Les résultats et la discussion
L’analyse PCR-RFLP a révélé des schémas de restriction compatibles avec l’analyse in silico. Tous les chiens présentant une malformation de la queue présentaient le même motif (3 fragments, 2 bandes visibles), qui était différent de celui présenté par les chiens à queue normale (2 fragments, 1 bande visible) (Fig.1). Un autre essai, également basé sur la PCR-RFLP, a été utilisé avec succès pour identifier la même mutation dans le gène T des chiens, mais en utilisant un système d’électrophorèse sur gel de polyacrylamide (Gruszczynska & Czapla 2011). Les performances de l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide pourraient améliorer la résolution des bandes par rapport aux fragments d’ADN dans la présente étude. Cependant, l’aspect pratique serait réduit, car ce système est plus laborieux. Dans la présente étude, même s’il n’a pas été possible de visualiser tous les fragments d’ADN générés après digestion, il a été possible de distinguer facilement les génotypes en utilisant l’électrophorèse sur gel d’agarose.
Fig.1. PCR-RFLP pour la détection de la mutation C189G. Marqueur de paires de bases (M), chiens affectés – queue courte (1-7) et animal à queue normale (8).
Dans l’analyse d’échantillons séquencés, une hétérozygotie C (cytosine) G (guanine) a été observée dans le nucléotide 189 de l’exon 1 uniquement chez les chiens présentant une malformation de la queue. La localisation de la mutation a été basée sur la séquence d’ARNm du gène T disponible dans la banque de gènes (numéro d’accession : AJ245513).
Lors de l’analyse in silico, une altération de l’acide aminé 63 de l’isoleucine en méthionine a également été observée. Toutes les séquences d’ADN obtenues dans la présente étude ont été déposées à Genbank sous les numéros d’accession : MF495488 (queue courte), MF495489 (absence de queue), MF495490 (absence de queue) et MF495491 (queue normale).
Bien qu’un seul génotype ait été trouvé pour la maladie actuelle (CG pour les animaux présentant une malformation de la queue), une variation phénotypique a été observée chez les chiens atteints, soit la taille de la queue. Certains animaux présentaient une queue courte (environ 3 à 4 vertèbres) et d’autres une absence de queue (environ 1 à 2 vertèbres) (Fig.2). Des phénotypes similaires ont également été observés par Haworth et al. (2001) chez les chiens. Bien qu’une explication à cela ne soit pas encore connue chez les chiens, Buckingham et al. (2013), en étudiant la variation congénitale de la taille de la queue chez les chats, ont trouvé des preuves de l’haploinsuffisance causée par de multiples mutations du gène T. Les mutations C. 1199delC, c. 1169delC et c. 998delT étaient associées à différents niveaux d’expression génique, ce qui pourrait expliquer les différents phénotypes chez les chiens présentant une malformation de la queue (Buckingham et al. 2013).
Fig.2. (A) Chien porteur de la mutation C189G dans le gène T. (B) Chien de la même portée sans mutation C189G.
Le caractère héréditaire de la mutation peut être mis en évidence par l’analyse de l’hérédogramme (Fig.3) de la portée étudiée. Il a été possible de vérifier que la mutation a un modèle d’héritage autosomique dominant. Cependant, aucun génotype homozygote dominant (GG) n’a été trouvé dans la présente étude, renforçant les observations selon lesquelles, lors d’une homozygose, le gène T muté provoque la mort fœtale (Haworth et al. 2001). Hytonen et coll. (2009) ont observé que les portées issues de croisements entre animaux à queue normale (génotype CC) étaient 29 % plus grandes que les portées issues de croisements entre animaux à queue malformée (génotype CG). Ce résultat est compatible avec la réduction attendue de 25% de la progéniture issue de croisements impliquant des allèles létaux.
Fig.3. Hérédogramme montrant le schéma d’hérédité de la mutation C189G dans le gène T du Labrador Retriever. Croisement entre les grands-parents maternels (I), la portée du chien atteint et son croisement avec le mâle normal (II) et la portée analysée (III).
Des mutations du gène T ont été associées à une malformation de la queue chez d’autres espèces telles que les souris et les chats (Wilson et al. 1995, Buckingham et coll. 2013). Et chez certains d’entre eux, d’autres changements sont également observés, tels que l’incontinence urinaire et fécale chez les chats (Robinson 1993). Cependant, chez le chien, à ce jour, seule une malformation de la queue a été observée chez les animaux hétérozygotes (CG) (Indrebo et al. 2008). Bien que chez certaines races canines, le phénotype de « malformation de la queue » n’ait pas été associé à la mutation C189G (Terrier de Boston, Bulldog anglais, Épagneul King Charles, Schnauzer miniature, Terrier Parson Russell et Rottweiler), le grand nombre de races touchées suggère une mutation ancienne (Hytonen et al. 2009), étant présent chez les chiens ancestraux avant la formation de nombreuses races. Cependant, les croisements interraciaux peuvent également avoir contribué à la diffusion de la mutation, car les animaux hétérozygotes CG ne semblent avoir aucune altération de la libido ou des performances de reproduction. Un autre facteur qui a pu contribuer à la diffusion de la mutation était l’utilisation dans la reproduction de chiens sans queue, alors que la caudectomie esthétique était encore autorisée. Au cours de cette période, il est probable que de nombreux animaux présentant une agénésie de la queue ont été utilisés comme reproducteurs, car l’absence de queue était souhaitable chez certaines races, contribuant à la diffusion de la mutation.
Actuellement, la pratique de la caudectomie (ablation chirurgicale de la queue) est une procédure interdite dans plusieurs pays du monde tels que ceux de l’Union européenne et du Brésil (Haworth et al. 2001, CFMV 2013). Dans certains pays de l’Union européenne, des tests génétiques permettant d’identifier la mutation C189G du gène T sont utilisés pour vérifier si l’absence de queue chez certaines races est d’origine congénitale ou si les animaux ont subi une intervention chirurgicale irrégulière. La PCR-RFLP utilisée dans la présente étude était une technique simple et précise pour identifier cette mutation et pourrait être utilisée comme preuve pour identifier la pratique illégale de la caudectomie.
En raison de la rareté des informations sur la mutation C189G dans le gène T des chiens, il n’y a pas d’autres informations concernant son association avec d’autres caractères morphologiques ou même physiologiques, et doit donc être étudié.