Spread plate technique è il metodo di isolamento ed enumerazione di microrganismi in una coltura mista e distribuendolo uniformemente. La tecnica rende più facile quantificare i batteri in una soluzione.
Principio della tecnica della piastra di diffusione
La tecnica della piastra di diffusione prevede l’utilizzo di uno spalmatore sterilizzato con una superficie liscia in metallo o vetro per applicare una piccola quantità di batteri sospesi in una soluzione su una piastra. La piastra deve essere asciutta e a temperatura ambiente in modo che l’agar possa assorbire i batteri più facilmente. Una piastra di diffusione di successo avrà un numero numerabile di colonie batteriche isolate uniformemente distribuite sulla piastra.
Procedura della tecnica della piastra di diffusione
- Effettuare una serie di diluizione da un campione.
- Pipettare 0,1 ml dalla serie di diluizione desiderata appropriata sul centro della superficie di una piastra di agar.
- Immergere lo spalmatore di vetro a forma di L in alcool.
- Accendere lo spalmatore di vetro (bastone da hockey) su un bruciatore Bunsen.
- Distribuire uniformemente il campione sulla superficie dell’agar utilizzando lo spalmatore di vetro sterile, ruotando con attenzione il Petridish sottostante allo stesso tempo.
- Incubare la piastra a 37°C per 24 ore.
- Calcolare il valore CFU del campione. Una volta contate le colonie, moltiplicare per il fattore di diluizione appropriato per determinare il numero di CFU/mL nel campione originale.
Usi della tecnica del piatto di diffusione
- È usato per i conteggi vitali del piatto, in cui il numero totale di unità di formazione della colonia su un singolo piatto è enumerato.
- Viene utilizzato per calcolare la concentrazione di cellule nel tubo da cui è stato placcato il campione.
- La placcatura di diffusione è usata abitualmente nell’arricchimento, nella selezione e negli esperimenti di selezione.
Limitazioni della tecnica Spread Plate
- Gli aerobi Strick sono favoriti mentre i microaerofili tendono a brillare più lentamente.
- L’affollamento delle colonie rende difficile l’enumerazione.
- M. J. Pelczar
- Mackie e McCartney. Microbiologia medica pratica
- Bailey & Microbiologia diagnostica di Scott.
- Practical Microbiology. Pradeep Kumar Sharma.
- https://www.reference.com/science/spread-plate-technique-a3da655650023683#
- https://www.micro.iastate.edu/video/microbiology-004-spread-plate-method
- https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3577269/
- https://www.jove.com/video/3064/aseptic-laboratory-techniques-plating-methods
- https://www.pinterest.com/pin/506232814336422077/