Journal of Soil Science and Plant Nutrition, 2012, 12 (3), 511-524
Colonización temprana de micorrizas arbusculares de trigo, cebada y avena en Andosoles del sur de Chile
C. G. Castillo1,3*, F. Puccio1, D. Morales1, F. Borie2,3, y E. Sieverding4
1Universidad Católica de Temuco, Facultad de Recursos Naturales, Escuela de Agronomía, Casilla 15-D, Temuco, Chile.
* Autor para correspondencia: ccastill @ uct.cl
2Universidad de La Frontera, Departamento de Ciencias Químicas y Recursos Naturales, Temuco, Chile.
3 Núcleo de Recursos Biológicos Científicos y Tecnológicos (BIOREN), Universidad de La Frontera, Casilla 54-D, Temuco, Chile.
4universidad Hohenheim, Instituto de Producción Vegetal y Agroecología en los Trópicos y Subtrópicos, Garbenstr. 13, 70599 Stuttgart, Alemania.
Resumen
En cereales cultivados en Andosoles del sur de Chile, los hongos micorrícicos arbusculares (AM) pueden desempeñar un papel principal en la absorción de fósforo (P). Debido a que la adquisición de P en etapas tempranas de crecimiento es crucial para los cereales, investigamos el desarrollo de AM indígenas durante los primeros 45 días después de la siembra de dos variedades de trigo, cebada y avena en dos Andosoles típicos de la región, bajo casa de plástico. Las temperaturas mínimas estuvieron entre-5°C y + 5°C por la noche y las máximas entre 18°C y 30°C durante el día. Los resultados mostraron que la biomasa radicular de todas las especies aumentó en ambos suelos hasta 30 días y permaneció constante a partir de entonces hasta 45 días. La intensidad de la infección por AM (área radicular y biomasa radicular infectada) fue baja a los 15 días, aumentó ligeramente de 15 a 30 días y aumentó brusca y significativamente de 30 a 45 días. Las especies y variedades de plantas diferían en la formación de biomasa radicular, pero no en la frecuencia e intensidad de la infección con estructuras de MA. Por lo tanto, las especies y variedades de cereales con mayor producción de raíces tenían una biomasa total de raíces micorrícicas más alta, y esas especies podrían beneficiarse más de la MA. También se concluye que durante las primeras etapas de crecimiento, los cereales invierten primero en el desarrollo de las raíces y luego en la biomasa fúngica AM.
Palabras clave: cereales, fisiología, simbiosis, colonización radicular, biomasa radicular.
1. Introducción
El sur de Chile es la principal zona de producción de trigo, cebada y avena en Chile (ODEPA, 2011). Está bien establecido en la literatura que los andosoles en el área son bajos en nutrientes disponibles y que la deficiencia de fósforo (P) puede limitar la producción de trigo (Pino et al., 2002). La acidificación del suelo debido a las altas precipitaciones y al uso de fertilizantes de amonio (Mora y Demanet, 1999) aumenta aún más el problema de la baja disponibilidad de P. Se ha postulado anteriormente que el manejo de los hongos micorrízicos arbusculares autóctonos (AM) puede ser una valiosa herramienta agronómica para optimizar la adquisición de cereales por medios biológicos, y así aumentar la productividad del suelo y el rendimiento de los granos (Sieverding, 1991). No hay duda de que la simbiosis de AM entre las raíces de las plantas y los hongos glomeromicoteanos tiene su importancia primordial para la absorción de P y el suministro de P a las plantas, en particular en condiciones edáficas donde P no es fácil de obtener (Finlay, 2008). Además, se han reportado otros efectos beneficiosos de los hongos AM para las plantas, como la mejora de las relaciones con el agua (Auge, 2004), la tolerancia al estrés salino (Daei et al., 2009) y elementos tóxicos en suelos (Karimi et al., 2011). Además, siempre se ha informado de una mejora de la salud de las raíces cuando la asociación de la AM se establece antes de que ocurrieran ataques de nematodos o patógenos de las raíces (Pfleger y Linderman, 2002).
Nos interesó el desarrollo temprano de AM en las raíces de los tres cereales debido a dos razones principales:
a) Los estudios nutricionales de las plantas han demostrado que la adquisición de P durante las etapas tempranas de crecimiento de los cereales es crucial para su producción de granos. Por ejemplo, Elliott et al. (1997) mostraron en experimentos llevados a cabo en Australia que cualquier deficiencia de P hasta la etapa 30 de crecimiento del trigo (macolladura terminada, inicio de elongación del tallo, Zadock et al., 1974) limitará significativamente los rendimientos. Deficiencia de P dentro de los 15 días posteriores a la siembra, reducción de la altura de la planta, el crecimiento de las raíces y el rendimiento de los granos. Investigación del Instituto de Potasa y Fósforo (Snyder et al., 2003) también ha demostrado claramente en muchos estudios de investigación de campo en EE.UU. y Canadá, que el suministro temprano de P al trigo es importante para la maceración del cultivo y, finalmente, para la producción de granos de cereales. Li et al. (2006) han demostrado que más del 50% de la adquisición de P durante los primeros 36 días de cultivo de trigo fue por micorriza. Por lo tanto, sabiendo que la nutrición temprana de P es tan esencial en los cereales, y sabiendo que la MA es tan crítica para la nutrición de P, decidimos estudiar sistemáticamente el desarrollo de MA de cada una de las dos variedades de trigo, cebada y avena en dos suelos representativos del sur de Chile con sus poblaciones nativas de hongos de MA.
b) La otra razón para estar interesado en el desarrollo temprano de AM en cereales está relacionada con la salud de las raíces. Como se indicó anteriormente, se encontró que la AM era de gran importancia para la salud de las raíces cuando la AM se estableció primero, antes de que los patógenos de las raíces o los nematodos atacaran. Por lo tanto, la segunda razón para la investigación sistemática del desarrollo temprano de la MAÑANA en raíces de cereales de grano pequeño como el trigo, la cebada y la avena fue si hay diferencias entre las especies y variedades de cereales en el desarrollo temprano de la MAÑANA. Esta información puede ser importante en una etapa posterior para los estudios de «salud de la rizosfera» en cereales.
Se sabe que el establecimiento y colonización de raíces de cereales por AM depende de a) los hongos por AM presentes en el suelo y del potencial de germinación/estimulación de propágulos fúngicos infecciosos (Jeffries et al., 2003); b) la susceptibilidad de las especies y variedades de cereales a infectarse con hongos AM (Boyetchko y Tewari, 1995), donde también están involucrados factores de reconocimiento genético (Gadkar et al., 2001; Balestrini y Lanfranco, 2006), y c) las condiciones y características edáficas y bióticas del suelo, como el estado nutritivo, el pH, la capacidad de retención de agua, la aireación, el contenido de materia orgánica (Medina y Azcón, 2010), así como la presencia o ausencia de otros microorganismos de la rizosfera y del suelo (Welc et al., 2010). Las interacciones de estos tres componentes principales, que influyen en el establecimiento de la simbiosis, son bastante complejas, pero en el extremo final los niveles de colonización dentro del tejido radicular son el resultado de estas interacciones. Por lo tanto, en el presente estudio investigamos los resultados de tales interacciones midiendo la frecuencia e intensidad de la infección por AM en las raíces, y los comparamos con el desarrollo de brotes y raíces.
2. Materiales y métodos
Se realizaron experimentos en maceta en una casa de plástico sin calefacción, en la Universidad Católica de Temuco, durante los meses de julio y agosto de 2010. Este es el momento habitual en que los cereales se plantan normalmente, en el campo, en el sur de Chile. Las temperaturas del aire en esta casa de plástico estuvieron entre -5°C y 5°C durante la noche como mínimo y máximo entre 18°C y 30°C durante el día (Figura 1).
Se utilizaron dos suelos en el ensayo, siendo ambos andosoles típicos del sur de Chile. Un suelo era de la Estación Experimental Agrícola Pillanlelbún de la Universidad Católica de Temuco, Comuna de Lautaro y el otro de un sitio de campo cerca de Cunco (Tabla 1). El suelo de Pillanlelbún había sido cultivado con papa antes de nuestro uso, mientras que el otro suelo tenía cereales en los últimos años antes de su uso en el experimento. Los suelos diferían en el P disponible (Olsen y Sommer, 1982) y en el contenido de materia orgánica (Walkley y Black, 1934). El pH del suelo (medido en suelo:agua utilizando una relación de 1:2,5) estaba entre pH 5,6 y 6,0.
Los suelos se recolectaron en el campo a una profundidad de 5 a 20 cm. Se tamizaron y homogeneizaron pasando por un tamiz con abertura de malla de 0,5 cm; se llenaron 250 mL de tierra en macetas de plástico de 300 ml. En el estudio se utilizaron dos variedades diferentes de trigo, cebada y avena (Tabla 2); estas variedades son ampliamente utilizadas en la región de La Araucanía, el Centro de producción de cereales del Sur de Chile. Las semillas se desinfectaron superficialmente y luego se pre-germinaron en placas de Petri de plástico. Se plantó una semilla por maceta justo después de la germinación de la radícula. Esto se hizo para asegurarse de que la semilla germinada de forma homogénea se plantara en todas las macetas. Durante el tiempo del experimento no se agregaron fertilizantes. La humedad del suelo se mantuvo a la capacidad de retención de agua de los suelos. Tales niveles de humedad son comunes durante el invierno y principios de primavera también en el campo.
De cada variedad de planta, se sembraron doce macetas. Se cosecharon cuatro macetas cada una 15 días después de la siembra (DAP), para avena a 21 DAP (H1), 30 DAP (H2) y 45 DAP (H3). La segunda y tercera cosecha correspondieron a las etapas de crecimiento de las plantas 1.12 y 1.13 (dos y tres hojas desplegadas, Zadock et al., 1974). La primera cosecha de avena se retrasó, ya que las propias investigaciones anteriores no habían mostrado infección de la raíz micorrícica a los 15 días.
Para cada cosecha, los brotes de la planta se cortaron a nivel del suelo y se determinó el peso fresco. Las raíces se lavaron cuidadosamente sin tierra y se estableció peso fresco. Se tomó aleatoriamente una submuestra de material de raíz fresca después de cortar toda la muestra de raíz en segmentos de aproximadamente 1 cm de largo. Esta submuestra se utilizó para determinar la colonización por AM. Las estructuras de hongos AM en las raíces se teñieron con 0,05% de azul tripano a 60°C durante 5 min en un baño de agua (Phillips y Hayman, 1970) después del calentamiento en 2.5% de KOH a 60°C durante 12 min, enjuagando luego en unos pocos cambios de agua y acidificando las raíces en ácido clorhídrico al 1% a temperatura ambiente durante 1 h. Los segmentos de raíz teñidos se almacenaron en agua destilada y 4°C hasta que se utilizaron para la preparación de portaobjetos. Treinta segmentos radiculares (de aproximadamente 1 cm de largo) de cada tratamiento se montaron en tres portaobjetos en una solución de alcohol polivinílico, ácido láctico y glicerol (Koske y Tessier, 1983) y se examinaron con un aumento de 100^00x bajo un microscopio óptico Olympus YS100. La frecuencia de infección micorrícica (F %) se evaluó relacionando el número de segmentos radiculares de 1 cm infectados (no) con el número total de segmentos radiculares de 1 cm observados (N): F% = 100 (N-no) / N. La intensidad de la infección por AM en la corteza radicular se determinó mediante el sistema de clasificación de cinco clases siguiendo el método descrito por Trouvelot et al. (1986). Esta medición se basa en la infección (M%) en cada segmento de raíz utilizando valores de 0 a 5. Los números indican la proporción de corteza radicular colonizada por el hongo: 0 = sin colonización; 1 = rastro de colonización; 2 = menos de 10%; 3 = del 11 al 50%; 4 = del 51 al 90%; y 5 = más del 90% del volumen del segmento radicular ocupado por el hongo. M% se estimó mediante la siguiente ecuación: M% = (95n5 + 70n4 + 30n3 + 5n2 + n1) / N, donde n5, n4, n3, n2 y n1 son el número de fragmentos en las respectivas categorías 5, 4, 3, 2 y 1 (Alarcón y Cuenca, 2005). La biomasa radicular infectada con micorrizas se calculó multiplicando el peso fresco de la raíz por M%.
Análisis estadístico
Los datos se analizaron utilizando valores medios y desviaciones estándar que se muestran en los gráficos dentro de la sección de Resultados.
3. Resultados
Triticum aestivum L.
El peso fresco de brotes y raíces aumentó hasta 30 días después de la siembra (DAP) y se mantuvo casi constante a partir de entonces (Figura 2) en ambos suelos. La producción de biomasa fue algo mayor en el suelo de Pillanlelbún. Trigo var. «Bakán» (CV-1)tuvo una producción más alta que el var. «Kumpa» (CV-2). La frecuencia de raíces infectadas por AM fue alta entre aproximadamente 15-50% a 15 DAP y aumentó a más de 30-70% a 30 DAP y 45 DAP con pocas diferencias entre las variedades. La intensidad de la infección por MA fue baja hasta los 30 DAP y aumentó bruscamente a partir de entonces en ambos suelos y en ambas variedades. Había pocas diferencias entre las variedades. Sin embargo, al calcular la biomasa radicular infectada, fue evidente que var. «Bakán» tenía más infección que var. «Kumpa», pero sin grandes diferencias entre suelos (Figura 2).
Hordeum vulgare L.
El crecimiento de las variedades de cebada siguió aproximadamente el mismo patrón que las variedades de trigo a lo largo del tiempo (Figura 3). Mientras que la producción de biomasa de var. «Sebastián» fue claramente más alto en el suelo de Pillanlelbún, no se encontraron diferencias entre las variedades en el suelo de Cunco. Además, hubo poco aumento en la biomasa durante el período de crecimiento en el suelo de Cunco. La frecuencia de infección radicular por AM fue de entre el 30 y el 80% con var. «Sebastián» y la frecuencia de infección aumentaron en ambos suelos de 15 a 30 DAP. Se encontró poca o ninguna respuesta a lo largo del tiempo en la frecuencia de infección vv con var. «Barke». La intensidad de la infección por AM en el suelo de Cunco fue similar a la del trigo, pero en el suelo de Pillanlelbún var. «Sebastián» aumentó la intensidad de la infección linealmente con el tiempo, mientras que en var. La intensidad del» ladrido » y la biomasa infectada fue baja a los 15 días de fección, y 30 días antes aumentó (Figura 3).
Avena sativa L
El aumento del crecimiento de la avena a lo largo del tiempo dependió de la variedad y del suelo (Figura 4). Se encontró un menor aumento de biomasa con el tiempo con el var. «Supernova» que con var. «Pepita». In Cunco soil var. «Pepita» aumentó la biomasa con el tiempo más que en el suelo de Pillanlelbún. Mientras que la frecuencia de infección de raíz de AM aumentó un poco con el tiempo en el suelo de Pillanlelbún, y más con var. «Supernova «que con» Pepita», la frecuencia de infección fue de alrededor del 30% solo en suelo Cunco en todo momento y con ambas variedades. La intensidad de la infección y la biomasa radicular infectada fueron muy bajas a los 21 y 30 DAP, y aumentaron considerablemente hasta los 45 DAP. Las diferencias entre las variedades fueron escasas, excepto que la biomasa radicular infectada en el suelo de Cunco permaneció baja con var. «Supernova» a 45 DAP (Figura 4).
Efecto general de especie vegetal
La avena, seguida de la cebada, produjo la mayor parte de la biomasa en promedio de todas las variedades y suelos. El trigo tuvo una producción de biomasa significativamente menor y poco aumento con el tiempo (Figura 5). Cuando se compararon el trigo, la cebada y la avena como factores principales para la infección de raíz de AM (Figura 5), quedó claro que la frecuencia de infección de raíz fue similar con las tres especies en la primera cosecha y aumentó hasta 30 DAP sin un aumento adicional hasta 45 DAP. Sin embargo, en general, parece que el trigo tuvo la mayor frecuencia de infección por MA, seguido de la cebada y la avena, que presentaron la menor frecuencia. La intensidad de la infección fue baja para las tres especies en la primera y segunda cosecha, y aumentó brusca y significativamente a partir de entonces en la tercera cosecha. Allí, no se encontró diferencia en la intensidad de infección entre el trigo y la cebada, pero parece que la avena siempre tuvo intensidades de infección más bajas. Curiosamente, las tres especies de plantas tenían la misma biomasa radicular infectada en cada cosecha y la biomasa radicular infectada aumentó para las tres especies de la misma manera con el tiempo (Figura 5).
Figura 5. Efecto principal general de las especies vegetales trigo (W), cebada (B) y avena (O) en los parámetros de crecimiento (peso fresco de brotes y raíces) y colonización micorrícica (frecuencia de infección, intensidad de infección y biomasa radicular infectada) en la primera cosecha (15 o 21 días después de la siembra DAP; H1), 30 DAP (H2) y 45 DAP (H3). Se presentan medias de dos variedades y dos suelos por cultivo con desviación estándar.
Efecto general del suelo
La producción de biomasa fue tentativamente mejor en el suelo de Pillanlelbún, pero la desviación entre especies de plantas fue grande (Figura 6). Cuando se compararon los dos suelos para determinar la frecuencia de la infección por AM, quedó claro que la infección aumentó de la primera a la segunda cosecha y se mantuvo constante a partir de entonces. La variación entre plantas fue alta (Figura 6). La intensidad de la infección radicular se desarrolló con el tiempo exactamente de la misma manera en ambos suelos. La intensidad de la infección fue inferior al 5% hasta la segunda cosecha, y aumentó a más del 15% en la tercera cosecha. Las biomasas de raíces infectadas aumentaron con el tiempo, y bruscamente de 30 a 45 DAP. La biomasa radicular infectada fue algo mayor en el suelo de Pillanlelbún.
Figura 6. Efecto principal general de los suelos (S1: Pillanlelbún, S2: Cunco) sobre los parámetros de crecimiento y colonización micorrícica (frecuencia de infección, intensidad de infección y biomasa radicular infectada) en la primera cosecha (15 o 21 días después de la siembra, DAP; H1), 30 DAP (H2) y 45 DAP (H3). Las medias de tres especies de cereales y cada una de las dos variedades se presentan con desviación estándar.
4. Discusión
Ha sido bien establecido en la literatura que el desarrollo temprano de AM en raíces de plantas sigue una función sigmoidal con típicamente 3 fases: una fase de retraso, una exponencial y una fase de infección de meseta (Allen, 2001). Tuvimos un patrón similar cuando usamos la intensidad porcentual de infección radicular de MA y biomasa radicular infectada, pero no se alcanzó la fase de meseta en el momento del experimento. La frecuencia de infección radicular siguió más el patrón de producción de biomasa radicular, lo que significa un aumento de la frecuencia con el tiempo de la misma manera que aumentó la biomasa radicular.
Teniendo en cuenta los principales efectos de las especies de plantas y el suelo, parece que la biomasa de brotes y raíces de todas las especies aumentó hasta 30 DAP y luego se mantuvo constante. Por el contrario, la intensidad de infección radicular AM y la biomasa radicular infectada fueron generalmente bajas hasta 30 días después de la siembra y luego aumentaron bruscamente hasta 45 DAP. Por lo tanto, parece que la planta invirtió primero en la producción de biomasa radicular antes de que los productos fotosintéticos se utilizaran para el desarrollo de hongos AM y biomasa de hongos AM en raíces. Estas relaciones suenan lógicas desde un punto de vista fisiológico, y se han descrito relaciones de carbono y fuente de sumidero de nutrientes (Podila y Douds, 2000), pero esto no se ha demostrado de esa manera en estudios anteriores con trigo, cebada y avena, hasta donde sabemos.
En general, la frecuencia de infección por MAÑANA fue mayor en las plantas de trigo que en la cebada y la avena (Figura 5 en la última cosecha), y el porcentaje de intensidad de infección en las raíces sugirió que la avena estaba menos infectada que los otros dos cereales. Sin embargo, la biomasa radicular con estructuras micorrícicas fue de 35-40 mg similar en las tres especies de cereales, mientras que la biomasa total de raíces frescas varió mucho entre las especies de cereales de 90 a 280 mg por planta. Este resultado podría dar razón para concluir que las especies de cereales controlan genéticamente los flujos de fotosintatos para generar más biomasa de raíces o de hongos, o que los hongos AM simplemente están limitados en la producción de más biomasa durante esta etapa temprana de crecimiento de las plantas bajo las condiciones climáticas dadas. Una mirada más cercana al nivel de variedades muestra (Fig.2-4) que aquellas variedades con mayor producción de raíces tenían en general biomasa radicular más infectada. Podemos suponer que la biomasa radicular se correlacionó con la longitud de la raíz y que a través de una exploración más intensiva del suelo, más raíces se infectaron con propágulos de hongos AM que se distribuyeron uniformemente en los suelos homogeneizados. Sieverding (1991) encontró tales correlaciones con otras especies de plantas, como la yuca. Por lo tanto, los genotipos de cereales con más raíces teóricamente pueden hacer un uso más efectivo de las poblaciones de micorrizas nativas. En este estudio no investigamos la adquisición de nutrientes de los genotipos de cereales y otros estudios tienen que aclarar qué cantidades de nutrientes son absorbidas por la biomasa de hongos AM y qué proporción por la propia raíz. Otro aspecto también es obvio a partir de los resultados: si asumimos que la biomasa radicular más ocupada por AM es importante para la salud de las raíces y la protección de las raíces contra los patógenos, entonces las raíces de trigo están relativamente más protegidas que las de avena o cebada, ya que el trigo tenía la menor proporción de biomasa radicular no infectada a infectada.
Las características del suelo pueden afectar el desarrollo de las plantas y el desarrollo temprano de la MAÑANA (Figura 6). El suelo de Cunco tenía P disponible más alto que el suelo de Pillanlelbún, y esta puede ser la razón por la cual la cantidad total de biomasa radicular infectada por AM fue tentativamente menor en el suelo de Cunco. Tales efectos negativos de un mayor contenido de P disponible en suelos sobre el desarrollo de MA se establecieron claramente antes (Ning y Cumming, 2001; Li et al., 2006). Sin embargo, a partir de nuestros resultados no podemos explicar por qué la avena reaccionó en la producción de biomasa de manera diferente al trigo y la cebada en los dos suelos (Figuras 2, 3, 4). Todavía no está claro si la menor producción de biomasa de trigo y cebada en Cunco que en el suelo de Pillanlelbún fue el resultado de un desarrollo de MA reducido o retardado en el suelo de Cunco, pero esto debería investigarse en el futuro. Puede ser que el desarrollo diferencial de las variedades estuviera relacionado con su capacidad genética para producir más biomasa de brotes y raíces poco después de la germinación en las condiciones climáticas dadas, en estos suelos. De los resultados se desprende claramente que las variedades que tenían una mayor biomasa de brotes, también tenían una mayor producción de biomasa de raíces. Sin embargo, a pesar de que las biomasas radiculares diferían entre las variedades, las dos variedades de cada una de las especies de cereales investigadas no diferían en la intensidad de la infección radicular. Esto es interesante, ya que podría significar que en las condiciones de prueba, la susceptibilidad de las variedades a la infección por MA fue similar, y que las diferencias genéticas entre las variedades no influyeron en el proceso de infección micorrícica. El tema de la susceptibilidad y compatibilidad de los hongos AM con las variedades vegetales fue y sigue siendo un tema de gran interés científico (Boyetchko y Tewari, 1995; Garg y Chandel, 2010). Los estudios de succeptibilidad que utilizan herramientas biológicas moleculares podrían ser de gran interés para explicar en parte el proceso de desarrollo temprano de la MA en los cereales, en el futuro.
5. Conclusiones
Se dispone de poca información en la literatura sobre el desarrollo temprano de micorrizas arbusculares (MA) en trigo, cebada y avena. También es difícil comparar nuestros resultados con los presentados en la literatura (por ejemplo, Rubio et al., 1991), donde se aplicaron parámetros y métodos ligeramente diferentes para investigar la MA. Del estudio actual concluimos que tanto la intensidad de infección por MA como el desarrollo de biomasa radicular son parámetros importantes para estudiar el desarrollo temprano de MA en cereales. Las plantas invierten productos de fotosíntesis preferiblemente en biomasa radicular (hasta 30 días después de la siembra) antes de que aumente la biomasa de MAÑANA. El desarrollo temprano de biomasa fúngica en las raíces puede estar influenciado principalmente por los patrones de crecimiento de las raíces en un suelo dado. Dado que el objetivo de este estudio no era investigar la adquisición de P en las etapas tempranas del crecimiento de los cereales, es necesario investigar más a fondo si es beneficioso para la absorción de P y la salud de las raíces acelerar y mejorar los procesos tempranos de infección por micorrizas en los cereales mediante insumos agronómicos, como el tratamiento de semillas con productos naturales o químicos.
Agradecimientos
Este estudio fue financiado por el Proyecto FONDECYT 11090014, de la Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica, CONICYT, Chile.
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