International Journal of Molecular Medicine

introduktion

huden tjener som den fysiske og kemiske barrieremellem det indre legeme og det ydre miljø, som består af en underliggende dermis af mesodermal oprindelse og anoverlaying epidermis af ektodermal oprindelse. Selvom disse tolag udfører forskellige funktioner, kommunikerer de i forskelligemåder og på forskellige niveauer. Den vitale barrierefunktion af huden erprimært tilvejebragt af dens øvre stratificerede epidermis, sammensat afprolifererende basale og differentierede suprabasale keratinocytter(1). For at fuldføre disse funktioner er stamceller i basallaget i stand til selvfornyelsegennem hele livet og de producerer datterceller, der gennemgår differentiering (2). Således er balancen mellemspredning og differentiering af de basale keratinocytter afgørende for epidermal integritet, og det sikrer forekomsten afvævsfornyelse, som er nødvendig for at fuldføre normale fysiologiskefunktioner. Ud over at opretholde vævshomeostase deltager stamceller, der er bosiddende i epidermis og hårsækkene, ogsåi reparation af epidermis efter skade (3,4).i huden udvikler forskellige faser af sårheling sig i dynamiskinteraktioner mellem epidermale celler, dermale celler og knoglesmalle afledte celler. Keratinocytter repræsenterer ‘første linje afforsvar’ af kroppen mod det ydre miljø. Derfor er de de første respondenter på skade. Med frigivelsen afinflammatoriske cytokiner og sammentrækningen af kollagene fibre aktiveres de basale epidermale keratinocytter og migrerer ind i sårområdet,hvor de spredes og differentieres, indtil detcellulære indhold af vævet er blevet fornyet (5). En række observationer harforeslog, at epidermis har en virkning på patologien afkutane ar (6,7). Hos forbrændingspatienter, hypertrofiske arforekommer hyppigere,når sår heles ved sekundær hensigt, mens tidlig hudtransplantation ser ud til at undertrykke ardannelse(8). Funayama et aldemonstrerede, at keloidafledte fibroblaster co-dyrkede medkeloidafledte keratinocytter var signifikant mere proliferative og resistente over for apoptose end dem, der blev dyrket med normalskindafledte keratinocytter (9).i et lignende co-kultursystem blev det fundet, at keloidafledtkeratinocytter fremmede øget kollagenproduktion såvel somDen øgede proliferation af normale fibroblaster (10). Især har keloid-derivedkeratinocytter vist sig at udvise det øgede udtrykaf et sæt histongener, der er essentielle for DNA-replikation, i sammenligning med ekspressionsniveauerne i normale celler, ogkeratinocytter i epidermis af hypertrofiske ar er kommet ind i en alternativ differentieringsvej og udtrykker en proliferativfenotype (11,12). Disse resultater tyder på, at balancen mellem spredning og differentiering afkeratinocytter er dysreguleret i arvæv, og at fundamentalabnormaliteter i keratinocytter kan spille en vigtigere rolle ihudregenerering og dens patogenese, end det tidligere var værdsat.

i den foreliggende undersøgelse blev normale, sårkant oghypertrofiske arvæv opnået og analyseret ved anvendelse af histologiske og immunofluorescensmetoder til at undersøge forskellene i morfologi såvel som keratinekspressionsprofiler under epidermal regenerering. Vores resultater viste, at der var en variation i keratinekspressionsprofilerne i epidermalkeratinocytterne fra normal, sårkant og hypertrofisk skarvæv, hvilket svarede til abnormiteter i kældermembranens struktur (BM). Ved at bruge et panel af antistoffer mod Bmkomponenter validerede vi vores hypotese og fastslog, at Bmvar en positiv regulator for rekruttering af precursorlignende cellertil det basale lag af epidermis. Vores data indikerer detændringer i strukturen af BM fremmer basale keratinocytterat vedtage en proliferativ fænotype både in vivo og invitro.

materialer og metoder

vævsprøver

hypertrofisk arvæv (4 kvinder og 3 mænd; agerange 18-40 år) og sårkantvæv (3 kvinder og 5 mænd;aldersgruppe, 18-40 år) prøver blev opnået fra patienter, der havde gennemgået tidligere rekonstruktiv forbrændingskirurgi. Normalt hudvæv (4kvinder og 3 mænd; aldersgruppe, 18-40 år) ved siden af skræmmenudvidelse under operationen blev brugt som kontrol. Forhud blev ogsåopnået fra mænd,der gennemgår omskæring (10 mænd; aldersgruppe, 18-20 år). Denne undersøgelse blev godkendt af EthicsCommittee of the Chinese PLA General Hospital (Beijing, Kina), og der blev indhentet skriftligt informeret samtykke fra alle personer, der forud for at få prøverne.

Immunofluorescensfarvning

Normal hud, sårkant og hypertrofisk arvæv prøver blev fikseret i 10% bufret formalin, dehydreret gennemethanolopløsninger med øget koncentration successivt ogEndelig indlejret i henholdsvis paraffin. Parafinindlejretvæv blev skåret i 4-tykke sektioner til farvning medhematoksylin og eosin (H&E), massons trichrom, ogmethenamin sølv (alle fra Golden Bridge, Beijing,Kina). Billeder blev taget ved hjælp af et optisk mikroskop (BH53;Olympus, Tokyo, Japan). For at udføre immunofluorescensfarvning blev dissektionerne fikseret i 4% paraformaldehyd i 30 minutter og derefterpermeabiliseret i 0,2% Triton H-100 (T8787; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) i fosfatbufret saltvand (PBS) i 10 minutter. Dissektioner blev inkuberet med primære anti-Legemer ved 4 kg C natten over og derefter med sekundære antistoffer i 2 timer ved stuetemperatur. Følgende primære antilegemer blev brugt: mus anti-humancytokeratin (CK)10 (1:200, ab111447) og kanin anti-human CK14(1:200, ab7800) (begge fra Abcam, Cambridge, MA, USA), rabbitanti-human CK5 (1:200, fra-0518; Chongshan Goldenbridge, Beijing,Kina), mus anti-human CK19 (1:200, ab53119; abcam), rabbitanti-human integrin-LAR1 (1:200, pb0063; Boster, huhan, Kina); MOUSEANTI-human integrin-lar4 (1:200, ab128068; ABCAM), anti-humanlaminin-mus (1:200, HM-0181; Hongshan Goldenbridge), kanin-anti-humanlaminin-5 (1:200, ab14509; Abcam) og mus-anti-human collagen IV(1:200, HM-0081; Hongshan Goldenbridge). Aleks-Fluor 488-konjugeret anti-mus (1:200,ab150117) og Aleks-Fluor 594-konjugeret anti-kanin (1: 200, ab150080) (begge fra Abcam). Kernerne blev farvet med DAPI (H-1200; Vektorlaboratorier, Burlingame, CA, USA).Immunofluorescensbilleder blev taget ved hjælp af et konfokalt laserscanningsmikroskop (SP8; Leica, Solms, Tyskland).

cellekultur og behandling

primære humane epidermale keratinocytter (HEKs) varisoleret fra de mandlige Forhud som tidligere beskrevet (13) med mindre modifikationer. De humanimmortaliserede keratinocyt (HaCaT) celler blev købt fraKina infrastruktur af Cellelinjeressourcer (3111c0001ccc000373; Beijing, Kina). Både HEKs og HaCaT-cellerne blev inkubereti EpiLife medium (M-EPI-500-CA; Invitrogen Life Technologies,Carlsbad, CA, USA) suppleret med 0,06 mM Ca2+, 1% EpiLife-defineret væksttilskud (S-001-5; Invitrogen LifeTechnologies) og 1% penicillin / streptomycin (P1400; Solarbio,Beijing, Kina). For at undersøge BM ‘ s roller i reguleringkeratinocytadfærd in vitro blev HEKs-og HaCaT-cellerneblev belagt i 60 mm-retter belagt med Maksgel ECM (E0282) ogkollagen type IV (C7521) (begge fra Sigma-Aldrich).Til Ca2 + – behandling blev cellerne inkuberet i EpiLifemedium suppleret med 1,5 mM Ca2+ i 0, 12 og 24 timer.ECM indeholder humane ekstracellulære komponenter (ECM), herunder collagener, laminin, fibronectin, tenascin og elastin samt et antal proteoglycaner og glycosaminoglycaner. Cellerneikke behandlet med Ca2+ blev brugt som kontroller.

revers transkription-kvantitativ (real-time) PCR (RT-kpcr)

Total RNA blev isoleret fra cellerne, efter at de blev udsat for de forskellige behandlinger ved hjælp af Trisol reagens(15596-026; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) og derefter cDNA blev syntetiseret ved hjælp af goscript revers transkriptase (A5001; Promega, Madison, USA) i henhold til producentens anvisninger. De primersekvenser, der anvendes til genamplificering, er anført i tabel I. kpcr-reaktioner blev udført med Kpcr-Masterblanding (A6001; Promega) ved hjælp af et ABI 7500-PCR-system og-programmer i realtid (Applied Biosystems,Foster City, CA, USA). Reaktionsprotokollen bestod af følgende cyklusser:95 liter C i 15 sek, 55 liter C i 30 sek og 72 liter C i 30 sek i 40 cyklusser af PCR-amplifikation.

vestlig blot-analyse

Total protein blev isoleret fra cellerne, og 20 liter protein blev opløst i substratopløselig buffer. Proteinerne blev derefter adskilt af SDS-PAGE og overført ontopolyvinylidendifluorid (PVDF) membraner (IPFL00010; Millipore,Billerica, MA, USA). Efter blokering blev blotterne undersøgt medprimære antistoffer natten over ved 4 liter C. antistofferne anvendt tilvestlig blot-analyse omfattede CK10 (1:1000, ab111447), CK14(1:500, ab7800), CK19 (1:500, ab53119), integrin-Karri 4 (1:500, ab128068) og musens anti-humane antistof-antistof (1:5000, ab6276) (alle fra Abcam). Efter vask blev membranerne inkuberet medsekundære antistoffer, som var gede anti-kanin og goatanti-mus IgG konjugeret til peberrodsperoksidase (sc-2004,1:1000; sc-2005, 1:1000; Santa Crus Biotechnology, Santa Crus, CA,USA). Immunreaktive bånd blev påvist ved enhancedchemiluminescence (ECL) kit (PE-0010-100; Solarbio, Beijing, Kina)og afbildet ved hjælp af billedkvaliteten LAS 4000-systemet (GE HealthcareBio-Sciences, Pittsburgh, USA).

statistisk analyse

alle eksperimenter blev gentaget mindst 3 gange,medmindre andet er angivet. Data præsenteres som middelværdi for standardafvigelse (SD). Statistisk analyse blev udført ved hjælp afspss 20.0-programmet. Data sammenligning blev udført ved hjælp afuafhængig studerendes t-test og envejs ANOVA efterfulgt af LSDtest. En P-værdi < 0,05 blev anset for at indikere en statistiskbetydelig forskel.

resultater

morfologiske forskelle i normal,sårkant og hypertrofisk arvæv

Hudsårreparation er en præcis remodelleringsproces,som er opdelt klassisk i fire overlappende faser ogindebærer interaktion mellem mange forskellige væv og cellelinjer (5). Ved kroniske sår afbrydes imidlertid den normale helingsproces, hvilket resulterer i en patologisk cyklus af inflammation og proteasefrigivelsefører til udvikling af et patologisk ar. I denne undersøgelse for at evaluere de morfologiske ændringer, der forekommer i regenereringepidermis under hudsårheling, blev der opnået prøver af normal, sårkant og hypertrofisk arvæv for atudføre rutine H&E og Massons trichromfarvning. Inormale hudprøver, den histologiske struktur af huden varsynlig, der viser lag af epidermis og dermis. Epidermisindeholdt 4 til 5 lag, hvor keratinocytter differentierede oggradvist modnet til spinøse celler, granulære celler og cornifiedceller under deres udadgående passage (Fig. 1A). Desuden udgjorde fibroblaster i underlægningendermis løst bindevæv, som var Rigi parallelle kollagene fibre (Fig.1D). I vævene omkring sårkanten spredte denepidermis sig imidlertid; det bestod af flere lag afkeratinocytter af tydelig morfologi og var synligt øgettykkelse (Fig. 1B og E). Denepidermis og dermis låses sammen gennem fingerlignende fremspring (kaldet rete-kamme), hvilket øgede overfladearealet af kontaktmellem epidermis og dermis. I både det normale og sårede væv blev de basale keratinocytter arrangeret som et regimentetenkeltlag af kuboidale eller lave søjleformede celler, der forbandt de spinøse cellelag ovenfor (Fig.1A og B). Den histologiske struktur af det hypertrofiske skarvvæv adskiller sig fra det normale hudvæv ved at have en rigblodforsyning og et tykt epidermalt lag (Fig. 1C og F). Dermis blev sammensatstort set af tæt, uorganiseret bindevæv, der omfatterstore kollagene fibre med en uregelmæssig form og en størrediameter (Fig. 1F). For at fremme forskellene i histologisk struktur mellem det normale,sårkant og hypertrofiske arvæv blev methenamin sølvfarvning udført for at vurdere dannelsen af BM, hvilket indikerede, at BM-strukturen kunne påvises i sektionerne af det normale væv og sårkantvævet (Fig. 1G og H). I arvævet var BM-farvning imidlertid fraværende (Fig.1I).

forskelle i ekspressionen af cellemærker i epidermale keratinocytter i normal, sårkant oghypertrofiske arvæv

i betragtning af de morfologiske forskelle, der varobserveret i det normale,sårkant og hypertrofiske arvæv, undersøgte vi, om de basale keratinocytter udviste en andencellulær adfærd under ardannelse. I første omgang udførte viimmunofluorescensfarvning for at detektere ekspressionen af CK10,CK14, CK5, CK19 og integrin-kurt1 i sektionerne af normal, sårkant ogcar væv. Tidligere undersøgelser har verificeret, at CK10 er en markøraf differentierede keratinocytter, at CK14 og CK5 er markører forprolifererende basale keratinocytter eller TAs, og at CK19 er aputativ markør for epidermale stamceller eller stamceller ihud (14-17). Integrin-kurt1 menes også at være amarker af precursorceller i huden (18,19). Vores resultater viste, at CK10 varudtrykt i det ydre lag af epidermis i det normale ogsårkantvæv (Fig. 2A OGB), og i suprabasal, terminalt differentierende celler iepidermien af det hypertrofiske arvæv (Fig. 2C). CK14 blev udtrykt i både basale og suprabasale lag i den stratificerede epidermis af alletre væv (Fig. 2D-F), ogder var en omfattende fordeling af CK14 i multilayeredepidermis af arvævet (Fig.2F). Fordelingsmønsteret for CK5 svarede til det ofCK14 (Fig. 2G-I), som indikeredeet øget antal prolifererende celler ihyperproliferativ epidermis. Integrin-kur1 og CK19 blev udtrykketi det basale lag af den normale epidermis (Fig. 2J og M) og i de basale ogsupra-basale lag af sårkanten epidermis (Fig. 2K og N), men var ikke påviseligei epidermis af de hypertrofiske arvæv (Fig. 2L og O). Samlet set indikerer disseobservationer, at keratinekspressionsprofilen af basalkeratinocytter adskiller sig mellem den normale, sårkant oghypertrofiske arvæv. Selvom færre ck19-ekspressive cellerblev detekteret i de basale og suprabasale lag afhypertrofisk arvæv (Fig.2P) blev en proliferativ fænotype afsløret på grund aføget ekspression af CK14 og CK5 i multilayeredepidermis.

ændret BM-struktur bidrager tildifferentiel keratinekspressionsprofil i epidermale keratinocytterin vivo

som en nøglekomponent i stamcelleniche forankrer Ecmikke kun stamceller, men styrer også deres skæbne (20). Som nævnt ovenfor syntes denhistologiske struktur af BM at være fraværende ihypertrofiske arvævsprøver. I betragtning af forskellene ikeratinekspressionsprofiler i det basale lag af normal, sårkant og hypertrofisk arepidermi, vi spekulerede derefter på, atstrukturelle abnormiteter i BM spiller en rolle i reguleringen af celle skæbne beslutning af basale keratinocytter under sårheling. For at undersøge denne hypotese blev immunofluorescensfarvning udførtat visualisere komponenterne i BM i den normale, sårkant oghypertrofiske arvævsprøver. Vores resultater afslørede, at collagen IV-ekspression blev påvist i BM-området i begge normale(Fig. 3A) og sårkant (Fig. 3B) væv. Imidlertid blev dannelsen af BM-lignende strukturer med fravær af kollagen Ivekspression observeret i epidermis af hypertrofiske skarvæv (Fig. 3C). Selvom ekspression af laminin blev påvist i alle tre vævstyper(Fig. 3D-F), den dobbeltmærkningaf laminin-5 og dens receptor integrin-kurt4 bekræftede yderligere ourobservering, at strukturen af BM blev ændret iepidermis af de hypertrofiske arvæv; negativ farvning afbåde laminin-5 og integrin-kurt4 (Fig.3I og 4G-i) blev observeret somsammenlignet med det i det normale (Fig. 3G og 4a–C) og sårkantvæv (Fig. 3H og 4D–F). På baggrund af disse resultater er det sandsynligvisat den normale BM bidrog til rekrutteringen af integrin-kurt1-og CK19-ekspressive celler i det basale lag af den normale ogsårkant epidermis. Abnormiteter i BM-strukturen inducerede imidlertid de basale keratinocytter til at differentiere og vedtage aproliferativ fænotype under ar-patogenese.

ændret BM-struktur fremmer epidermalkeratinocytter til at vedtage en proliferativ fænotype in vitro

den mekaniske understøtning, der leveres af BM, bestemmes primært af dens type IV collagen stillads (21), hvori lamininnetværkene og perlecan oligomerer er integreret af de tværbindende nidogener for endelig at samle det arklignende BM-kompleks (22). For yderligere at afklare BM ‘ s roller i reguleringen af epidermal keratinocytadfærd, vi brugte den humane BM-ekstrakt-afledte ECM til at belægge kulturskålene for at kontrollere mønsteret af celle-matrice vedhæftning. Som vist inFig. 5, ECM administrationresulteret i opreguleringen af integrin-kurr4 udtryk i hekse(Fig. 5A) og HaCaT (Fig. 5B) celler, som var til stede påplasmamembranen og på stederne for cellematricebinding. Vi har også udført vestlig blot-analyse for at undersøge proteinniveauerne afintegrin-kurr4 i de epidermale cellelinjer med eller uden ECMcoating. Vores data demonstrerede, at højere niveauer af integrin-kurt4 var påviselige i de ECM-behandlede grupper end i kontrollerne,hvilket yderligere bekræftede de fluorescerende immunfarvende fund(Fig. 5C). Desuden blev HEKs andhacat-cellerne skiftet til medium indeholdende 1,5 mMCa2+ i de angivne tidsperioder for at genereredifferentiere epidermale celler som tidligere beskrevet (23,24). Efter Ca2 + – behandling er de morfologiske ændringer i begge Heksene (Fig. 6A) og HaCaT-celler (Fig. 6B) blev observeret under et lysmikroskop, som omfattede celleforstørrelse og udfladning.Ca2+ inducerede ekspressionen af CK10 (Fig. 5D, G og J, 6C og D) og CK14 (Fig. 5E, H og J, og 6C og D) på en tidsafhængig måde inepidermale cellelinjer ved både mRNA (Fig. 5D, E, G og H, og 6C og D) og protein (Fig. 5J) niveauer, hvor topniveauer af ck10 og ck14-ekspression blev observeret 24 timer efter initiering af 1,5 mMCa2+ behandling i Heksene (Fig. 5D, E og J og 6C) og HaCaT-cellerne (Fig. 5G, H og J og 6D). Efter Ca2+ – behandling blev ekspressionen af CK19 nedreguleret i Heksene og nåede sit laveste niveau ved 24 timer efter starten af Ca2+ – behandlingen(Fig. 5F og J og 6C). Lignende resultater blev observeret ihacatceller (Fig. 5I og J and6D). ECM-behandling reducerede imidlertid de differentierende responser af keratinocytter forbundet med Ca2+ administration i HEKs-og HaCaT-cellerne og forbedrede ekspressionen af CK19 ved 12 timer og 24 timer efterca2+ – behandling (Fig. 5F, iog J). For yderligere at bestemme BM ‘ s potentielle rolle ireguleringen af epidermal keratinocytadfærd, type IV collagenblev brugt til at danne en BM-lignende struktur in vitro. Kollagen Ivbehandling bidrog til ck19-ekspression og reducerede udtrykket af CK10 og CK14 ved mRNA og proteinniveauer i begge Heksene(Fig. 7A-C og G) og Hacatcellerne (Fig. 7D-F og G). Disse resultater validerede yderligere vores in vivo-resultater, at Bmvises at være en positiv regulator for rekruttering afprecursorlignende celler i det basale lag af epidermis.Ændringer i BM-strukturen fremmede udviklingen af aproliferativ fænotype i basale keratinocytter som indikeret ved den forbedrede ekspression af markørerne forbundet med celleproliferation, f.eks. CK14 og CK5.

Diskussion

i den foreliggende undersøgelse undersøgte vi først de morfologiske ændringer, der forekommer under epidermal regenerering somen del af sårhelingsprocessen. Vores data viste, at denhistologiske struktur af det hypertrofiske arvæv adskiller sig fra det normale hudvæv med en signifikant stigning iepidermal tykkelse mellem basallaget og stratum corneumbeing observeret. Især syntes farvning af BM at være fraværeti arvævet. Desuden indikerede immunofluorescensfarvning for CK10,CK14, CK5, CK19 og integrin-lyr1, at differentialekspression af basale keratinocytmarkører var forskellig blandt prøverne af normale, sårkant og hypertrofiske arvæv, og desuden udviste epidermis af det hypertrofiske arvæv en proliferativ fænotype ved at skifte ekspressionen af integrin-lyr1 og CK19 til ck14 og CK5, markører for cellespredning, i den flerlagede epidermis. I betragtning af disse fund antog vi således, at BM spiller en rolle i reguleringen afcellens skæbnebeslutning af epidermale keratinocytter under sår healing.By ved hjælp af et panel af antistoffer forbundet med BM-komponenter, vivaliderede vores hypotese om, at strukturen af BM blev ændreti det hypertrofiske arvæv. Vores resultater viste, at Bmbidrog til rekruttering af ck19-ekspressive celler ibasalt lag af normal og sårkant epidermis, hvorabnormaliteter i strukturen af BM inducerede basalkeratinocytterne til at differentiere og vedtage en proliferativ fænotypeunder ar patogenese. Ved at bruge ECM og collagen IV til at efterligne BM-strukturen in vitro bekræftede vi yderligere vores invivo-observationer og viste, at BM reducerede de differentierende reaktioner af keratinocytter induceret afca2+ administration i epidermale cellelinjer og forbedrede ekspressionen af CK19, en formodet markør for epidermalprogenitorceller.

BM spiller en grundlæggende rolle idifferentiering, proliferation, overlevelse og migration af cellerunder embryonal udvikling. I huden er BM fysiskadskiller epidermis fra den underliggende dermis. Basalkeratinocytterne i epidermis fastgøres til den underliggende BM gennemintegriner, som binder til nogle BM-komponenter,såsom kollagen, laminin og fibronectin (25).Således tjener BM ikke kun som en selektiv barriere og strukturelcaffold, men giver også en kommunikationsgrænseflade mellemdermale fibroblaster og epidermale keratinocytter (2,26).BM binder også til en række cytokiner og vækstfaktorer,der tjener som et reservoir til deres kontrollerede frigivelse, somregulerer keratinocyt-fibroblastinteraktioner for at fremmeudvikling af hud samt sårheling (27,28). Tidligere undersøgelser af ardannelsehar primært fokuseret på fibroblaster og lidt er kendt omrolle af de overliggende epidermale keratinocytter (29,30). Der er voksende tegn på, atkeratinocytter kan spille en vigtig rolle i udviklingen afpatologisk fibrose gennem parakrinregulering af fibroblastfunktion (6,9,10).det er også vist, at keratinocytter afledt af arvæv adskiller sig fra normale keratinocytter ved at udvise differentielle genekspressionsprofiler (12). Denmekanismer, der er ansvarlige for de grundlæggende abnormiteter ikeratinocytter under keloid og hypertrofisk ardannelse forbliverlusiv. Vores data angav en potentiel forbindelse mellem BM-ombygning og vedligeholdelse af keratinocytfunktion under sårreparationog regenerering. Det er velkendt, at adhæsionsmolekyler, sådanneintegriner og E-og N-cadherin, forankrer stamceller til ECM(22). I lyset af ourobservationer ser det ud til, at BM kan repræsentere en del afniche-komponenter til rekruttering af epidermale stamceller i det basale lag af hudepidermis. Vores resultater indikerer, at BM ‘ s unormale funktion reducerer fastgørelsen af basalprogenitorceller til deres omgivende mikromiljø og inducerer dem til at vedtage en proliferativ fænotype, som kan redegøre forpatogenese af ardannelse (Fig.8).

anerkendelser

denne undersøgelse blev delvist støttet af tilskud fra theNovel-programmet i Beijing (nr. 2008b53 og 2009a38) og Thenational Natural Science Foundation of China (nr. 30901564,81101883, 81372067, 81121004 og 81230041) og National BasicScience and Development program (973 program, 2012cb518105).

	Fuchs E og Raghavan s: at komme underhud af epidermal morfogenese. Nat Rev Genet. 3:199–209. 2002.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	D, Mirancea N og Nischt R:Kældermembraner i huden: unikke matricestrukturer med forskellige funktioner? Histochem Celle Biol. 132:1–10. 2009. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Blanpain C og Fuchs E: epidermale stamceller i huden. Annu Rev Cell Dev Biol. 22:339–373. 2006.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Snippert HJ, Haegebarth A, Kasper M, JaksV, van Es JH, Barker N, van de vådning M, van den Born M, BegthelH, Vries RG, et al: Lgr6 markerer stamceller i hårsækkenet, dergenererer alle cellelinjer i huden. Videnskab. 327:1385–1389.2010. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Broughton g II, Janis JE og Attinger CE:den grundlæggende videnskab om sårheling. Plast Reconstr Surg. 117 (Suppl7): 12S–34s. 2006. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Bellemare J, Roberge CJ, Bergeron D, Lopes-Vall Larse CA, Roy M og Moulin VJ: Epidermis fremmer dermalfibrose: rolle i patogenesen af hypertrofiske ar. J Pathol.206:1–8. 2005. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Andriessen MP, Niessen FB, Van de KerkhofPC og Schalkvijk J: hypertrofisk ardannelse er forbundet medepidermale abnormiteter: en immunhistokemisk undersøgelse. J Pathol.186:192–200. 1998. Se Artikel : Google Scholar
	Teepe RG, Kreis RV, Koebrugge EJ, Kempenaar JA, Vloemans af, Hermans RP, Boksma H, Dokter J, HermansJ, Ponec M, Et al: brugen af dyrkede autologe epidermier ibehandling af omfattende forbrændingssår. J Trauma. 30:269–275. 1990.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Funayama E, Chodon T, Oyama A og SugiharaT: keratinocytter fremmer proliferation og hæmmer apoptose afunderliggende fibroblaster: en vigtig rolle i patogenesen afkeloid. J Invest Dermatol. 121:1326–1331. 2003. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Lim IJ, Phan TT, Bay BH, Huynh H, Tan vægt, Lee ST og Longaker MT: fibroblaster dyrket med keloidkeratinocytter: normale fibroblaster udskiller kollagen i en keloidlikemanner. Am J Physiol Celle Physiol. 283: C212-C222. 2002. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Hahn JM, Glaser K, McFarland KL, Aronbj, Boyce ST og Supp DM: Keloidafledte keratinocytter udviser anabnormal genekspressionsprofil i overensstemmelse med en tydelig årsagsrolle i keloidpatologi. Sår Reparation Regen. 21:530–544. 2013.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Machesney M, Tidman N, Vareem A, Kirby Land Leigh I: aktiverede keratinocytter i epidermis afhypertrofiske ar. Am J Pathol. 152:1133–1141. 1998.PubMed / NCBI
	m, Hashemitabar M, Dehbashi FN og Saremy s: Sammenligning af den fermatiske ogeksplante metoder til dyrkning af keratinocytter isoleret frahuman forhuden. Biomed Rep. 3: 304-308. 2015.PubMed / NCBI
	su L, Morgan PR og Lane EB: Keratin 14 og 19 ekspression i normal, dysplastisk og ondartet oralepithelia. En undersøgelse ved hjælp af in situ hybridisering ogimmunohistokemi. J Oral Pathol Med. 25:293–301. 1996.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Michel M, T. L. R. L., Godbout M., Lussier M,Gaudreau P, Royal A og Germain L: Keratin 19 som biokemisk markør for hudstamceller in vivo og in vitro: keratin 19udtrykkende celler er differentielt lokaliseret i funktion afanatomiske steder, og deres antal varierer med donoralder og kulturstadium. J Cell Sci. 109:1017–1028. 1996.PubMed / NCBI
	Khanom R, Sakamoto K, Pal SK,Shimada Y, Morita K, Omura K, Miki Y og Yamaguchi A: ekspression af basalcellkeratin 15 og keratin 19 i orale pladeformede neoplasmer repræsentererforskellige patofysiologier. Histol Histopatol. 27:949–959.2012.PubMed / NCBI
	Fuchs E: Hudstamceller: stiger tiloverflade. J Celle Biol. 180:273–284. 2008. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Yeh YC, Lin HH og Tang MJ: en fortælling om tokollagenreceptorer, integrin larr1 og discoidin domain receptor 1, inepithelial celledifferentiering. Am J Physiol Celle Physiol.303: C1207-C1217. 2012. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	K, Jedrych B, Jedrych K: Integrins rolle i den fysiologiske ogpatogene processer. Pol Merkur Lekarski. 21:362–366. 2006.Artikel På Polsk.
	modulering af stamcelleniche til vævsregenerering. NatBiotechnol. 32:795–803. 2014. Google Scholar: PubMed / NCBI
	hud basalmembran: grundlaget for epidermalintegritet-BM funktioner og forskellige roller brodannende molekylernidogen og perlecan. Biomed Res Int. 2013(179784)2013. Se artikel: Google Scholar
	Timpl R og brun JC: supramolekylær samling af kældermembraner. BioEssays. 18:123–132. 1996.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Hennings H, Michael D, Cheng C, SteinertP, Holbrook K og Yuspa SH: Calcium regulering af vækst ogdifferentiering af mus epidermale celler i kultur. Celle.19:245–254. 1980. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Hennings H og Holbrook KA: Calciumregulering af cellecellekontakt og differentiering af epidermalceller i kultur. En ultrastrukturel undersøgelse. 143: 127-142. 1983. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Burgeson RE og Christiano AM: Thedermal-epidermal junction. Curr Opin Celle Biol. 9:651–658. 1997.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	LeBleu VS, Macdonald B og Kalluri R: struktur og funktion af kældermembraner. Biol Med(Maj). 232:1121–1129. 2007. Se Artikel : Google Scholar
	RV: basement membran proteoglycaner: fra kælder til loft. Nat Rev Mol Celle Biol. 6:646–656. 2005.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	keratinocyt-fibroblast interaktioner i sårheling. J InvestDermatol. 127:998–1008. 2007. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	O ‘ Connor-McCourt M og Germain L: Moduleret respons på cytokiner af humane sårheling myofibroblaster sammenlignet med dermalfibroblaster. 238: 283-293. 1998. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Gabbiani G, Ryan GB og Majne G: tilstedeværelse af modificerede fibroblaster i granulationsvæv og deres mulige rolle i sårkontraktion. Erfaring. 27:549–550. 1971.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI