Gateway de Tecnologia

O Gateway de clonagem do Sistema, inventado e comercializado pela Invitrogen desde o final da década de 1990, é de biologia molecular método que permite que os pesquisadores de forma eficiente transferência de DNA de fragmentos entre os plasmídeos usando um conjunto proprietário de recombinação de seqüências, o “Gateway att” sites, e dois proprietários da enzima mistura, chamada de “LR Clonase”, e “BP Clonase”. A técnica de clonagem Gateway permite a transferência de fragmentos de DNA entre diferentes vetores de clonagem, mantendo a estrutura de leitura. Usando Gateway, pode-se clonar segmentos de DNA subclone para análise funcional. O sistema requer a inserção inicial de um fragmento de DNA em um plasmídeo com duas sequências de recombinação de flanco chamadas “att L 1” e “att L 2”, para desenvolver um “clone de entrada de Gateway” (nomenclatura especial de Invitrogênicos).

grandes arquivos de clones de entrada de Gateway, contendo a grande maioria de ORFs humanos, ratos e ratos (quadros de leitura aberta) foram clonados a partir de bibliotecas humanas cDNA ou sintetizados quimicamente para apoiar a comunidade de pesquisa usando o financiamento NIH (National Institutes of Health) (por exemplo, Coleção De genes de mamíferos, http://mgc.nci.nih.gov/). A disponibilidade destas cassetes genéticas num plasmídeo padrão de clonagem ajuda os investigadores a transferir rapidamente estas cassetes para plasmídeos que facilitam a análise da função genética. A clonagem Gateway leva mais tempo para a configuração inicial, e é mais caro do que os métodos tradicionais de restrição enzimática e de clonagem baseada em ligase, mas poupa tempo, e oferece Clonagem mais simples e altamente eficiente para aplicações em fluxo descendente.

A tecnologia tem sido amplamente adotado pela ciência da vida em comunidade de investigação, especialmente para aplicações que requerem a transferência de milhares de fragmentos de DNA em um tipo de plasmídeo (por exemplo, uma contendo um promotor CMV para expressão de proteínas em células de mamíferos), ou para a transferência de um fragmento de DNA em muitos tipos diferentes de plasmídeos (por exemplo, para bactérias, insetos e mamíferos expressão da proteína).

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