aktivitet og specificitet
DPP8 og DPP9 har meget lignende substrat og inhibitor specificitet. Da mange af de tidligere anvendte dppiv-hæmmere også synes at hæmme DPP8 og DPP9, er det muligt, at disse er ansvarlige for nogle af de funktioner, der tilskrives dppiv.
ligesom DPPIV og DPP8 foretrækker DPP9 Pro ved P1-positionen af syntetiske substrater . Med Pro fastgjort til P1, (h-Pro-NHPhNO2) er de rester, der er mest begunstiget af DPP9 (og DPP8) i P2-positionen, hydrofobe og basiske rester, og de mindst begunstigede er sure rester (Arg/Met/Leu/Lys>>>Glu/Asp/Asn). De fleste hidtil tilgængelige data indikerer, at den grundlæggende Arg-Pro-NHPhNO2 er et foretrukket substrat med hensyn til affinitet. Omsætningshastigheden er derimod meget langsommere sammenlignet med Ala-Pro – og Gly-Pro-NHPhNO2 . Dette er i modsætning til den meget mindre diskriminerende substratspecificitet af dppiv. Spaltningen af Val-Ala-NHPhNO2 ved DPP9892aa var mindre effektiv end substraterne med Pro ved P1 og Gly-Gly -, Ala – Ala-og Ala-Phe-NHPhNO2 blev ikke hydrolyseret .
DPP9 hydrolyserede de fluorogene substrater Ala-Pro-7-amino-3-trifluormethylcoumarin (-AFC) og Ala-Pro-, Gly-Pro-, Lys-Pro-, Trp-Pro-, Val-Pro – og Asp-Pro-AMC . Hvad angår de kromogene-NHPhNO2-substrater, Asp-Pro-AMC var det mindst foretrukne substrat for DPP9 i denne serie.
DPP8 og DPP9 viser meget lignende Michaelis-Menten kinetik. Imidlertid er de katalytiske effektivitetsgevinster over for deres substrater generelt lavere end for dppiv. Når man sammenligner litteraturdata om katalytiske parametre, observerer man flere uoverensstemmelser mellem de forskellige undersøgelser for DPP8 og DPP9 end tilfældet er for dppiv. På grund af den brede tilgængelighed anvendes de Ala-Pro – og Gly-Pro – holdige kromogene og fluorogene substrater oftest til at bestemme dpp9-aktivitet. I biologiske prøver er det obligatorisk at inkludere en specifik dppiv-hæmmer for at eliminere interferens fra dppiv i analyserne .
brug af Ala-Phe-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Pro-NHPhNO2, Ala-Ala-Ala-NHPhNO2 og G-Gly-Pro-NHPhNO2 som substrater, rdpp9 mangler tripeptidase og endopeptidase aktivitet . Depletion af DPP8 eller DPP9 i celler med siRNA havde ingen effekt på spaltningen af Arg-, Ala-Ala-Phe – og Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC . Maksimal dpp9-aktivitet på dipeptidafledte kromogene og fluorogene substrater blev observeret i pH-området pH 7,4-8,5 . Under pH 6,3 – 6,5 blev der påvist lille aktivitet af både rekombinant og naturlig DPP9. Det neutrale pH-optimale understøtter den cytoplasmatiske lokalisering.
nogle hæmmere, der oprindeligt var designet til DPPIV, hæmmer også dpp8/9-aktivitet. Boronsyrepeptider, inklusive Val-boroPro, også kendt som Talabostat, blev vist at være potente hæmmere af en række prolinselektive serintypeproteaser (DPPII, DPPIV, DPP8, DPP9 og FAP) . Allo-isoleucylthiasolidin, Lys(å-(NO2))pyrrolidin og Lys(å-(NO2))var lidt mere selektive over for DPP8/9 i forhold til DPPIV . En serie af Kurt-aminoacyl-((2S,4s)-4-asido-2-cyanopyrrolidiner) resulterede i forbindelser med Ki-værdier i nanomolarområdet for DPP8/9 og en beskeden samlet selektivitet over for DPPIV og dppii .
Substitution af Allo-isoleucylthiolidinringen med en isoindoldel forstærkede dpp8-og dpp9-inhiberingen, hvorimod dppiv-inhiberingen var signifikant nedsat . Jiaang et al. opdagede selektive dpp8 / 9-hæmmere indeholdende et isoindolin ved P1. Isoindolin med et 1-(4,4′ – difluorhydryl) piperasin på P2-stedet (1g244; Pkt. 1210) er en meget potent og selektiv dpp8/9-hæmmer. 1G244 har IC50-værdier på henholdsvis 14 og 53 nM mod DPP8 og DPP9 . Med IC50-værdier større end 100 liter kan man konkludere, at 1g244 ikke signifikant hæmmer DPPIV, FAP eller dppii. Interessant nok er det en langsomt bindende kompetitiv hæmmer af DPP8, men forbindelsen opfører sig som en konkurrencedygtig og reversibel hæmmer af DPP9 . I modsætning til allo-ile-isoindolin trængte 1g244 ind i plasmamembranen og forårsagede ikke signifikante toksikologiske symptomer hos rotter . I en anden serie af isoindolinmimetika viste forbindelsen (2s,3R)-2-amino-1-(5-fluoroisoindolin-2-yl)-3-methylpentan-1-One den bedste balance mellem styrke og selektivitet. Selvom dets hæmmende potentiale mod DPP8 svarede til moderstrukturen, var der en beskeden, firedoblet stigning i styrke mod DPP9 sammenlignet med dpp8 . Indtil nu er der ikke rapporteret om inhibitorer, hvis affinitet for DPP8 og DPP9 adskiller sig mere end ti gange.
ved at holde den dipeptidbaserede struktur og indføre en diarylphosphonatdel i P1-positionen blev irreversible dpp8/9-hæmmere udviklet. Bis (4-acetamidophenyl)pyrrolidin-2-yl og isoindolin-1-yl-derivater med en dibasisk P2-lysinrest var potente hæmmere for dpp8/9. Et antal isoindolin-afledte hæmmere i denne serie viste sig at kombinere en god affinitet og udtalt selektivitet for DPP8 og DPP9 med hensyn til DPPIV og dppii .