sistemul de clonare Gateway, inventat și comercializat de Invitrogen de la sfârșitul anilor 1990, este o metodă de biologie moleculară care permite cercetătorilor să transfere eficient fragmente de ADN între plasmide folosind un set proprietar de secvențe de recombinare, site-urile „Gateway att” și două amestecuri de enzime proprietare, numite „Clonază LR” și „Clonază BP”. Tehnica de clonare Gateway permite transferul fragmentelor de ADN între diferiți vectori de clonare, menținând în același timp Cadrul de citire. Folosind Gateway, se pot clona segmente de ADN subclone pentru analiza funcțională. Sistemul necesită introducerea inițială a unui fragment de ADN într-o plasmidă cu două secvențe de recombinare flancante numite „att l 1” și „att l 2”, pentru a dezvolta o „clonă de intrare Gateway” (nomenclatură specială Invitrogen).
arhive mari de clone de intrare Gateway, care conțin marea majoritate a ORF-urilor umane, de șoarece și șobolan (cadre deschise de lectură) au fost clonate din bibliotecile ADNc umane sau sintetizate chimic pentru a sprijini comunitatea de cercetare folosind finanțarea NIH (National Institutes of Health) (de exemplu, colecția de Gene de mamifere, http://mgc.nci.nih.gov/). Disponibilitatea acestor casete genetice într-o plasmidă standard de clonare a Gateway-ului îi ajută pe cercetători să transfere rapid aceste casete în plasmide care facilitează analiza funcției genice. Clonarea Gateway – ului necesită mai mult timp pentru configurarea inițială și este mai scumpă decât metodele tradiționale de clonare pe bază de enzime de restricție și ligază, dar economisește timp și oferă clonare mai simplă și extrem de eficientă pentru aplicațiile down-stream.
tehnologia a fost adoptată pe scară largă de comunitatea de cercetare a științelor vieții, în special pentru aplicații care necesită transferul a mii de fragmente de ADN într-un singur tip de plasmidă (de exemplu, una care conține un promotor CMV pentru exprimarea proteinelor în celulele mamiferelor) sau pentru transferul unui fragment de ADN în multe tipuri diferite de plasmide (de exemplu, pentru expresia proteinelor bacteriene, insecte și mamifere).