poziția P1, S-au dezvoltat inhibitori ireversibili ai DPP8/9. Derivații Bis (4-acetamidofenil)pirolidin-2-IL și izoindolin-1-il cu un reziduu de lizină P2 dibazic au fost inhibitori puternici pentru DPP8/9. Un număr de inhibitori derivați de izoindolină din această serie s-au dovedit a combina o afinitate bună și o selectivitate pronunțată pentru DPP8 și DPP9 în ceea ce privește DPPIV și DPPII .