International Journal of Molecular Medicine

introduktion

huden fungerar som den fysiska och kemiska barriären mellan den inre kroppen och den yttre miljön, vilkenbestår av en underliggande dermis av mesodermalt ursprung och anoverlaying epidermis av ektodermalt ursprung. Även om dessa tvåskikt utför olika funktioner, kommunicerar de i olikasätt och på olika nivåer. Hudens vitala barriärfunktion tillhandahålls främst av dess övre stratifierade epidermis, bestående avspridande basala och differentierade suprabasala keratinocyter(1). För att slutföra dessa funktioner kan stamceller i basalskiktet självförnyaunder hela livet och de producerar dotterceller som genomgår differentiering (2). Således är balansen mellanspridning och differentiering av de basala keratinocyterna väsentligt för epidermal integritet, och det säkerställer förekomsten avvävnadsförnyelse vilket är nödvändigt för att slutföra normala fysiologiskafunktioner. Förutom att upprätthålla vävnadshomeostas deltar stamceller som bor i epidermis och hårsäckar ocksåi reparationen av epidermis efter skada (3,4).i huden utvecklas olika faser av sårläkning i dynamiskinteraktioner mellan epidermala celler, dermala celler och benmarrow-härledda celler. Keratinocyter representerar den’ första raden avförsvar ’ av kroppen mot den yttre miljön. Därför är de de första som svarar på skada. Med frisättningen avinflammatoriska cytokiner och sammandragningen av kollagenfibrer aktiveras de basala epidermala keratinocyterna och migrerar in i sårområdet,där de prolifererar och differentieras tills cellinnehållet i vävnaden har förnyats (5). Ett antal observationer harföreslog att epidermis har en effekt på patologin avkutana ärr (6,7). Hos brännskadade patienter uppträder hypertrofiska ärr oftare när sår läker av sekundär avsikt,medan tidig hudtransplantation verkar undertrycka ärrbildning(8). Funayama et alvisade att keloid-härledda fibroblaster samodlade med keloid-härledda keratinocyter var signifikant mer proliferativa och resistenta mot apoptos än de som samodlades med normala hud-härledda keratinocyter (9).i ett liknande samodlingssystem fann man att keloid-derivedkeratinocyter främjade ökad kollagenproduktion, såväl somDen ökade proliferationen av normala fibroblaster (10). I synnerhet har keloid-derivatkeratinocyter visat sig uppvisa det ökade uttrycket av en uppsättning histongener som är väsentliga för DNA-replikation i jämförelse med uttrycksnivåerna i normala celler, ochkeratinocyter i epidermis av hypertrofiska ärr har kommit inen alternativ differentieringsväg och uttrycker en proliferativfenotyp (11,12). Dessa resultat tyder på att balansen mellan proliferation och differentiering avkeratinocyter dysregleras i ärrvävnader, och att fundamentalabnormaliteter i keratinocyter kan spela en viktigare roll ihudregenerering och dess patogenes än vad som tidigare uppskattades.

i den aktuella studien erhölls och analyserades normal, sårkant ochhypertrofa ärrvävnader med användning avhistologiska och immunofluorescensmetoder för att undersöka skillnaderna i morfologi, såväl som keratinuttrycksprofilerunder epidermal regenerering. Våra resultat indikerade att det fanns en variation i keratinuttrycksprofilerna i epidermalkeratinocyterna från normal, sårkant och hypertrofiska scartissues, vilket motsvarade avvikelser i strukturen av källarmembranet (BM). Genom att använda en panel av antikroppar mot Bmkomponenter validerade vi vår hypotes och bestämde att Bmvar en positiv regulator för rekrytering av prekursorliknande cellertill epidermis basala skikt. Våra data indikerar detförändringar i strukturen av BM främjar basala keratinocyteratt anta en proliferativ fenotyp både in vivo och invitro.

material och metoder

vävnadsprover

hypertrofisk ärrvävnad (4 kvinnor och 3 Män; agerange 18-40 år) och sårkantvävnad (3 kvinnor och 5 män;åldersintervall, 18-40 år) prover erhölls från patienter som hade genomgått tidigare rekonstruktiv brännkirurgi. Normal hudvävnad (4kvinnor och 3 Män; åldersintervall, 18-40 år) intill scarexcision under operationen användes som kontroll. Foreskins var ocksåobtained från män som genomgår omskärelse (10 män,åldersintervall, 18-20 år). Den föreliggande studien godkändes av EthicsCommittee of the Chinese Pla General Hospital (Peking, Kina), ochskriftligt informerat samtycke erhölls från alla individer innan de fick proverna.

Immunofluorescensfärgning

Normal hud, sårkant och hypertrofisk ärrvävnadprover fixerades i 10% buffrad formalin, dehydratiserades genometanollösningar med ökad koncentration successivt och slutligen inbäddad i paraffin. Paraffininbäddadevävnader skars i 4-oc-tjocka sektioner för färgning medhematoxylin och eosin (H&E), Massons trikrom ochmetenamin silver (Allt från Zhongshan Golden Bridge, Peking, Kina). Bilder fångades med hjälp av ett optiskt mikroskop (Bx53;Olympus, Tokyo, Japan). För att utföra immunofluorescensfärgning fixerades sektionerna i 4% paraformaldehyd i 30 min och sedanpermeabiliserades i 0,2% Triton X-100 (T8787; Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) i 10 min. Desektioner inkuberades med primära anti-kroppar vid 4 msk C övernattningoch sedan med sekundära antikroppar i 2 timmar vid rumstemperatur. Deföljande primära anti-kroppar användes: mus Anti-humancytokeratin (CK)10 (1:200, ab111447) och kanin anti-human CK14(1:200, ab7800) (båda från Abcam, Cambridge, MA, USA), rabbitanti-human CK5 (1:200, ZA-0518; Zhongshan Goldenbridge, Peking,Kina), mus anti-human CK19 (1:200, ab53119; abcam), rabbitanti-humant integrin-21 (1:200, pb0063; Boster, Wuhan, Kina); musanti-humant integrin-24 (1:200, ab128068; abcam), musanti-humanlaminin (1:200, ZM-0181; Zhongshan Goldenbridge), kanin anti-humanlaminin-5 (1:200, ab14509; Abcam) och mus anti-humant kollagen IV(1:200, ZM-0081; Zhongshan Goldenbridge). Följande sekundäraantikroppar användes: Alexa-Fluor 488-konjugerad anti-mus (1:200,ab150117) och Alexa-Fluor 594-konjugerad anti-kanin (1: 200, ab150080) (båda från Abcam). Kärnorna färgades med DAPI (H-1200; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA).Immunofluorescensbilder fångades med hjälp av ett konfokalt laserskanningsmikroskop (SP8; Leica, Solms, Tyskland).

cellodling och behandling

primära humana epidermala keratinocyter (HEKs) isolerades från de manliga förhudarna som tidigare beskrivits (13), med mindre modifieringar. De humanimmortalized keratinocyte (HaCaT) cellerna köptes frånKina Infrastruktur av cellinje resurser (3111C0001CCC000373;Peking, Kina). Både heks och hacat-cellerna inkuberades i EpiLife medium (M-EPI-500-CA; Invitrogen Life Technologies,Carlsbad, CA, USA) kompletterat med 0,06 mM Ca2+, 1% EpiLife definierat tillväxttillskott (S-001-5; Invitrogen LifeTechnologies) och 1% penicillin/streptomycin (P1400; Solarbio, Peking,Kina). För att undersöka BM: s roller vid regleringkeratinocytbeteende in vitro, heks-och HaCaT-cellernapläterades i 60 mm-rätter belagda med MaxGel ECM (E0282) ochkollagen typ IV (C7521) (båda från Sigma-Aldrich).För Ca2+ – behandling inkuberades cellerna i EpiLifemedium kompletterat med 1,5 mM Ca2+ för 0, 12 och 24 timmar.MaxGel ECM innehåller humana extracellulära matris (ECM) komponenterinklusive kollagener, laminin, fibronektin, tenascin och elastin, såväl som ett antal proteoglykaner och glykosaminoglykaner. De celler som inte behandlades med Ca2 + användes som kontroller.

omvänd transkription-kvantitativ (realtid) PCR (RT-qPCR)

totalt RNA isolerades från cellerna efter att de utsattes för de olika behandlingarna med Trizolreagens (15596-026; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) och sedan cDNA syntetiserades med GoScript omvänd transkriptas (A5001; Promega, Madison, WI, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Deprimersekvenser som används för genförstärkning listas i tabell I. qPCR-reaktioner utfördes med GoTaq qPCR Master Mix (A6001; Promega) med användning av ett ABI 7500Real-Time PCR-system och programvara (Applied Biosystems, Foster City,CA, USA). Reaktionsprotokollet bestod av följande cykler:95 CCB i 15 sek, 55 CCB i 30 SEK och 72 CCB i 30 sek för 40 cyklerav PCR-förstärkning.

Western blot-analys

totalt protein isolerades från cellerna och 20 kg protein löstes i substratlöslig buffert. Proteinerna separerades sedan av SDS-PAGE och överfördes ontopolyvinylidendifluorid (PVDF) membran (IPFL00010; Millipore,Billerica, MA, USA). Efter blockering undersöktes blottningarna med primära antikroppar över natten vid 4 kcal C. antikropparna som användes förwestern blot-analys inkluderade CK10 (1:1000, ab111447), CK14(1:500, ab7800), CK19 (1:500, ab53119), integrin-askorbin4 (1:500, ab128068) och mus-anti-human-bronkialaktinantikropp (1:5000, ab6276)(allt från Abcam). Efter tvättning inkuberades membranen medsekundära antikroppar, vilka var get-anti-kanin och getanti-mus IGG konjugerad till pepparrotperoxidas (sc-2004,1:1000; sc-2005, 1:1000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA,USA). Immunoreaktiva band detekterades genom enhancedchemiluminescence (ECL)kit (PE-0010-100; Solarbio, Peking, Kina) och avbildas med hjälp av ImageQuant LAS 4000-systemet (GE HealthcareBio-Sciences, Pittsburgh, USA).

statistisk analys

alla experiment upprepades minst 3 gånger,om inte annat anges. Data presenteras som medel för standardavvikelse (SD). Statistisk analys utfördes medspss 20.0 programvara. Data jämförelse utfördes med hjälp avoberoende Studentens t-test och envägs ANOVA följt av LSDtest. Ett P-värde <0,05 ansågs indikera en statistisktbetydande skillnad.

resultat

morfologiska skillnader i normal, sår kant och hypertrofisk ärrvävnad

hud sår reparation är en exakt remodeling process,som delas klassiskt in i fyra överlappande faser andinvolves samspelet mellan många olika vävnader och celllineages (5). Vid kroniska sår avbryts emellertid den normala läkningsprocessen, vilket resulterari en patologisk cykel av inflammation och proteasfrisättningvilket leder till utvecklingen av ett patologiskt ärr. I denna studie,för att utvärdera de morfologiska förändringar som uppstår i regenererandeepidermis under hudsårläkning, erhölls prover av normala, sårade och hypertrofa ärrvävnader för attutföra rutin h& E och Massons trikromfärgning. Inormala hudprover var hudens histologiska struktur synlig, vilket visar skikt av epidermis och dermis. Epidermisinnehöll 4 till 5 lager, i vilka keratinocyter differentierade ochgradvis mognade till spinösa celler, granulära celler och cornifiedceller under deras utåtgående passage (Fig. 1A). Dessutom, i underliggande dermis, fibroblaster utgjorde lös bindväv, som var Riki parallella kollagenfibrer (Fig.1D). I vävnaderna runt sårkanten spriddes emellertid epidermis; den bestod av flera lager avkeratinocyter med distinkt morfologi och var synligt ökadtjocklek (Fig. 1B och E). Denepidermis och dermis sammankopplade genom fingerliknande utsprång(kallade rete-åsar), vilket ökade kontaktytanmellan epidermis och dermis. I både de normala och sårade vävnaderna anordnades de basala keratinocyterna som ett regimentedsingelskikt av kuboidala eller låga kolumnerade celler, vilka anslöt till de spinösa cellskikten ovan (Fig.1A och B). Den histologiska strukturen hos den hypertrofa scartissue skilde sig från den hos normal hudvävnad genom att ha en rikblodtillförsel och ett tjockt epidermalt skikt (Fig. 1C och F). Dermis var sammansatttill stor del av tät, oorganiserad bindväv som inkluderardeg kollagenfibrer med oregelbunden form och en störrediameter (Fig. 1F). För att ytterligare tydliggöra skillnaderna i histologisk struktur mellan de normala, sårkanten och hypertrofiska ärrvävnaderna utfördes metenamin silverfärgning för att bedöma bildandet av BM, vilket indikerade att BM-strukturen var detekterbar i sektionerna av normala och sårkantvävnader (Fig. 1G och H). I ärrvävnaderna var emellertid BM-färgning frånvarande (Fig.1I).

skillnader i uttrycket av cellmarkörer i epidermala keratinocyter i normal, sårkant ochhypertrofa ärrvävnader

med tanke på de morfologiska skillnaderna som observerades i normal, sårkant och hypertrofiska ärrvävnader undersökte vi om de basala keratinocyterna uppvisade ett annorlundacellulärt beteende under ärrbildning. Initialt utförde viimmunofluorescensfärgning för att detektera uttrycket av CK10, CK14, CK5, CK19 och integrin-XX1 i sektionerna av normal, sårkant ochärrvävnader. Tidigare studier har verifierat att CK10 är en markerav differentierade keratinocyter, att CK14 och CK5 är markörer förspridande basala keratinocyter eller TAs, och att CK19 är aputativ markör för epidermala stamceller eller stamceller ihud (14-17). Integrin-XX1 anses också vara amarker av prekursorceller i huden (18,19). Våra resultat visade att CK10 varuttryckt i det yttre skiktet av epidermis i de normala ochsårda kantvävnaderna (Fig. 2A ochb), och i suprabasal, terminalt differentierande celler i epidermis av hypertrofisk ärrvävnad (Fig. 2C). CK14 uttrycktes i både basala och suprabasala skikt i den stratifierade epidermis av allatre vävnader (Fig. 2D-F), ochdet fanns en omfattande fördelning av CK14 i flerskiktsepidermis i ärrvävnaden (Fig.2F). Fördelningsmönstret för CK5 liknade det förck14 (Fig. 2G-I), som indikeradeett ökat antal prolifererande celler ihyperproliferativ epidermis. Integrin-XX1 och CK19 uttrycktesi basalskiktet av den normala epidermis (Fig. 2J och M) och i basal ochsupra-basala skikt av sårkanten epidermis (Fig. 2K och N), men var inte detekterbarai epidermis av hypertrofiska ärrvävnader (Fig. 2L och O). Sammantaget indikerar dessa observationer att keratinuttrycksprofilen för basalkeratinocyter skilde sig mellan den normala, sårkanten ochhypertrofa ärrvävnader. Även om färre CK19-Uttryckande cellerdetekterades i de basala och suprabasala skikten avhypertrofisk ärrvävnad (Fig.2P) avslöjades en proliferativ fenotyp på grund avökat uttryck av CK14 och CK5 i multilayeredepidermis.

förändrad BM-struktur bidrar tilldifferentiell keratinuttrycksprofil i epidermal keratinocytesin vivo

som en nyckelkomponent i stamcellsnischen förankrar Ecminte bara stamceller utan styr också deras öde (20). Som nämnts ovan, denhistologisk struktur av BM verkade vara frånvarande ihypertrofa ärrvävnadsprover. Med tanke på skillnaderna ikeratinuttrycksprofiler i basalskiktet av normal, sårad och hypertrofisk ärr epidermis, spekulerade vi sedan attstrukturella abnormiteter hos BM spelar en roll för att reglerakell öde beslut av basala keratinocyter under sårläkning. För att undersöka denna hypotes utfördes immunofluorescensfärgning för att visualisera komponenterna i BM i den normala sårkanten ochhypertrofa ärrvävnadsprover. Våra resultat avslöjade detkollagen IV-uttryck detekterades i BM-området i båda normala (Fig. 3A) och sårkant (Fig. 3B) vävnader. Menbildandet av BM-liknande strukturer med frånvaro av kollagen Iuttryck observerades i epidermis av hypertrofiska scartissues (Fig. 3C). Även omuttryck av laminin detekterades i alla tre vävnadstyper (Fig. 3D-F), dubbellärkningen av laminin-5 och dess receptorintegrin-24 verifierade vidare vårbevarande att strukturen hos BM ändrades iepidermis av de hypertrofa ärrvävnaderna; negativ färgning avbåde laminin – 5 och integrin-24 (Fig.3i och 4G–I) observerades somjämfört med det i det normala (fikon. 3G och 4A–C) och sårkantvävnader (fikon. 3H och 4D-F). Med tanke på dessa resultat är det troligtatt den normala BM bidrog till rekryteringen av integrin-askor1-och CK19-Uttryckande celler i basalskiktet i den normala ochsårkanten epidermis. Avvikelser i BM-strukturen inducerade emellertid de basala keratinocyterna att differentiera och anta aproliferativ fenotyp under ärrpatogenes.

förändrad BM-struktur främjar epidermalkeratinocyter för att anta en proliferativ fenotyp in vitro

det mekaniska stödet som tillhandahålls av BM bestäms främst av dess typ IV-kollagenställning (21), i vilken lamininnätverk ochperlekanoligomerer integreras av tvärbindande nidogener tillslutligen montera det arkliknande BM-komplexet (22). För att ytterligare klargöra rollerna hosbm i regleringen av epidermal keratinocytbeteende använde viden humana BM-extraktderiverade ECM för att belägga odlingsrätterna iför att kontrollera mönstret för cellmatrisadhesion. Som visas inFig. 5, ECM-administrationresulterade i uppregleringen av integrin-24-uttryck i HEKs(Fig. 5A) och HaCaT (Fig. 5B) celler, som var närvarande påplasmamembran och vid platserna för cellmatrisfästning. Vi utförde också western blot-analys för att undersöka proteinnivåerna avintegrin-24 i epidermala cellinjer med eller utan ECMcoating. Våra data demonstrerade att högre nivåer av integrin-askorb4 var detekterbara i de ECM-behandlade grupperna än i kontrollerna, vilket ytterligare bekräftade fluorescerande immunfärgning fynd (Fig. 5C). Dessutom byttes HEKs-ochhacatcellerna till medium innehållande 1,5 mMCa2+ under de angivna tidsperioderna för att genereradifferentierande epidermala celler som tidigare beskrivits (23,24). Efter Ca2 + – behandling, de morfologiska förändringarna i båda Heksna (Fig. 6A) och HaCaT-celler (Fig. 6B) observerades under ett ljusmikroskop, vilket inkluderade cellförstoring och utplattning.Ca2+ inducerade uttrycket av CK10 (Fig. 5D, G och J, och 6C och D) och CK14 (Fig. 5E, H och J, och 6C och D) på ett tidsberoende sätt inepidermala cellinjer vid både mRNA (Fig. 5D, E, G och H och 6C och D) och protein (Fig. 5J) nivåer, med toppnivåer av Ck10och CK14-uttryck observeras 24 timmar efter initiering av 1,5 mMCa2+ behandling i HEKs (Fig. 5D, E och J och 6C) och HaCaT-cellerna (Fig. 5G, H och J och 6D). Efter Ca2 + – behandling nedreglerades uttrycket av CK19 i HEKs och nådde sin lägsta nivå vid 24 timmar efter starten av Ca2+ – behandlingen(Fig. 5F och J och 6C). Liknande resultat observerades ihacatceller (Fig. 5I och J och6d). ECM-behandling minskade emellertid de differentierande svaren hos keratinocyter associerade med Ca2 + administrering i HEKs-och HaCaT-cellerna och förbättrade uttrycket av CK19 vid 12 h och 24 h efterca2+ behandling (Fig. 5F, ioch J). För att ytterligare bestämma BM: s potentiella roll iReglering av epidermalt keratinocytbeteende, typ IV-kollagenanvändes för att bilda en BM-liknande struktur in vitro. Kollagen Ivbehandling bidrog till CK19-uttryck och minskade uttrycket av CK10 och CK14 vid mRNA-och proteinnivåerna i båda HEKs(Fig. 7A-C och G) och Hacatcellerna (Fig. 7D-F och G). Dessa resultat validerade vidare Våra in vivo-fynd att BM verkar vara en positiv regulator för rekryteringen avprekursorliknande celler i epidermis basala skikt.Förändringar i BM-strukturen främjade utvecklingen av aproliferativ fenotyp i basala keratinocyter, vilket indikeras av det förbättrade uttrycket av markörerna associerade med cellproliferation, t.ex. CK14 och CK5.

diskussion

i den aktuella studien undersökte vi förstmorfologiska förändringar som uppstår under epidermal regenerering som en del av sårläkningsprocessen. Våra data visade atthistologisk struktur av de hypertrofiska ärrvävnaderna skiljer sig åtfrån den hos normal hudvävnad, med en signifikant ökning iepidermal tjocklek mellan basalskiktet och stratum corneumobserveras. I synnerhet verkade färgning av BM vara frånvarandei ärrvävnaden. Vidare indikerade immunofluorescensfärgning för CK10,CK14, CK5, CK19 och integrin-sax1 att differentialexpressionen av basala keratinocytmarkörer skilde sig mellan proverna av normala, sårkantiga och hypertrofa ärrvävnader, och dessutom visade epidermis av den hypertrofa ärrvävnaden en proliferativ fenotyp genom att byta uttrycket avintegrin-sax1 och CK19 till CK14 och CK5, markörer för cellproliferation, i flerskiktade epidermis. Med tanke på dessa resultat antog vi således att BM spelar en roll för att reglera cell öde beslut av epidermala keratinocyter under sår healing.By med hjälp av en panel av antikroppar associerade med BM-komponenter, vivaliderade vår hypotes att strukturen hos BM förändradesi hypertrofiska ärrvävnader. Våra resultat indikerade att Bmbidrog till rekryteringen av CK19-Uttryckande celler ibasalskiktet av normal och sårkanthuderhuden, varabnormaliteter i strukturen hos BM inducerade basalkeratinocyterna att differentiera och anta en proliferativ fenotypunder ärrpatogenes. Genom att använda ECM och kollagen IV för att efterlikna BM-strukturen in vitro bekräftade vi vidare våra Invivo-observationer och visade att BM minskade dedifferentierande svaren hos keratinocyter inducerade avca2+ administrering i epidermala cellinjer och förbättrade uttrycket av CK19, en förmodad markör för epidermalprogenitorceller.

BM spelar en grundläggande roll idifferentiering, proliferation, överlevnad och migration av celler under embryonal utveckling. I huden, BM fysisktseparerar epidermis från den underliggande dermis. Basalkeratinocyterna i epidermis fäster vid den underliggande BM genomintegriner, som binder till vissa BM-komponenter,såsom kollagen, laminin och fibronektin (25).Således fungerar BM inte bara som en selektiv barriär och strukturellakaffold, men ger också ett kommunikationsgränssnitt mellandermala fibroblaster och epidermala keratinocyter (2,26).BM binder också till ett antal cytokiner och tillväxtfaktorer,som fungerar som en reservoar för deras kontrollerade frisättning, somreglerar keratinocyt-fibroblast-interaktioner för att främjautveckling av hud, såväl som sårläkning (27,28). Tidigare studier om ärrbildninghar huvudsakligen fokuserat på fibroblaster och lite är känt omrollen hos de överliggande epidermala keratinocyterna (29,30). Det finns växande bevis för attkeratinocyter kan spela en viktig roll i utvecklingen avpatologisk fibros genom parakrinreglering av fibroblastfunktion (6,9,10).det har också visats att keratinocyter härledda från ärrvävnaderskiljer sig från normala keratinocyter genom att uppvisa differentiella geneexpressionsprofiler (12). Demekanismer som är ansvariga för de grundläggande avvikelserna ikeratinocyter under keloid och hypertrofisk ärrbildning förblir svårfångade. Våra data indikerade en potentiell koppling mellan BM-ombyggnadoch upprätthållandet av keratinocytfunktion under sårreparationoch regenerering. Det är välkänt att adhesionsmolekyler, sådanintegriner och E – och N-cadherin, förankrar stamceller till ECM(22). Mot bakgrund av ourobservationer verkar det som om BM kan representera en del avnischkomponenter för rekrytering av epidermala stamceller i hudens epidermis basala skikt. Våra resultat indikerar att BM: s onormala funktion minskar bindningen av basalprogenitorceller till deras omgivande mikromiljö och inducerar dem att anta en proliferativ fenotyp, som kan redogöra för patogenes av ärrbildning (Fig.8).

bekräftelser

denna studie stöddes delvis av bidrag från theNovel-programmet i Peking (nos. 2008B53 och 2009A38) ochnational Natural Science Foundation of China (nos. 30901564,81101883, 81372067, 81121004 och 81230041) och National BasicScience och utvecklingsprogram (973 program, 2012cb518105).

	Fuchs E och Raghavan S: komma underhud av epidermal morfogenes. Nat Rev Genet. 3:199–209. 2002.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Breitkreutz D, Mirancea N och Nischt R: källarmembran i huden: unika matrisstrukturer med olikafunktioner? Histochem Cell Biol. 132:1–10. 2009. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Blanpain C och Fuchs E: Epidermal stamceller i huden. Annu Rev Cell Dev Biol. 22:339–373. 2006.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Snippert HJ, Haegebarth A, Kasper M, JaksV, van Es JH, Barker N, van de Wetering M, van Den född M, BegthelH, Vries RG, et al: Lgr6 markerar stamceller i hårsäcken somgenererar alla celllinjer i huden. Vetenskap. 327:1385–1389.2010. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Broughton G II, Janis JE och ATTINGER CE: den grundläggande vetenskapen om sårläkning. Plast Reconstr Surg. 117 (Suppl7): 12S-34S. 2006. Visa Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Bellemare J, Roberge CJ, Bergeron D, Lopez-Vallibyli ca, Roy M och Moulin VJ: Epidermis främjar dermalfibros: roll i patogenesen av hypertrofiska ärr. J Pathol.206:1–8. 2005. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Andriessen MP, Niessen FB, Van de KerkhofPC och Schalkwijk J: hypertrofisk ärrbildning är associerad medepidermala abnormiteter: en immunhistokemisk studie. J Pathol.186:192–200. 1998. Visa Artikel : Google Scholar
	Teepe RG, Kreis RW, Koebrugge EJ, Kempenaar JA, Vloemans AF, Hermans RP, Boxma H, Dokter J, HermansJ, Ponec M, et al: användningen av odlade autologa epidermis ibehandling av omfattande brännsår. J Trauma. 30:269–275. 1990.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Funayama E, Chodon T, Oyama A och SugiharaT: keratinocyter främjar proliferation och hämmar apoptos avunderliggande fibroblaster: en viktig roll i patogenesen avkeloid. J Investera Dermatol. 121:1326–1331. 2003. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lim IJ, Phan TT, Bay BH, Qi R,Huynh H, Tan WT, Lee ST och Longaker MT: fibroblaster cocultured med keloidkeratinocyter: normala fibroblaster utsöndrar kollagen i en keloidlikemanner. Am J Physiol Cell Physiol. 283: C212-C222. 2002. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Hahn JM, Glaser K, McFarland KL, AronowBJ, Boyce ST och Supp DM: Keloid-härledda keratinocyter uppvisar anabnormal genuttrycksprofil som överensstämmer med en distinkt kausalroll i keloid patologi. Sår Reparation Regen. 21:530–544. 2013.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Machesney M, Tidman N, Waseem A, Kirby Land Leigh I: aktiverade keratinocyter i epidermis avhypertrofa ärr. Am J Pathol. 152:1133–1141. 1998.PubMed / NCBI
	Orazizadeh M, Hashemitabar M, BahramzadehS, Dehbashi FN och Saremy S: Jämförelse av enzymatiska ochexplantmetoder för odling av keratinocyter isolerade frånmänsklig förhud. Biomed Rep. 3: 304-308. 2015.PubMed / NCBI
	Su L, Morgan PR och Lane EB: Keratin 14och 19 uttryck i normal, dysplastisk och malign oralepithelia. En studie med in situ hybridisering ochimmunohistokemi. J Oral Pathol Med. 25:293–301. 1996.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Michel M, T. O. C. M., Godbout M. J., Lussier M., Gaudreau P., Royal A. och Germain L.: Keratin 19 som biokemiskmarkör av hudstamceller in vivo och in vitro: keratin 19uttryckande celler är differentiellt lokaliserade i funktion avanatomiska platser, och deras antal varierar med givarålder och kulturstadium. J Cell Sci. 109:1017–1028. 1996.PubMed / NCBI
	Khanom R, Sakamoto K, Pal SK, Shimada Y, Morita K, Omura K, Miki Y och Yamaguchi a: uttryck av basalcellerkeratin 15 och keratin 19 i orala squamous neoplasmer representerarolika patofysiologier. Histol Histopatol. 27:949–959.2012.PubMed / NCBI
	Fuchs E: hudstamceller: stiger till ytan. J Cell Biol. 180:273–284. 2008. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Yeh YC, Lin HH och Tang MJ: en berättelse om tvåkollagenreceptorer, integrinacci1 och discoidin domänreceptor 1, inepitelial celldifferentiering. Am J Physiol Cell Physiol.303: C1207-C1217. 2012. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Borowska K, Jedrych B, Czerny k andZabielski S: Integrins roll i fysiologiska ochpatogena processer. Pol Merkur Lekarski. 21:362–366. 2006.Artikel På Polska.
	Lane SW, Williams DA och Watt FM: modulera stamcellsnischen för vävnadsregenerering. NatBiotechnol. 32:795–803. 2014. Google Scholar: PubMed/NCBI
	Breitkreutz D, Koxholt i, Thiemann K andNischt R: hudkällarmembran: grunden för epidermalintegritet – BM-funktioner och olika roller för att överbrygga molekylernidogen och perlecan. Biomed Res Int. 2013(179784)2013. Visa artikel: Google Scholar
	Timpl R och brun JC: Supramolekylärmontering av källarmembran. BioEssays. 18:123–132. 1996.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Hennings H, Michael D, Cheng C, SteinertP, Holbrook K och Yuspa SH: kalciumreglering av tillväxt ochdifferentiering av Muse epidermala celler i odling. Cell.19:245–254. 1980. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Hennings H och Holbrook KA: Kalciumreglering av cell – cellkontakt och differentiering av epidermalceller i kultur. En ultrastrukturell studie. Exp Cell Res. 143: 127-142. 1983. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Burgeson RE och Christiano AM: Dendermal-epidermal korsning. Curr Opin Cell Biol. 9:651–658. 1997.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	LeBleu VS, Macdonald B och Kalluri R:struktur och funktion av källarmembran. Exp Biol Med(Maywood). 232:1121–1129. 2007. Visa Artikel : Google Scholar
	Iozzo RV: källare membran proteoglykaner: från källare till tak. Nat Rev Mol Cell Biol. 6:646–656. 2005.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Werner S, Krieg T och Smola H:keratinocyt-fibroblast interaktioner vid sårläkning. J InvestDermatol. 127:998–1008. 2007. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Moulin V, Castilloux G, Auger FA, GarrelD, O ’ Connor-McCourt M och Germain L: Modulerat svar påcytokiner av humana sårläkande myofibroblaster jämfört med dermalfibroblaster. Exp Cell Res. 238: 283-293. 1998. Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Gabbiani g, Ryan GB och Majne G: Närvaroav modifierade fibroblaster i granulationsvävnad och deras möjliga roll vid sårkontraktion. Experientia. 27:549–550. 1971.Visa artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI