Gateway-kloningssystemet, uppfunnet och kommersialiserat av Invitrogen sedan slutet av 1990-talet, är en molekylärbiologisk metod som gör det möjligt för forskare att effektivt överföra DNA-fragment mellan plasmider med hjälp av en proprietär uppsättning rekombinationssekvenser, ”Gateway att” – platserna och två proprietära enzymblandningar, kallade ”LR-Klonaseoch” BP-Klonase”. Gateway-kloningsteknik möjliggör överföring av DNA-fragment mellan olika kloningsvektorer samtidigt som läsramen bibehålls. Med hjälp av Gateway kan man klona subklon-DNA-segment för funktionell analys. Systemet kräver den initiala införandet av ett DNA-fragment i en plasmid med två flankerande rekombinationssekvenser som kallas ”att L 1” och ”att L 2”, för att utveckla en ”Gateway Entry clone” (special Invitrogen nomenklatur).
stora arkiv av Gateway-Postkloner, som innehåller den stora majoriteten av mänskliga, mus-och råttorf (öppna läsramar) har klonats från mänskliga cDNA-bibliotek eller kemiskt syntetiserats för att stödja forskarsamhället med hjälp av NIH (National Institutes of Health) finansiering (t.ex. Mammalian Gene Collection, http://mgc.nci.nih.gov/). Tillgängligheten av dessa genkassetter i en standard Gateway kloning plasmid hjälper forskare att snabbt överföra dessa kassetter till plasmider som underlättar analysen av genfunktionen. Gateway kloning tar mer tid för initial set-up, och är dyrare än traditionella restriktionsenzym och ligasbaserade kloningsmetoder, men det sparar tid, och erbjuder enklare och mycket effektiv kloning för down-stream applikationer.
tekniken har i stor utsträckning antagits av life science-forskarsamhället, särskilt för applikationer som kräver överföring av tusentals DNA-fragment till en typ av plasmid (t.ex. en som innehåller en CMV-promotor för proteinuttryck i däggdjursceller) eller för överföring av ett DNA-fragment till många olika typer av plasmider (t. ex. för bakterie -, insekts-och däggdjursproteinuttryck).