1990年代後半からInvitrogenによって発明-商品化されたGatewayクローニングシステムは、独自の組換え配列セット、”Gateway att”サイト、および”LRクロナーゼ”と”BPクロナーゼ”と呼ばれる二つの独自の酵素ミックスを用いて、プラスミド間でDNA断片を効率的に転送することを可能にする分子生物学的方法である。 ゲートウェイクローニング技術は、読み取りフレームを維持しながら、異なるクローニングベクター間のDNA断片の転送を可能にします。 ゲートウェイを使用すると、機能解析のためにサブクローネDNAセグメントをクローン化することができます。 このシステムは、”ゲートウェイエントリクローン”（特別なInvitrogen命名法）を開発するために、”att L1″および”att L2″と呼ばれる二つの隣接する組換え配列を有するプラスミドにDNA断片の最初の挿入を必要とする。
ヒト、マウス、ラットのOrf(open reading frames)の大部分を含むゲートウェイエントリクローンの大規模なアーカイブは、NIH(National Institutes of Health)の資金を用いて研究コミュニティを支援するために、ヒトcDNAライ 標準ゲートウェイクローニングプラスミドでこれらの遺伝子カセットの可用性は、研究者が迅速に遺伝子機能の分析を容易にプラスミドにこれらの ゲートウェイクローニングは、初期セットアップに時間がかかり、従来の制限酵素やリガーゼベースのクローニング方法よりも高価ですが、時間を節約し、ダウン
この技術は、特に、あるタイプのプラスミド（例えば、哺乳類細胞におけるタンパク質発現のためのCMVプロモーターを含むもの）への数千のDNA断片の転送、ま