Il sistema di clonazione Gateway, inventato e commercializzato da Invitrogen dalla fine degli anni ‘ 90, è un metodo di biologia molecolare che consente ai ricercatori di trasferire in modo efficiente frammenti di DNA tra plasmidi utilizzando un set proprietario di sequenze di ricombinazione, i siti “Gateway att” e due miscele di enzimi proprietari, chiamate “LR Clonase” e “BP Clonase”. La tecnica di clonazione gateway consente il trasferimento di frammenti di DNA tra diversi vettori di clonazione mantenendo il frame di lettura. Utilizzando Gateway, è possibile clonare segmenti di DNA subclone per l’analisi funzionale. Il sistema richiede l’inserimento iniziale di un frammento di DNA in un plasmide con due sequenze di ricombinazione laterali chiamate “att L 1” e “att L 2”, per sviluppare un “clone di ingresso Gateway” (nomenclatura speciale di Invitrogen).
Grandi archivi di cloni di ingresso Gateway, contenenti la stragrande maggioranza di ORFS umani, topi e ratti (open reading frames) sono stati clonati da librerie cDNA umane o sintetizzati chimicamente per sostenere la comunità di ricerca utilizzando il finanziamento NIH (National Institutes of Health) (ad esempio, Mammalian Gene Collection, http://mgc.nci.nih.gov/). La disponibilità di queste cassette geniche in un plasmide di clonazione gateway standard aiuta i ricercatori a trasferire rapidamente queste cassette in plasmidi che facilitano l’analisi della funzione genica. La clonazione del gateway richiede più tempo per la configurazione iniziale ed è più costosa rispetto ai tradizionali metodi di clonazione basati su enzimi di restrizione e ligasi, ma consente di risparmiare tempo e offre una clonazione più semplice ed altamente efficiente per le applicazioni down-stream.
La tecnologia è stata ampiamente adottata dalla vita della comunità della ricerca scientifica soprattutto per le applicazioni che richiedono il trasferimento di migliaia di frammenti di DNA in un tipo di plasmide (ad esempio, uno contenente un promotore CMV per l’espressione della proteina in cellule di mammifero), o per il trasferimento di un frammento di DNA in diversi tipi di plasmidi (ad esempio, batteri, insetti e mammiferi espressione della proteina).