2 R6 / 2 transgena möss
R6-linjen utvecklades i laboratorierna av Gill Bates från en pronukleär injektion av ett 1,9 kb Sacl-EcoRI-fragment med användning av 5′ – änden av den humana HD-genen härledd från en HD-patient. Den består av 1 kb av 5′ utr-sekvenser, exon 1 som bär CAG-upprepningar av 130-enheter från 162-talet och den första 262 bp av intron 1. R6 / 2-linjen var den första transgena musmodellen av HD. Den har en toppstorlek på 144-150 upprepningsenheter vid exon 1 (Mangiarini et al., 1996). Det är en av de mest använda genetiska modellerna av HS. R6 / 2-modellen uppvisar en progressiv homogen HD-liknande fenotyp, med överlevnad från 14 till 21 veckor, beroende på bostads-och anläggningsförhållanden. Skillnader i överlevnadsvaraktighet kan vara resultatet av variationer i bostäder, hantering, miljöanrikning och den tillåtna närvaron av virala och bakteriella symbionter, förutom andra faktorer. Med tanke på att berikade miljöer kan förändra utvecklingen av beteendefenotyp i R6/2-möss (Hannan, 2004), är det självklart att skillnader mellan laboratorier kan förändra R6/2-fenotypen. R6 / 2-möss som för närvarande finns i kommersiell vivaria har en mycket lägre CAG-upprepning än de som tidigare använts i experimentella studier. Ovanstående frågor mandat att, inom någon koloni av R6/2 möss, CAG upprepa storlek är avgörande för eventuella fynd och en repeterbar mätning av överlevnad och andra fenotypiska resultatmått är av största vikt för varje successiv ”f” generation för jämförelse med andra studier.
beteendeanalyser av R6/2-musens showage-relaterade försämringar i dystoniska rörelser, motorprestanda, greppstyrka och kroppsvikt som gradvis förvärras fram till döden. R6 / 2 möss är benägna anfallsaktivitet (status epilepticus) och plötslig död, särskilt i slutstadiet sjukdom, även om anfall kan inträffa så tidigt som 60 dagar. Överhantering och andra stressorer förvärrar anfallsaktiviteten. Neuropatologiska följder som inkluderar ökande markerade minskningar av hjärnvikt, är närvarande från 30 dagar, medan minskad hjärnvolym och hyperventrikulär utvidgning är närvarande från 60 dagar, båda ett kännetecken för den mänskliga sjukdomen. Dessutom är minskad neostriatal volym, striatal neuronatrofi, ökad astroglios och en minskning av antalet striatala neuroner närvarande vid 90 dagars ålder (Stack et al., 2005). Dessutom, i överensstämmelse med tidig vuxen debut HD, enkefalin striatal neuroner reduceras i jämförelse med substans-P striatal projektion neuroner (Sun et al., 2002) med lika bevarande av enkefalin och substans-P striatonigralprojektioner. Huntingtin-positiva aggregat är närvarande vid postnatal dag 1 och ökar i antal och storlek med ålder, vilket tyder på att sjukdomsdebut och progression inträffar före närvaron av kliniska fenomen (Stack et al., 2005). Huntingtin-inklusionerna är omfattande och finns i hela hjärnan i stort antal, ett fenomen som är inkonsekvent med det som observerats hos HS-patienter. Det har föreslagits att det senare kan vara resultatet av att endast använda en del av HS-genen, transgeneffekter och/eller användningen av utländska promotorer som ökar uttrycksnivåerna. Det verkar inte finnas några könsskillnader i den patologiska fenotypen. Det finns parallellitet mellan de rapporterade mekanismerna för sjukdomspatogenes som observerats hos HS-patienter och de som finns i R6/2-mössen, som inkluderar förändrad proteolys och proteosomala aktiviteter, ökad protein tvärbindning, inducerat chaperonuttryck och defekter i vitala cellulära processer som innefattar endocytos, intraneuronal handel, transkriptionsreglering, postsynaptisk signalering, apoptotiska kaskader och förändringar i bioenergetisk metabolism och mitokondriell funktion (Beal och Ferrante, 2004; Ryu et al., 2005; Stack och Ferrante, 2007). Medan R6 / 2-modellen har många av de kliniska och neuropatologiska egenskaperna som observerats hos HS-patienter, är det inte en exakt genetisk och neuropatologisk matchning med HS-patienter. Icke desto mindre har R6 / 2-modellen en väl karakteriserad progressiv fenotyp med måttlig variation, så att experimentella grupper kan innehålla så få som 10 möss och ge kraften att upptäcka skillnader i många resultatmått. Det är möjligt att utföra överlevnadsstudier, en viktig potentiell surrogatindikator för neuroprotektion, på cirka 3 månader från födseln. Effektiviteten och tydliga experimentella slutpunkter för R6/2-mössen är fortfarande en stor fördel.
det kan finnas stor variation i fenotyppresentation, vilket är beroende av CAG-upprepningsstorlek. Antalet CAG-upprepningar i R6 / 2-linjen är 148-153 med 500-550 bp, som bestäms genom PCR-analys (Stack et al., 2005). Ett ökat antal baspar > 550 resulterar i en moderering av R6/2-fenotypens svårighetsgrad. Med ökande basparnummer är det en samtidig ökning av CAG-upprepningsstorleken. Baspar som sträcker sig mellan 600 och 800 har CAG-upprepningsstorlekar mellan 175 och 192 i R6/2-möss och den genomsnittliga överlevnadsförlängningen ökar signifikant till cirka 131 dagar, i motsats till 500-550 bp vid 98 dagar. Basparnummer på 1000 och högre har CAG-upprepningsstorlekar konsekvent över 200, med en genomsnittlig överlevnad på 148 dagar. Variationen i överlevnad och förbättring av beteendemässig och neuropatologisk fenotyp i R6/2-möss med ökat basparnummer och CAG-upprepningsstorlek kan minska deras användbarhet i terapeutiska prövningar och kan förvirra experimentella resultat (Stack et al., 2005). Även om stor variation i kliniska åtgärder är vanligt i mänskliga försök, minimerar mätvariationen kraften att upptäcka skillnader, särskilt i musläkemedelsförsök. Således bör laboratorier som använder dessa möss säkerställa att genetisk variation minskas, vilket ger en relativt homogen population av möss inom experimentella kohorter.