Qui, descriviamo il caso di un 15-anno-vecchio ragazzo, diagnosticata con grave allergia all’uovo, che si riferiva alla nostra Clinica perché non aveva mai ricevuto la vaccinazione MMR, nonostante il fatto che era obbligatorio. Pertanto, non poteva essere ammesso a scuola, oltre. Infatti, i suoi genitori consideravano la vaccinazione MMR altamente rischiosa a causa della sua allergia all’uovo sottostante.
È stato effettuato un accurato lavoro allergologico.
Per quanto riguarda la storia clinica, è stata riportata una singola reazione avversa all’uovo, che si era verificata nella prima infanzia (9 mesi), dopo la prima ingestione di uova cotte. Tipicamente, i sintomi avevano incluso respiro sibilante, dispnea, cambiamento nel tono della voce, tosse, pianto e pallore. Il rapido coinvolgimento delle vie respiratorie ha indicato che la reazione era grave (il bambino è stato ricoverato in ospedale e trattato con corticosteroidi e antistaminici). Dopo questo evento, le uova sono state completamente escluse dalla dieta del bambino. Inoltre, quando il bambino aveva 9 anni, soffriva di shock anafilattico, dopo l’ingestione di pinoli.
La SPT quantitativa è stata eseguita con una serie di 36 allergeni alimentari disponibili in commercio (Lofarma, Milano, Italia), che riflettono lo spettro delle allergie alimentari nel Sud Italia (dove le persone consumano una tipica dieta mediterranea). Sono state rilevate diverse sensibilizzazioni, tra cui arachidi, mandorle, nocciole, grano e, in particolare, albume d’uovo (Fig. 1 bis). Abbiamo anche eseguito puntura per puntura, testando anche una torta al forno( pan di spagna; uova ben cotte) e uova cotte (sode; Fig. 1 ter). I risultati sono stati espressi in termini di rapporto tra l’area dell’allergene wheal e l’area dell’istamina esogena wheal (indicata come Indice cutaneo). Inoltre, i grani ottenuti con albume d’uovo, albume sodo e uovo cotto erano tutti superiori a 5 mm (diametro medio), considerati associati ad un’alta specificità nell’infanzia . Questi test hanno indicato che il ragazzo era sensibilizzato a più allergeni alimentari e che l’allergia all’uovo era ancora presente. Per quanto riguarda le altre sensibilizzazioni alimentari rilevate, il giovane paziente ha dichiarato di poter mangiare cibi derivati dal grano (pane, pasta, ecc.), mandorle, fagioli e semi di girasole, senza soffrire di sintomi allergici. Aveva avuto sintomi modesti (angioedema alle labbra) per il consumo occasionale di piselli e nocciole, mentre non ricordava di aver mai mangiato arachidi, seppie, polpi e vongole, di qualsiasi tipo, suggerendo l’esistenza di una genuina intolleranza a questi alimenti.
Rilevazione di IgE in vivo e in vitro. un SPT quantitativo per una serie disponibile in commercio di allergeni alimentari. I risultati sono espressi in termini di Indice della pelle, i.e., il rapporto tra l’area dell’allergene wheal e l’area dell’istamina esogena (10 mg/ml) di riferimento wheal. b SPT quantitativo per l’estratto di uova disponibile in commercio (albume e tuorlo) e puntura per puntura con uovo cotto (albume e tuorlo) e uovo cotto (pan di spagna). Risultati espressi in termini di indice della pelle, anche. c IgE sieriche totali e IgE sieriche allergene-specifiche dell’uovo, misurate con ImmunoCAP. d SPT quantitativo con vaccino MMR (non diluito); test intradermici quantitativi con vaccino MMR, rispettivamente a diluizioni 1:100 e 1:10. I risultati sono espressi come aree wheal (mm2). L’istamina esogena (0,002 mg / ml) è stata utilizzata per il controllo positivo nei test intradermici
Inoltre, da ImmunoCAP (Thermo Fisher Scientific, Milano), abbiamo valutato il livello specifico di IgE nel siero per albume d’uovo, OVM, OVA e OVT. I valori rilevati erano predittivi di reazioni clinicamente rilevanti, dopo il consumo di uova, confermando i risultati del test cutaneo (Fig. 1c). I livelli totali di IgE erano particolarmente elevati (Fig. 1c).
Dopo aver valutato l’allergia all’uovo, abbiamo eseguito SPT con vaccino MMR puro, che si è rivelato negativo. Quindi, abbiamo eseguito test intradermici con due diluizioni crescenti di vaccino MMR (vale a dire. 1/100, 1/10). Come previsto, anche questa procedura si è rivelata negativa (Fig. 1d). Inoltre, 100 µl di diluizione 1/10 del vaccino MMR sono stati iniettati per via sottocutanea (test di iniezione). Non è stata osservata alcuna reazione immediata, né locale né sistemica.
Infine, al fine di confermare l’assenza di cloni di cellule B vaccino-specifici, che corroborerebbero i risultati ottenuti in vivo, abbiamo anche eseguito un test di proliferazione dei linfociti B ex-vivo (Fig. 2 bis-d). Con questo approccio, è stata studiata anche una possibile risposta allergica ritardata verso i componenti del vaccino MMR (proliferazione di cellule T specifiche del vaccino). Pertanto, le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) sono state isolate come descritto e colorate con carbossifluoresceina succinimidil estere (CFSE; 5 µM) per 5 min, lavati e coltivati nel mezzo di Eagle modificato di Dulbecco (DMEM), integrato con il 10% del siero del paziente. Questi PBMC sono stati esposti a 3 diverse diluizioni del vaccino (1/4000, 1/400 e 1/40, rispettivamente), in microcolture triplicate (2 × 105 PBMC in 200 µl), mantenute a 37 °C in un’atmosfera satura di vapore al 5% di CO2. Le colture senza aggiunta di vaccino sono state utilizzate come controllo negativo. Dopo 48 h, i PBMC sono stati raccolti, lavati e colorati con anticorpi anti-CD19 e anti-CD3 accoppiati al fluorocromo, per 20 min. Dopo un ulteriore lavaggio, le cellule sono state analizzate mediante citometria a flusso (Navios 3L 10C, Beckman Coulter, Milano), per la rilevazione di linfociti B e T proliferanti. È importante sottolineare che non è stata osservata alcuna proliferazione dei linfociti B (cellule CD19+) in presenza di vaccino MMR(Fig. 2 bis-e). Anche la proliferazione delle cellule CD3 + non è stata osservata (dati non mostrati).
Test di proliferazione delle cellule B ex vivo. Proliferazione cellulare valutata mediante riduzione dell’intensità CFSE: a in microculture di cellule B non trattate; linfociti b B incubati con una diluizione del vaccino 1:4000 MMR; linfociti c B incubati con una diluizione del vaccino 1:400 MMR; e, infine, linfociti d B incubati con una diluizione del vaccino 1: 40 MMR. I risultati si riferiscono a uno dei 2 test di proliferazione effettuati. In e Indici di stimolazione per le diluizioni del vaccino 3 MMR sopra. Medie dei 2 saggi. L’indice di stimolazione è il rapporto tra il tasso di proliferazione delle cellule esposte a un potenziale agente di proliferazione e il tasso di proliferazione basale delle cellule di controllo. Un indice di stimolazione ≥ 2 indica una significativa attività di proliferazione specifica. Dispersione laterale SSC, CFSE carbossifluoresceina succimidil estere
Sulla base di questa ulteriore evidenza, abbiamo somministrato il vaccino MMR al ragazzo, in due dosi del 50%, 250 µl ciascuna, con un intervallo di un’ora tra le due iniezioni. Il paziente è rimasto sotto osservazione per 1 ora (dopo la seconda iniezione). Come previsto, non sono state osservate reazioni avverse immediate o ritardate. Pertanto, potrebbe essere riammesso a scuola.
Nove mesi dopo, il test di proliferazione dei linfociti B è stato ripetuto con risultati simili (Fig. 2e). È stata quindi effettuata una seconda somministrazione di vaccino MMR, secondo il programma di inoculazione specificato.