Gateway-kloonausjärjestelmä, joka on keksitty ja kaupallistettu Invitrogenilla 1990-luvun lopulta lähtien, on molekyylibiologian menetelmä, jonka avulla tutkijat voivat tehokkaasti siirtää DNA-fragmentteja plasmidien välillä käyttämällä omaa rekombinaatiosekvenssiä, ”Gateway att” – sivustoja ja kahta omaa entsyymiseosta, nimeltään ”LR Klonaasi” ja ”BP Klonaasi”. Gateway-Kloonaustekniikka mahdollistaa DNA-fragmenttien siirron eri kloonausvektorien välillä lukukehystä säilyttäen. Käyttämällä Gateway, yksi voi kloonata subclone DNA segmenttien funktionaalista analyysia. Järjestelmä vaatii DNA-fragmentin alustavan lisäämisen plasmidiin, jossa on kaksi vierekkäistä rekombinaatiosekvenssiä nimeltään ”att L 1” ja ”att l 2”, jotta voidaan kehittää ”Gateway Entry clone” (erityinen Invitrogen nomenclature).
suuret arkistot Gateway Entry-klooneja, jotka sisältävät valtaosan ihmisen, hiiren ja rotan Orfeja (avoimet lukukehykset), on kloonattu ihmisen cDNA-kirjastoista tai syntetisoitu kemiallisesti tukemaan tutkimusyhteisöä käyttäen NIH: n (National Institutes of Health) rahoitusta (esim.nisäkkäiden Geenikokoelma, http://mgc.nci.nih.gov/). Näiden geenikasettien saatavuus tavallisessa yhdyskäytävässä kloonaamassa plasmidia auttaa tutkijoita siirtämään nämä kasetit nopeasti plasmideiksi, jotka helpottavat geenien toiminnan analysointia. Gateway kloonaus ei vie enemmän aikaa alkuperäisen perustamisen, ja on kalliimpaa kuin perinteinen restriktioentsyymi ja ligaasi-pohjainen Kloonaus menetelmiä, mutta se säästää aikaa, ja tarjoaa yksinkertaisempaa ja erittäin tehokasta Kloonaus downstream sovelluksia.
biotieteen tutkimusyhteisö on ottanut tekniikan laajalti käyttöön erityisesti sovelluksissa, joissa vaaditaan tuhansien DNA-fragmenttien siirtämistä yhteen plasmidityyppiin (esim.sellainen, joka sisältää CMV-promoottorin proteiinien ilmentymistä varten nisäkässoluissa) tai yhden DNA-fragmentin siirtämistä monentyyppisiin plasmideihin (esim. bakteeri -, hyönteis-ja nisäkäsproteiini-ilmentymistä varten).