International Journal of Molecular Medicine

Úvod

kůže slouží jako fyzikální a chemické barrierbetween interiéru tělo a vnější prostředí, whichconsists podkladového dermis segmentovaného původu a anoverlaying epidermis ektodermální původ. Ačkoli tyto dvě vrstvy plní různé funkce, komunikují v různýchzpůsoby a na různých úrovních. Vitální bariérová funkce kůže jepředevším zajišťuje její horní stratifikovaná epidermis, složená zproliferační bazální a diferencované suprabazální keratinocyty(1). K dokončení těchto funkcí,kmenové buňky v bazální vrstvě jsou schopné self-renewalthroughout život a produkují dceřiné buňky, které procházejí diferenciace (2). To znamená, že rovnováha mezi theproliferation a diferenciace bazální keratinocyty nezbytné pro epidermální integrity, a to zaručuje, že výskyt oftissue obnovu, která je nezbytná k dokončení normální physiologicalfunctions. Kromě udržování tkáňové homeostázy, stemcells s bydlištěm v epidermis a vlasových folikulů také participatein opravu pokožky po zranění (3,4).V kůži, různé fáze hojení ran vyvíjet v dynamicinteractions mezi epidermální buňky, kožní buňky a bonemarrow-odvozené buňky. Keratinocyty představují „první liniibrany“ těla proti vnějšímu prostředí. Proto jsou prvními respondenty na zranění. S vydáním ofinflammatory cytokinů a kontrakci kolagenní vlákna,bazální epidermální keratinocyty se aktivují a migrují do okolí rány, kde se množí a diferencují do thecellular obsah tkáň byla obnovena (5). Řada pozorování máže epidermis má vliv na patologiikožní jizvy (6,7). U pacientů s popáleninami se hypertrofické jizvyvyskytují častěji, když se rány hojí sekundárním záměrem, zatímco časné štěpování kůže potlačuje tvorbu jizev (8). Funayama et aldemonstrated, že keloid-získané fibroblasty co-kultivované withkeloid-odvozené keratinocyty byly výrazně více proliferativeand rezistentní k apoptóze, než ty, co-kultivovaný s normalskin-odvozené keratinocyty (9).V podobné co-kultura systém, bylo zjištěno, že keloid-derivedkeratinocytes podporoval zvýšenou produkci kolagenu, stejně jako zvýšená proliferace normální fibroblasty (10). Zejména, keloid-derivedkeratinocytes bylo prokázáno, že vykazují zvýšené expressionof sada histonů geny esenciální pro replikaci DNA incomparison s výrazem úrovně v normálních buňkách, andkeratinocytes v epidermis hypertrofické jizvy mají enteredan alternativní diferenciace cestu a vyjádřit proliferativephenotype (11,12). Tyto výsledky naznačují, že rovnováhy mezi proliferací a diferenciací ofkeratinocytes je jejich poškození v jizva tkáně, a to fundamentalabnormalities v keratinocyty mohou hrát důležitou roli inskin regenerace a její patogenezi, než bylo previouslyappreciated.

V této studii, normální, rána okrajem andhypertrophic jizva tkáně byly získány a analyzovány usinghistological a imunofluorescenční metody, aby prošetřila thedifferences v morfologii, stejně jako keratin výraz profilesduring epidermální regeneraci. Naše výsledky ukazují, že tam byla změna ve keratin výraz profily v epidermalkeratinocytes z normální, rána okrajem a hypertrofické scartissues, který odpovídal s abnormalitami ve struktuře z bazální membrány (BM). Pomocí panelu protilátek k BMcomponents, jsme se potvrzuje naši hypotézu a zjistili, že BMwas pozitivní regulátor nábor předchůdce-jako cellsto bazální vrstvy epidermis. Naše data to naznačujíalterace ve struktuře BM podporuje bazální keratinocytypřijmout proliferativní fenotyp Jak in vivo, tak invitro.

Materiály a metody

vzorky Tkáně

Hypertrofické jizvy (4 samice a 3 samci; agerange 18-40 let) a rány okraje tkáně (3 ženy a 5 mužů;věkové rozmezí 18-40 let) vzorky byly získány od pacientů, kteří hadundergone před rekonstrukční hořet operaci. Jako kontrola byla použita normální kožní tkáň (4ženy a 3 muži; věkové rozmezí, 18-40 let) sousedící s scarexcision během chirurgického zákroku. Předkožky byly také získány od mužů podstupujících obřízku (10 mužů; věkové rozmezí, 18-20 let). Tato studie byla schválena EthicsCommittee Čínské PLA General Hospital (Peking, Čína), zkouška informovaný souhlas byl získán od všech osob před toobtaining vzorků.

Imunofluorescenční barvení

Normální pleť, hojení hran a hypertrofické jizvy tissuesamples byly fixovány v 10% pufrovaném formalínu, dehydratované throughethanol řešení se zvýšenou koncentrací postupně, akonečně vložené do parafínu, resp. Parafín-embeddedtissues byly nakrájíme na 4-µm-silné oddíly pro barvení withhematoxylin a eosin (H&E), Masson je trichromatické, andmethenamine stříbro (vše od Zhongshan Golden Bridge, Peking,Čína). Snímky byly zachyceny pomocí optického mikroskopu (BX53;Olympus, Tokio, Japonsko). Provést imunofluorescenční barvení, thesections byly fixovány v 4% paraformaldehydu po dobu 30 min, a thenpermeabilized v 0,2% Triton X-100 (T8787; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS) po dobu 10 min. Tyto řezy byly inkubovány s primárními anti-těly při 4°C přes noc a poté se sekundárními protilátkami po dobu 2 hodin při pokojové teplotě. Následující primární anti těla byly použity: mouse anti-humancytokeratin (CK)10 (1:200, ab111447) a králičí anti-lidské CK14(1:200, ab7800) (oba z Abcam, Cambridge, MA, USA), rabbitanti-lidské CK5 (1:200, ZA-0518; Zhongshan Goldenbridge, Peking,Čína), mouse anti-human CK19 (1:200, ab53119; Abcam), rabbitanti-lidské integrin-β1 (1:200, PB0063; Boster, Wuhan, Čína); mouseanti-lidské integrin-β4 (1:200, ab128068; Abcam), mouse anti-humanlaminin (1:200, ZM-0181; Zhongshan Goldenbridge), rabbit anti-humanlaminin-5 (1:200, ab14509; Abcam) a mouse anti-human kolagenu IV(1:200, ZM-0081; Zhongshan Goldenbridge). Následující secondaryantibodies byly použity: Alexa-Fluor 488-konjugované anti-mouse (1:200,ab150117) a Alexa-Fluor 594-konjugované anti-rabbit (1:200,ab150080) (oba z Abcam). Jádra byla obarvena DAPI (H-1200; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA).Imunofluorescenční snímky byly zachyceny pomocí konfokálního laserového mikroskopu (SP8; Leica, Solms, Německo).

buněčná kultura a léčba

primární lidské epidermální keratinocyty (HEKs) byly izolovány z mužských předkožek, jak bylo popsáno výše (13), s menšími modifikacemi. Humanimortalizované keratinocytární (HaCaT) buňky byly zakoupeny z theChina Infrastruture zdrojů buněčné linie (3111C0001CCC000373;Peking, Čína). Jak HEKs a HaCaT buňky byly incubatedin EpiLife střední (M-EPI-500-CA; Invitrogen Life Technologies,Carlsbad, CA, USA) s přídavkem 0,06 mM Ca2+, 1%EpiLife definovanými růst doplňku (Y-001-5; Invitrogen LifeTechnologies) a 1% penicilinu / streptomycinu (P1400; Solarbio, Peking, Čína). K prošetření role BM v regulatingkeratinocyte chování in vitro, HEKs a HaCaT cellswere á v 60 mm-nádobí potažené MaxGel ECM (E0282) andcollagen typ IV (C7521) (oba Sigma-Aldrich), resp.Pro léčbu Ca2+ byly buňky inkubovány v Epilifemediu doplněném 1,5 mM Ca2 + po dobu 0, 12 a 24 hodin.Maxgel ECM obsahuje složky lidské extracelulární matrice (ECM), včetně kolagenů, lamininu, fibronektinu, tenascinu a elastinu, jakož i řady proteoglykanů a glykosaminoglykanů. Buňky, které nebyly ošetřeny Ca2+, byly použity jako kontroly.

Reverzní transkripce-kvantitativní(real-time) PCR (RT-qPCR)

Celková RNA byla izolována z buněk poté, co byly vystaveny různé procedury, pomocí TRIzol reagent(15596-026; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) a pak cDNA wassynthesized pomocí GoScript reverzní transkriptázy (A5001; Promega, Madison, WI, USA) podle pokynů výrobce. Theprimer sekvence použité pro genové amplifikace jsou uvedeny v Tabulce I. qPCR reakce byly performedwith GoTaq qPCR Master Mix (A6001; Promega) pomocí ABI 7500Real-Time PCR systém a software (Applied Biosystems, Foster City,CA, USA). Reakční protokol sestával z následujících cyklů: 95°C po dobu 15 s, 55°C po dobu 30 s a 72°C po dobu 30 s pro 40 cyklů amplifikace PCR.

Western blot analýza

Celkový protein byl izolován z buněk a 20µg bílkovin byl rozpuštěn v substrátu rozpustné v pufru. Theproteiny byly poté odděleny SDS-PAGE a přeneseny na protipolyvinyliden difluoridové (PVDF) membrány (IPFL00010; Millipore, Billerica, MA, USA). Po zablokování, skvrny zkoumali s primární protilátky přes noc při 4°C. protilátky použité forwestern blot analýzy zahrnuty CK10 (1:1000, ab111447), CK14(1:500, ab7800), CK19 (1:500, ab53119), integrin-β4 (1:500, ab128068) a myší protilátka proti lidskému β-aktinu (1: 5000, ab6276) (všechny z Abcam). Po promytí byly membrány inkuboványsekundární protilátky, které byly kozí anti-králičí a kozí-myší IgG konjugované s peroxidázou křenu (sc-2004,1: 1000; sc-2005, 1: 1000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Podobná kapely byly detekovány enhancedchemiluminescence (ECL) kit (PE-0010-100; Solarbio, Peking, Čína)a zobrazen pomocí ImageQuant LAS 4000 systému (GE HealthcareBio-Věd, Pittsburgh, USA).

Statistická analýza

všechny experimenty byly opakovány alespoň 3krát, pokud není uvedeno jinak. Údaje jsou uvedeny jako prostředek ±směrodatná odchylka (SD). Statistická analýza byla provedena pomocísoftware SPSS 20.0. Porovnání dat bylo provedeno pomocí t-testu nezávislého studenta a jednosměrné ANOVA následované Lsdtestem. Hodnota p <0,05 byla považována za indikující statisticky významný rozdíl.

Výsledky

Morfologické rozdíly v normální,rána okrajem a hypertrofická jizva tkáně

Kůže hojení rány je přesné předělávání procesu,který je rozdělen klasicky na čtyři překrývající se fáze andinvolves interakce mnoha různých tkáních a celllineages (5). V chronických ran,nicméně, normální hojení je přerušen, což resultsin patologický cyklus zánětu a proteázy releaseleading k rozvoji patologické jizvy. V této studii,vyhodnotit morfologické změny, ke kterým v regeneratingepidermis při hojení kožních ran, vzorky normální, woundedge a hypertrofická jizva tkáně byly získány v pořadí proveďte rutinní H&E a Masson je trichromatické barvení. Ve vzorcích normální kůže byla histologická struktura kůževiditelné, ukazující vrstvy epidermis a dermis. Na epidermiscontained 4 až 5 vrstev, v nichž diferencované keratinocyty andgradually splatná do trnové buněk, granulárních buněk a cornifiedcells během jejich vnější průchod (Obr. 1A). Navíc, v podkladudermis, fibroblasty tvořily volnou pojivovou tkáň, která byla bohatáv paralelních kolagenních vláknech (obr.1D). V tkáních kolem okraje rány se však epidermis proliferovala; byla složena z několika vrstevkeratinocytů odlišné morfologie a byla viditelně zvýšenatloušťka (obr. 1B a E). Theepidermis a dermis propletený skrz prsty-jako projekce(tzv. rete ridges), která zvýšila plocha contactbetween epidermis a dermis. V obou normální a woundedge tkáně, bazální keratinocyty byly uspořádány jako regimentedsingle vrstva cuboidal nebo nízkých cylindrických buněk, které jsou připojené na trnový vrstev buněk nad (Obr.1A a B). Histologická struktura hypertrofické jizvytkáně se lišila od normální kožní tkáně tím, že měla bohatýkrevní zásobení a silnou epidermální vrstvu(obr. 1C a F). Dermis byla složenaz velké části husté, neuspořádané pojivové tkáně, která zahrnujetěsto kolagenních vláken nepravidelného tvaru a většíprůměr (obr. 1F). Na furtherclarify rozdíly v histologické struktuře mezi normální,rána okrajem a hypertrofická jizva tkáně, methenamin silverstaining byla provedena pro posouzení vzniku BM, whichindicated, že BM struktura byla zaznamenána u části z normální a rány okraji tkání (Obr. 1G a H). V tkáních jizvy však barvení BM chybělo (obr.1I).

Rozdíly v expresi cellmarkers v epidermální keratinocyty v normální, rána okrajem andhypertrophic jizva tkáně

Vzhledem k morfologické rozdíly, které wereobserved v normální, rána okrajem a hypertrofická jizva tkáně,zkoumali jsme, zda bazální keratinocyty vykazovaly differentcellular chování během tvorby jizev. Zpočátku jsme performedimmunofluorescence barvení k detekci exprese CK10, CK14,CK5, CK19 a integrin-β1 v oddílech normální, rána okrajem andscar tkání. Předchozí studie ověřila, že CK10 je markerof diferencované keratinocyty, že CK14 a CK5 jsou značky ofproliferating bazální keratinocyty nebo TAs, a to CK19 je aputative marker epidermální progenitorové buňky, nebo kmenové buňky v theskin (14-17). Integrin-β1 je také považován za marker prekurzorových buněk v kůži (18,19). Naše výsledky ukázaly, že CK10 bylvyjádřeno ve vnější vrstvě epidermis v normálních aobočených okrajových tkáních (obr. 2A ab), a v suprabazálních, nevyléčitelně rozlišování buněk v epidermis hypertrofické jizvy (Obr. 2C). CK14 byl vyjádřen v bothbasal a suprabazálních vrstev v rozvrstvené epidermis všechnytři tkání (Obr. 2D-F), adošlo k rozsáhlé distribuci CK14 ve vícevrstvé epidermis tkáně jizvy(obr.2F). Distribuční vzorec CK5 byl podobný distribučnímu vzoru ofCK14 (obr. 2G-I), který naznačilzvýšený počet proliferujících buněk vhyperproliferativní epidermis. Integrin-β1 a CK19 byly vyjádřenyv bazální vrstvě normální epidermis (obr. 2J A M) a v bazální asupra-bazální vrstvy epidermis okraje rány (obr. 2K a N), ale nebyly detekovatelnév epidermis hypertrofických jizevních tkání (obr. 2L a O). Společně tytopozorování naznačují, že profil exprese keratinu bazalkeratinocytů se lišil mezi normálním okrajem rány ahypertrofické tkáně jizvy. Ačkoli méně buněk exprimujících CK19BYLY detekovány v bazálních a suprabazálních vrstváchhypertrofické tkáně jizvy (obr.2P), proliferativní fenotyp byl odhalen v důsledku vyššírozsah výraz CK14 a CK5 v multilayeredepidermis.

Změnil BM struktura přispívá k thedifferential keratin výraz profilu v epidermální keratinocytesin vivo

Jako klíčovou součást kmenových buněk výklenek, ECMnot pouze kotvy kmenových buněk, ale také řídí jejich osud (20). Jak bylo uvedeno výše, histologická struktura BM se zdála být nepřítomná ve vzorcích hypertrofické tkáně jizvy. Vzhledem k rozdílům v thekeratin výraz profily v bazální vrstvě normální, woundedge a hypertrofické jizvy epidermis, pak jsme spekulovali, že thestructural abnormality BM hrát roli v regulaci buňky, osud rozhodnutí bazálních keratinocytů během hojení ran. Organizováno tato hypotéza, imunofluorescenční barvení bylo performedto vizualizaci komponenty BM v normální, rána okrajem andhypertrophic zjizvená tkáň vzorků. Naše výsledky to odhalilyexprese kolagenu IV byla detekována v oblasti BM v obou normálních (obr. 3A) a okraj rány (obr. 3B) tkáně. Nicméně, formování struktur podobných BM s nepřítomností kolagenu Ivexprese byla pozorována v epidermis hypertrofických skart (obr. 3C). Přestože exprese lamininu byla zjištěna ve všech třech typech tkání (obr. 3D–F), double-labellingof lamininu-5 a jeho receptoru integrinu-β4 dále ověřena ourobservation, že struktura BM byl změněn v theepidermis z hypertrofická jizva tkáně; negativní barvení obou lamininu-5 a integrin-β4 (Fíky.3I a 4G-I) byly pozorovány Jakov porovnání s normálem (obr. 3G a 4A-C) a tkáně okraje rány (obr. 3H a 4D-F). Vzhledem k těmto zjištěním, je pravděpodobné, že normální BM přispěly k náboru integrin-β1-a CK19-exprimujících buněk v bazální vrstvě normální andwound okraji epidermis. Abnormality ve struktuře BM však vyvolaly bazální keratinocyty k diferenciaci a přijetí aproliferativního fenotypu během patogeneze jizev.

Změnil BM struktura podporuje epidermalkeratinocytes přijmout proliferativní fenotyp in vitro

mechanické podpory poskytnuté BM je určena především jeho kolagenu typu IV lešení (21), do které lamininu sítí andperlecan oligomery jsou integrovány do cross-linking nidogens tofinally sestavit list-jako BM komplex (22). Dále vyjasnit role theBM v nařízení epidermálních keratinocytů chování, jsme usedthe lidské BM extrakt odvozený ECM kabát kultury nádobí nezbytného k ovládání vzor buňka-matrix, adheze. Jak je znázorněno inFig. 5, ECM administrationresulted v upregulaci exprese integrin-β4 v HEKs (obr. 5A) a HaCaT (obr. 5B) buňky, které byly přítomny naplazmatické membrány a v místech připojení buněčné matrice. Také jsme provedli analýzu western blot, abychom zkoumali hladiny proteinu integrin-β4 v epidermálních buněčných liniích s nebo bez ECM coating. Naše data ukazují, že vyšší hladiny integrinu-ß4byly detekovatelné ve skupinách léčených ECM než v kontrolách, což dále potvrdilo fluorescenční imunostainingové nálezy (obr. 5C). Navíc, HEKs andHaCaT buňky byly přešel na medium obsahující 1,5 mMCa2+ za uvedené období generatedifferentiating epidermální buňky, jak bylo popsáno dříve (23,24). Po ošetření Ca2+morfologické změny v obou HEKs (obr. 6A) a HaCaT buňky (obr. 6B) byly pozorovány pod lightmicroscope, který zahrnoval mobilní rozšíření a zploštění.Ca2+ indukované expresi CK10 (Fíky. 5D, G A J a 6C A D) a CK14 (obr. 5E, H A J a 6C A D) v závislosti na čase inepidermální buněčné linie na obou mRNA (obr. 5D, E, G A H a 6C A D) a protein (obr. 5J) hladiny, přičemž maximální hladiny exprese Ck10 a ck14 byly pozorovány 24 hodin po zahájení léčby 1,5 mMCa2+ v HEKs (obr. 5D, E A J a 6C) a hacatovy buňky (obr. 5G, H A J a 6D). Po léčbě Ca2+ byla exprese CK19 v HEKs snížena a dosáhla její nejnižší úrovně 24 hodin po zahájení léčby Ca2+ (obr. 5F A J a 6C). Podobné výsledky byly pozorovány vhacat buňky (obr. 5I a J A6D). ECM léčby, nicméně,snížit rozlišení odpovědi keratinocyty spojená s Ca2+ správy v HEKs a HaCaT buněk,a zvýšená exprese CK19 na 12 h a 24 h afterCa2+ ošetření (Obr. 5F, I A J). Dále určit potenciální role BM v nařízení epidermálních keratinocytů chování, typ IV collagenwas použít k vytvoření BM-jako struktury in vitro. Léčba kolagenem IV přispěla k expresi CK19 a snížila expresi CK10 a CK14 na hladinách mRNA a bílkovin v obou HEKs (obr. 7A-C A G) a HaCaTcells (obr. 7D-F A G). Theseresults dále validovány na naše in vivo zjištění, že BMappears být pozitivní regulátor nábor ofprecursor-jako buňky v bazální vrstvě epidermis.Změny v BM struktura podporoval rozvoj aproliferative fenotyp v bazální keratinocyty, jak je uvedeno po theenhanced exprese markerů spojených s cellproliferation, např. CK14 a CK5.

Diskuse

V této studii jsme vyšetřovali, themorphological změny, které se vyskytují v průběhu epidermální regeneraci aspart rány proces hojení. Naše data prokázala, že thehistological struktura hypertrofická jizva tkáně differedfrom, že normální kožní tkáně, s výrazným nárůstem inepidermal tloušťka mezi bazální vrstvy, stratum corneumbeing pozorován. Zejména se zdálo, že barvení BM chybí v jizvové tkáni. Navíc, imunofluorescenční barvení pro CK10,CK14, CK5, CK19 a integrin-β1 je uvedeno, že differentialexpression bazálních keratinocytů značky se lišily mezi samplesof normální, rána okrajem a hypertrofická jizva tkáně, avést epidermis hypertrofické jizvy exhibiteda proliferativní fenotyp přepnutím výraz ofintegrin-β1 a CK19, aby CK14 a CK5, markery cellproliferation, vícevrstvá epidermis. Vzhledem k těmto zjištění,a tak jsme předpokládali, že BM hraje roli v regulaci buňky, osud rozhodnutí epidermálních keratinocytů během hojení healing.By pomocí panelu protilátek spojená s BM komponenty, wevalidated naše hypotéza, že struktura BM byl alteredin na hypertrofická jizva tkáně. Naše výsledky ukázaly, že BMcontributed náboru CK19-exprimujících buněk v thebasal vrstvy normální a rány okraji epidermis, whereasabnormalities ve struktuře BM vyvolané basalkeratinocytes rozlišit a přijmout proliferační phenotypeduring jizvu patogenezi. Pomocí ECM a kolagenu IV napodobovat theBM struktury in vitro, dále jsme potvrdili naše invivo pozorování a ukázal, že se BM snižuje thedifferentiating odpovědi keratinocytů vyvolané byCa2+ správy v epidermální buněčné linie andenhanced výraz CK19, domnělý marker epidermalprogenitor buněk.

BM hraje zásadní roli vdiferenciace, proliferace, přežití a migrace buněkběhem embryonálního vývoje. V kůži je BM fyzickyodděluje epidermis od podkladové dermis. Na basalkeratinocytes v epidermis připojit k podkladové BM throughintegrins, které se váží na některé BM komponenty, jako kolagenu,lamininu a fibronektinu (25).BM tedy slouží nejen jako selektivní bariéra a strukturálníkaffold, ale také poskytuje komunikační rozhraní mezidermální fibroblasty a epidermální keratinocyty(2,26).BM se také váže na řadu cytokinů a růstových faktorů,které slouží jako rezervoár pro jejich řízené uvolňování, whichregulates keratinocytů-fibroblastů interakce na podporu rozvoje kůže, stejně jako hojení ran (27,28). Předchozí studie na jizvu formationhave zaměřena především na fibroblasty a málo je známo o úlohu nadložních epidermální keratinocyty (29,30). Existuje stále více důkazů, thatkeratinocytes může hrát důležitou roli v rozvoji ofpathological fibróza prostřednictvím parakrinní regulace fibroblastfunction (6,9,10).Bylo také prokázáno, že keratinocytů získaných z jizvy tissuesdiffered od normálních keratinocytů vystavovat diferenciální geneexpression profily (12). Themechanismy zodpovědné za základní abnormality vkeratinocytech během keloidních a hypertrofických jizev zůstávajíeluzivní. Naše data naznačila potenciální souvislost mezi remodelací BM a udržováním funkce keratinocytů během opravy ran a regenerace. Je dobře známo, že adhezní molekuly, jako jeintegriny A E-A N-kadherin, kotevní kmenové buňky k ECM (22). Ve světle našíchpozorování se zdá, že BM může představovat součástiniche komponenty pro nábor epidermálních progenitorových buněk v bazální vrstvě pokožky epidermis. Naše výsledky naznačují, že abnormální fungování BM snižuje připevnění basalprogenitor buněk do okolní mikroprostředí, a inducesthem přijmout proliferativní fenotyp, které může účet pro thepathogenesis jizev (Obr.8).

Poděkování

Tato studie byla podporována z části dotace z theNovel Program Pekingu (nos. 2008B53 a 2009A38) a národní Přírodní Science Foundation Číny (nos. 30901564,81101883, 81372067, 81121004 a 81230041) a Národní BasicScience a Rozvojový Program (973 Program, 2012CB518105).

	Fuchs e a Raghavan S: dostat se podkůže epidermální morfogeneze. Nat Rev Genet. 3:199–209. 2002.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Breitkreutz D, Mirancea N a Nischt R:Suterén membrány v kůži: unikátní matrix struktury s diversefunctions? Histochem Cell Biol. 132:1–10. 2009. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Blanpain C a Fuchs E: Epidermální stemcells kůže. Annu Rev Cell Dev Biol. 22:339–373. 2006.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Snippert HJ, Haegebarth, Kasper M, JaksV, van Es JH, Barker, N., van de Wetering M., van den Born M, BegthelH, Vries RG, et al: Lgr6 značky kmenových buněk ve vlasovém folikulu thatgenerate všech buněčných linií na kůži. Věda. 327:1385–1389.2010. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Broughton G II, Janis JE a Attingere CE:základní vědy hojení ran. Plast Reconström 117 (Suppl7): 12S–34S. 2006. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bellemare J, Roberge CJ, Bergeron D,Lopez-Valeé CA, Roy M a Moulin VJ: Epidermis, podporuje dermalfibrosis: úloha v patogenezi hypertrofické jizvy. J. Pathol.206:1–8. 2005. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Andriessen MP, Niessenem FB, Van de KerkhofPC a Schalkwijk J: Hypertrofické jizvy je spojena withepidermal abnormality: imunohistochemická studie. J. Pathol.186:192–200. 1998. Zobrazit Článek : Google Scholar
	Teepe RG, Kreis RW, Koebrugge EJ,Kempenaar JA, Vloemans AF, Jeho RP, Boxma H, Dokter J, HermansJ, Ponec M, et al: použití kultivovaných autologních epidermis v léčba rozsáhlých popálenin. J. 30:269–275. 1990.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Funayama E, Chodon T, Oyama a SugiharaT: Keratinocyty podporují proliferaci a inhibici apoptózy theunderlying fibroblastů: důležitou roli v patogenezi ofkeloid. J Invest Dermatol. 121:1326–1331. 2003. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lim IJ, Phan TT, Bobkový BH, Qi R, Huynh H,Tan WT, Lee ST a Longaker MT: Fibroblasty cocultured s keloidkeratinocytes: normální fibroblasty vylučují kolagen v keloidlikemanner. Am J Physiol Cell Physiol. 283: C212-C222. 2002. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Hahn JM, Glaser K, McFarland KL, AronowBJ, Boyce ST a Supp DM: Keratinocyty odvozené od keloidů vykazují anabnormální profil genové exprese v souladu s odlišným kauzálním rolem v keloidní patologii. Oprava Rány Regen. 21:530–544. 2013.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Machesney M, Tidman N, – Na, Kirby Země Leigh já: Aktivované keratinocyty v epidermis ofhypertrophic jizvy. Jsem J Pathol. 152:1133–1141. 1998.PubMed/NCBI
	Orazizadeh M, Hashemitabar M, BahramzadehS, Dehbashi FN a Saremy S: Srovnání enzymatických aexplantační metody pro kultivaci keratinocytů izolovaných zlidská předkožka. Biomed Rep. 3: 304-308. 2015.PubMed/NCBI
	Su L, Morgan PR a Varování EB: Keratin 14, 19 výraz v normální, dysplastické a maligní oralepithelia. Studie využívající in situ hybridizaci aimunohistochemii. J Ústní Patol Med. 25:293–301. 1996.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Michel M., Török N, Godbout MJ, Lussier M,Gaudreau P, Royal a Germain L: Keratin 19 jako biochemicalmarker kožních kmenových buněk in vivo a in vitro: keratin 19expressing buňky jsou rozdílně lokalizovány ve funkci ofanatomic stránky, a jejich počet se mění s dárcem věku a culturestage. J Cell Sci. 109:1017–1028. 1996.PubMed/NCBI
	Khanom R, Sakamoto K, Pal SK, Shimada Y,Morita K, Omura K, Miki Y a Yamaguchi A: Vyjádření bazální cellkeratin 15 a keratin 19 v ústní dlaždicové nádory representsdiverse pathophysiologies. Histol Histopatol. 27:949–959.2012.PubMed / NCBI
	Fuchs E: kožní kmenové buňky: stoupající kpovrch. Jiří Biol. 180:273–284. 2008. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Jo YC, Lin HH a Tang MJ: příběh twocollagen receptorů integrinu β1 a discoidin domény receptoru 1, inepithelial diferenciaci buněk. Am J Physiol Cell Physiol.303: C1207-C1217. 2012. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Borowska K, Jedrych B, Czerny K andZabielski S: Úloha integrinů ve fyziologických apatogenních procesů. Pol Merkur Lekarski. 21:362–366. 2006.Článek V Polštině.
	Lane SW, Williams DA A Watt FM: modulace výklenku kmenových buněk pro regeneraci tkání. NatBiotechnol. 32:795–803. 2014. ViewArticle : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Breitkreutz D, Koxholt jsem, Thiemann K andNischt R: Kůže bazální membrány: základem epidermalintegrity – BM funkcí a rozmanité role překlenovací moleculesnidogen a perlecan. Biomed Res Int. 2013(179784)2013. Zobrazit Článek : Google Scholar
	Timpl R a Hnědé JC: Supramolecularassembly bazální membrány. Bioesays. 18:123–132. 1996.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Hennings H, Michael D, Cheng C, SteinertP, Holbrook K a Yuspa SH: Vápník regulace růstu anddifferentiation myší epidermální buňky v kultuře. Buňka.19:245–254. 1980. Zobrazit článek: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Hennings H a Holbrook KA: Kalciumregulace kontaktu buněk a buněk a diferenciace epidermálníbuněk v kultuře. Ultrastrukturální studie. Exp Cell Res.143:127-142. 1983. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Burgeson ZNOVU a Christiano AM: Thedermal-epidermální junkce. Curr Opin Cell Biol. 9:651–658. 1997.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	LeBleu VS, Macdonald B a Kalluri R:Struktura a funkce suterénu membrány. Exp Biol Med (Maywood). 232:1121–1129. 2007. Zobrazit Článek : Google Scholar
	Iozzo RV: proteoglykany bazální membrány: od sklepa ke stropu. Nat Rev Mol Cell Biol. 6:646–656. 2005.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Werner S., Krieg T a Smola H:Keratinocytů-interakce fibroblastů při hojení ran. Jaromír Jágr. 127:998–1008. 2007. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Moulin V, Castilloux G, Šnek FA, GarrelD, O ‚ connor-McCourt M a Germain L: Modulovaná odpověď naocytokiny lidských myofibroblastů při hojení ran ve srovnání s dermalfibroblasty. Exp Cell Res. 238: 283-293. 1998. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Gabbiani G, Ryan GB a Majne G: Presenceof modifikované fibroblasty v granulační tkáně a jejich possiblerole do rána kontrakce. Experientia. 27:549–550. 1971.Zobrazit článek: Google Scholar: PubMed / NCBI