Revista Internacional de Medicina Molecular

Introdução

A pele serve como física e química, barrierbetween o interior do corpo e o exterior do ambiente, whichconsists de uma derme subjacente de origem mesodermal e anoverlaying epiderme de ectodermal origem. Embora estas duas camadas desempenhem funções diferentes, comunicam-se em diversas formas e em diferentes níveis. A função de barreira vital da pele é primariamente fornecida pela epiderme superior estratificada, composta por queratinócitos basais proliferativos e diferenciados supra-basais(1). Para completar estas funções, as células-tronco na camada basal são capazes de auto-renovação ao longo de toda a vida e produzem células-filhas que sofrem diferenciação (2). Assim, o equilíbrio entre a proliferação e a diferenciação dos queratinócitos basais é essencial para a integridade epidérmica, e garante a ocorrência da renovação do tecido que é necessária para completar as funções fisiológicas normais. Para além da manutenção da homeostase tecidular, as células estaminais residentes na epiderme e os folículos capilares também participam na reparação da epiderme após lesão (3,4).na pele, as diferentes fases de cicatrização da ferida evoluem nas interacções dinâmicas entre as células epidérmicas, as células dérmicas e as células derivadas de bonemarrow. Os queratinócitos representam a “primeira linha de defesa” do corpo contra o ambiente exterior. Portanto, são os primeiros a responder à lesão. Com a libertação de citoquinas inflamatórias e a contração de fibras colagenosas,os queratinócitos epidérmicos basais são ativados e migram para a área da ferida, onde proliferam e diferenciam até que o conteúdo celular do tecido seja renovado (5). Algumas observações sugerem que a epiderme tem um efeito na patologia das cicatrizes cutâneas (6,7). Em pacientes queimados, as cicatrizes hipertróficas ocorrem mais frequentemente quando as feridas cicatrizam por intenção secundária, enquanto que o enxerto precoce da pele parece suprimir a formação da cicatriz (8). Funayama et aldemonstrated que o quelóide derivados de fibroblastos co-cultivadas withkeloid derivada de queratinócitos foram significativamente mais proliferativeand resistentes à apoptose do que os co-cultivadas com normalskin derivada de queratinócitos (9).Em um semelhante co-sistema de cultura, verificou-se que o quelóide-derivedkeratinocytes promoveu aumento da produção de colágeno, bem como o aumento na proliferação de fibroblastos normais (10). Em particular, o quelóide-derivedkeratinocytes tem sido mostrado para exibir o aumento expressionof um conjunto de histona genes essenciais para a replicação do DNA incomparison com os níveis de expressão em células normais, andkeratinocytes na epiderme de cicatrizes hipertróficas ter enteredan alternativa via de diferenciação e expressar proliferativephenotype (11,12). Estes resultados sugerem que o equilíbrio entre a proliferação e a diferenciação dosqueratinócitos é desregulado nos tecidos da cicatriz, e que as normalidades fundamentais nos queratinócitos podem desempenhar um papel mais importante na regeneração da pele e na sua patogénese do que anteriormente era apreciado.

no presente estudo, foram obtidos tecidos de cicatriz normal, de aresta da ferida e de espessura hipertrófica e analisados os métodos de Utilização dos métodos histológicos e imunofluorescência para investigar as diferenças morfológicas, bem como a expressão da queratina, durante a regeneração epidérmica. Os nossos resultados indicaram que havia uma variação nos perfis de expressão de queratina nos epidermalkeratinócitos a partir de scartissas normais, de borda de ferida e hipertróficas, que correspondiam a anomalias na estrutura da membrana Baseline (BM). Ao utilizar um painel de anticorpos para compostos de BM, validámos a nossa hipótese e determinámos que o Bm era um regulador positivo do recrutamento de células precursoras para a camada basal da epiderme. Os nossos dados indicam que asalterações na estrutura da Mb promovem queratinocitose basal para adoptar um fenótipo proliferativo tanto in vivo como invitro.

Materiais e métodos

Tecidos amostras

cicatriz Hipertrófica tecido (4 fêmeas e 3 machos; agerange 18-40 anos) e ferida borda do tecido (3 fêmeas e 5 machos;faixa etária, 18-40 anos) amostras foram obtidas de pacientes que hadundergone de reconstrução prévia queimar a cirurgia. O tecido cutâneo Normal (4females e 3 machos; faixa etária, 18-40 anos) adjacente à clarexcisão durante a cirurgia foi usado como um controle. Os prepúcios também eram provenientes de machos submetidos a circuncisão (10 machos; faixa etária de 18-20 anos). O presente estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Geral da PLA Chinês (Pequim, China), e foi obtido consentimento informado escrito de todos os indivíduos antes de conter as amostras.

coloração Imunofluorescente

Pele Normal, bordos das feridas e amostras de cicatrizes hipertróficas foram fixadas em 10% de formalina tamponada, soluções desidratadas através de metanol com uma concentração aumentada sucessivamente, e finalmente incorporadas na parafina, respectivamente. As parafinas embutidas foram cortadas em secções de 4 µm de espessura para coloração comhematoxilina e eosina (H&e), tricromo de Masson e prata com metenamina (Todas da ponte dourada de Zhongshan, Pequim, China). Imagens foram captadas usando um microscópio óptico (Bx53; Olympus, Tóquio, Japão). Para executar a coloração da imunofluorescência, estas secções foram fixadas em 4% de paraformaldeído durante 30 minutos, e depois estabilizadas em 0,2% de Triton X-100 (T8787; Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) em solução salina tampão de fosfato (PBS) durante 10 minutos. Estas secções foram incubadas com corpos anti-primários a 4°C durante a noite e, em seguida, com anticorpos secundários de 2 h à temperatura ambiente. Thefollowing primário anti corpos foram utilizados: mouse anti-humancytokeratin (CK)10 (1:200, ab111447) e de coelho anti-humano CK14(1:200, ab7800) (ambos da Abcam, Cambridge, MA, EUA), rabbitanti-humanos CK5 (1:200, ZA-0518; Zhongshan Goldenbridge, Pequim,China), o mouse anti-human CK19 (1:200, ab53119; Abcam), rabbitanti-humanos integrina-β1 (1:200, PB0063; Boster, Wuhan, A China); mouseanti-humanos integrina-β4 (1:200, ab128068; Abcam), o mouse anti-humanlaminin (1:200, ZM-0181; Zhongshan Goldenbridge), rabbit anti-humanlamininin-5(1:200, ab14509; Abcam) and mouse anti-human collagen IV (1: 200, ZM-0081; Zhongshan Goldenbridge). Foram utilizados os seguintes anticorpos secundários:anti-coelho conjugado Alexa-Fluor 488 (1:200,ab150117) e anti-coelho conjugado Alexa-Fluor 594 (1: 200,ab150080) (ambos da Abcam). Os núcleos foram manchados com DAPI(H-1200; Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA).Imagens de imunofluorescência foram captadas usando um microscópio de laserscanning confocal (SP8; Leica, Solms, Alemanha).

cultura celular e tratamento

queratinócitos epidérmicos primários humanos (HEKs) foram isolados a partir dos prepúcios masculinos como anteriormente descrito (13), com pequenas modificações. As células humanimortalizadas do queratinócito (HaCaT) foram compradas da infra-estrutura de recursos da linha celular (3111C0001CCC000373;Pequim, China). Tanto as células HEKs como as células HaCaT foram incubadas em meio EpiLife (M-EPI-500-CA; Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA) complementadas com 0,06 mM Ca2+, 1% EpiLife defined growth supplement (S-001-5; Invitrogen LifeTechnologies), e 1% penicilina / estreptomicina (P1400; Solarbio,Pequim, China). Para investigar os papéis da BM em regulatingkeratinocyte comportamento in vitro, a HEKs e HaCaT cellswere banhado em 60 mm-pratos revestido com MaxGel ECM (E0282) andcollagen tipo IV (C7521) (ambos da Sigma-Aldrich), respectivamente.Para o tratamento com Ca2+, as células foram incubadas em EpiLifemedium complementado com 1, 5 mM Ca2+ para 0, 12 e 24 h.O ECM MaxGel contém componentes de matriz extracelular humana (ECM), incluindo colagénios, laminina, fibronectina, tenascina e elastina, bem como uma série de proteoglicanos e glicosaminoglicanos. As células não tratadas com Ca2+ foram utilizadas como controlos.

transcrição Reversa-quantitativo(real-time PCR (RT-de acordo com pcr)

RNA Total foi isolado a partir de células após theywere submetido a diversos tratamentos utilizando o reagente TRIzol(15596-026; Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) e, em seguida, cDNA wassynthesized usando GoScript transcriptase reversa (A5001; Promega, Madison, WI, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. As sequências de marcadores utilizadas para a amplificação de genes estão listadas na tabela I. As reacções qPCR foram executadas com GoTaq qPCR Master Mix (A6001; Promega) utilizando um sistema e software ABI 7500Real Time PCR (Applied Biosystems, Foster City,CA, EUA). O protocolo de reação consistiu nos seguintes ciclos: 95 ° C para 15 sec, 55°C para 30 sec, e 72°C para 30 sec para 40 ciclos de amplificação PCR.

a análise Western blot

proteína Total foi isolada das células e 20 µg de proteína foi dissolvida em tampão solúvel em substrato. Theproteins were then separated by SDS-PAGE and transferred ontopolyvinylidene difluoride (PVDF) membranes (IPFL00010; Millipore,Billerica, MA, USA). Após o bloqueio, os borrões foram testados com theprimary anticorpos durante a noite a 4°C. Os anticorpos utilizados forwestern blot incluído CK10 (1:1000, ab111447), CK14(1:500, ab7800), CK19 (1:500, ab53119), integrina-β4 (1:500, ab128068), e anticorpo β-actina anti-humano do Rato(1: 5000, ab6276) (todos provenientes do Abcam). Após a lavagem, as membranas foram incubadas com anticorpos secundários, que eram o anti-coelho da cabra e o IgG do ratinho da cabra conjugado com a peroxidase de rábano silvestre (sc-2004,1:1000; sc-2005, 1:1000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz,CA, EUA). Imunorreativa bandas foram detectadas pelo enhancedchemiluminescence (ECL) kit (PE-0010-100; Solarbio, Pequim, China)e imagem utilizando o ImageQuant LAS 4000 sistema (GE HealthcareBio-Ciências, em Pittsburgh, EUA).

análise estatística

todas as experiências foram repetidas pelo menos 3 vezes,salvo indicação em contrário. Os dados são apresentados como a média ±desvio-padrão (DP). Análise estatística foi realizada usingSPSS 20.0 software. A comparação de dados foi realizada utilizando o teste t do aluno independente e uma ANOVA de Sentido Único seguida pelo LSDtest. Considerou-se que um valor P <0,05 indicava uma diferença estatisticamente significativa.

resultados

diferenças morfológicas nos tecidos cicatriciais normais e hipertróficos

a reparação de feridas na pele é um processo preciso de remodelação,que é dividido classicamente em quatro fases sobrepostas e envolve a interacção de muitos tecidos e células diferentes (5). No entanto,nas feridas crónicas, interrompe-se o processo de cicatrização normal, o que resulta num ciclo patológico de inflamação e de protease que relega para o desenvolvimento de uma cicatriz patológica. Neste estudo, para avaliar as alterações morfológicas que ocorrem na epiderme regeneradora durante a cicatrização da ferida da pele, foram obtidas amostras de tecidos cicatrizados, normais e hipertróficos, de modo a obter-se a rotina H&e e a coloração tricromática de Masson. Nas amostras de pele, a estrutura histológica da pele era visível, mostrando camadas da epiderme e derme. A epiderme continha 4 a 5 camadas, nas quais os queratinócitos diferenciavam-se e amadureceram gradualmente em células espinhosas, células granulares e células cornifiadas durante a sua passagem para o exterior (Fig. 1A). Além disso, na dermatéria subjacente, os fibroblastos formavam tecido conjuntivo solto, que era rico em fibras colagenosas paralelas (Fig.1D). Nos tecidos em torno da borda da ferida, no entanto, a epiderme proliferou; era constituída por múltiplas camadas dequeratinócitos de morfologia distinta e tinha um aumento visível de enjoo (Fig. 1B e E). A epiderme e a derme entrelaçam-se através de projeções tipo dedo(chamadas cristas Retes), o que aumentou a área superficial de contato entre a epiderme e a derme. Tanto nos tecidos normais como nos tecidos ondulados, os queratinócitos basais estavam dispostos como uma camada única regimentede células cuboidais ou colunares baixas, que se ligavam às camadas celulósicas espinosas acima (Fig.1A E B). A estrutura histológica do scartissue hipertrófico diferia da estrutura do tecido normal da pele por ter um rico suprimento de sangue ,e uma camada epidérmica espessa(Fig. 1C E F). A derme foi composta em grande parte de tecido conjuntivo denso e desorganizado que inclui fibras colagenosas de forma irregular e um maior nome (Fig. 1F). Para furtherclarify as diferenças na estrutura histológica entre o normal,borda da ferida e cicatriz hipertrófica tecidos, metenamina silverstaining foi realizada para avaliar a formação do BM, whichindicated que a BM estrutura foi detectável nas seções do normal e ferida borda tecidos (Fig. 1G e H). Nos tecidos da cicatriz,no entanto, a coloração BM estava ausente(Fig.1I).

Diferenças na expressão de cellmarkers em queratinócitos da epiderme normal, borda da ferida andhypertrophic tecidos de cicatriz

Dadas as diferenças morfológicas que wereobserved normal, borda da ferida e cicatriz hipertrófica tecidos,examinamos se os queratinócitos basais apresentaram um differentcellular comportamento durante a formação de cicatriz. Inicialmente, realizamos coloração de imunidade para detectar a expressão de CK10,CK14, CK5, CK19 e integrin-β1 nas seções de tecidos normais, borda da ferida e cicatriz. Estudos anteriores verificaram que o CK10 é um marcador de queratinócitos diferenciados, que o CK14 e o CK5 são marcadores de queratinócitos basais proliferantes ou TAs, e que o CK19 é um marcador aputativo de células progenitoras epidérmicas ou células estaminais na theskin (14-17). Integrina-β1 também é considerado amarker de células precursoras na pele (18,19). Os nossos resultados indicaram que o CK10 foi expressionado na camada exterior da epiderme nos tecidos laterais normais e adjacentes (Fig. 2-a e B), e nas células supra-basais, que diferenciam terminalmente as células na epiderme do tecido cicatricial hipertrófico (Fig. 2C). O CK14 foi expresso em ambas as camadas basais e supra-basais na epiderme estratificada de todos os três tecidos(Fig. 2D-F), E havia uma extensa distribuição de CK14 na gama de camadas do tecido cicatricial (Fig.2F). O padrão de distribuição de CK5 foi semelhante ao de ofCK14 (Fig. 2G-I), que indicava um aumento do número de células proliferativas na epiderme hiperproliferativa. Integrin-β1 e CK19 foram expressos na camada basal da epiderme normal(Fig. 2J E M) e nas camadas basais e supra-basais da epiderme do bordo da ferida (Fig. 2K e N), mas não foram detectáveis na epiderme dos tecidos cicatrizados hipertróficos(Fig. 2L e O). Colectivamente, estes observatórios indicam que o perfil de expressão de queratina dos basalkeratinócitos diferia entre os tecidos cicatrizados normais e hipertróficos. Embora tenham sido detectadas menos células com expressão de CK19 nas camadas basais e supra-basais do tecido cicatricial (Fig.2P), um fenótipo proliferativo foi revelado devido à crescente expressão de CK14 e CK5 no multilateralismo.

a estrutura BM alterada contribui para o perfil de expressão da queratina differencial na queratinocitesin vivo epidérmica

como componente chave do nicho de células estaminais, a Ecmnão só fixa as células estaminais, mas também orienta o seu destino (20). Como mencionado acima, a estrutura histológica do BM parecia estar ausente nas amostras de tecido cicatricial hipertrófico. Dadas as diferenças nos perfis de expressão da tekeratina na camada basal de epiderme de cicatriz normal, ondulada e hipertrófica, especulou-se então que as anormalidades estruturais da BM desempenham um papel na regulação da decisão do destino dos queratinócitos basais durante a cicatrização da ferida. Para analisar esta hipótese, a coloração da imunofluorescência foi realizada para visualizar os componentes do BM nas amostras normais, bordas da ferida e tecido cicatricial. Os nossos resultados revelaram que a expressão de colagénio IV foi detectada na área de BM em ambos os níveis normais(Fig. 3A) e a extremidade da ferida (Fig. 3B) tecidos. No entanto, observou-se a formação de estruturas do tipo BM com ausência de colagénio Ivexpressão na epiderme de escartismos hipertróficos (Fig. 3C). Embora a expressão da laminina tenha sido detectada nos três tipos de tecidos (Fig. 3D-F), A dupla etiquetagem da laminina-5 e do seu receptor integrin-β4 verificou ainda que a estrutura da BM foi alterada na epiderme dos tecidos cicatrizados hipertróficos; coloração negativa da laminina-5 e da integrin-β4 (figos.3i e 4G–I) foram observados em comparação com os valores normais (figos. 3G e 4A–C) e tecidos dos bordos das feridas (figos. 3H e 4D-F). Tendo em conta estes resultados, é provável que a Mb normal tenha contribuído para o recrutamento de células com expressão de integrina-β1-e CK19 na camada basal da epiderme normal e redonda. Anormalidades na estrutura BM, No entanto,induziram os queratinócitos basais a diferenciar e adotar fenótipo proliferativo durante a patogênese da cicatriz.

Alterado BM estrutura promove epidermalkeratinocytes para adotar um proliferativa fenótipo in vitro

O suporte mecânico fornecido pela BM isdetermined principalmente por suas colagénio tipo IV andaime (21), em que a laminina redes andperlecan oligômeros são integrados com o cross-linking nidogens tofinally montar a folha-como o BM complexo (22). Para clarificar ainda mais os papéis do MBM na regulação do comportamento dos queratinócitos epidérmicos, usámos o ECM derivado de extrato de BM humano para revestir os pratos de cultura, a fim de controlar o padrão de adesão de matriz celular. Como mostrado no inFig. 5, ECM administrationresulted in the upregulation of integrin-β4 expression in the HEKs(Fig. 5A) e a HaCaT (Fig. 5. B) células, que estavam presentes na membrana do plasma e nos locais de fixação da matriz celular. Também operamos a análise western blot para examinar os níveis proteicos de integrina-β4 nas linhas celulares epidérmicas com ou sem ECMcoating. Os nossos dados demonstram que níveis mais elevados de integrina-ß4 foram detectáveis nos grupos tratados com ECM do que nos controlos,o que confirmou ainda mais os resultados da imunocomprometência fluorescente(Fig. 5C). Além disso, as células HEKs e hacat foram mudadas para um meio contendo 1, 5 mMCa2+ durante os períodos de tempo indicados para generatediferentificar as células epidérmicas Como anteriormente descrito (23, 24). Após o tratamento com Ca2+, as alterações morfológicas em ambas as Heques (Fig. 6A) e células HaCaT (Fig. O Ca2+ induziu a expressão de CK10 (figos. 5D, G E J, E 6C e D) e CK14 (figos. 5E, H E J, E 6C e D) de forma dependente do Tempo, linhas celulares inepidérmicas em ambos os mRNA (figos. 5D, e, G E H, E 6C e D) e proteínas (Fig. 5J) níveis, sendo observados níveis máximos de expressão Ck10 e CK14 24 h após o início do tratamento com 1, 5 mMCa2+ nas HEKs (figos. 5D, e E J E 6C) e as células HaCaT (figos. 5G, H E J E 6D). Após o tratamento com Ca2+, a expressão de CK19 foi reduzida nas HEKs, atingindo o seu nível mais baixo às 24 horas após o início do tratamento com Ca2+ (figos. 5F e J E 6C). Observaram-se resultados semelhantes nas células de hacat (figos. 5I e J E6D). O tratamento com ECM, contudo, reduziu as respostas diferenciais dos queratinócitos associados à Administração de Ca2+ nas células HEKs e HaCaT,e aumentou a expressão de CK19 a 12 h e 24 h após o tratamentoa2+ (Fig. 5F, Iand J). Para determinar ainda mais o papel potencial do BM na regulação do comportamento dos queratinócitos epidérmicos, colágeno tipo IV foi usado para formar uma estrutura semelhante à BM in vitro. O tratamento com colagénio IV contribuiu para a expressão de CK19 e reduziu a expressão de CK10 e CK14 nos níveis de mRNA e de proteínas em ambas as HEKs(Fig. 7A-C E G) E os Hackcells (Fig. 7D-F E G). Estes resultados validaram ainda mais as nossas constatações in vivo de que o Bm Parece ser um regulador positivo do recrutamento de células precursoras na camada basal da epiderme.As alterações na estrutura BM promoveram o desenvolvimento de fenótipo proliferativo em queratinócitos basais, como indicado pela expressão melhorada dos marcadores associados à proliferação celular, por exemplo, CK14 e CK5.

Discussion

In the present study, we first investigated themorphological changes which occur during epidermal regeneration aspart of the wound healing process. Os nossos dados demonstraram que a estrutura histológica dos tecidos cicatrizados hipertróficos se difundiu da do tecido cutâneo normal, com um aumento significativo da espessura epidermal entre a camada basal e o estrato da córnea observada. Notavelmente, a coloração do BM parecia ser absentismo do tecido cicatricial. Além disso, imunofluorescência para CK10,CK14, CK5, CK19 e integrina-β1 indicou que o differentialexpression do basal keratinocyte marcadores diferiu entre os samplesof normal, borda da ferida e cicatriz hipertrófica tecidos, andfurthermore epiderme da cicatriz hipertrófica tecido exhibiteda proliferativa fenótipo trocando a expressão ofintegrin-β1 e CK19 para CK14 e CK5, marcadores de cellproliferation, em várias camadas da epiderme. Atendendo a estes resultados,nós, portanto, a hipótese de que o BM desempenha um papel na regulação thecell destino decisão de queratinócitos da epiderme durante a ferida healing.By usando um painel de anticorpos associados com a BM componentes, wevalidated nossa hipótese de que a estrutura da BM foi alteredin a cicatriz hipertrófica tecidos. Os nossos resultados indicaram que a Bmcontribuiu para o recrutamento de células com expressão de CK19 na camada basal da epiderme normal e da extremidade da ferida, onde as normalidades na estrutura do BM induziram os basalkeratinócitos a diferenciar e adoptar uma patogénese da cicatriz proliferativa fenotipeduradora. Usando o ECM e o colágeno IV imitar theBM estrutura in vitro, nós ainda confirmada a nossa invivo observações e mostrou que a BM reduzido thedifferentiating respostas dos queratinócitos induzida byCa2+ de administração nas células epidérmicas linhas andenhanced a expressão de CK19, um suposto marcador de epidermalprogenitor células.

a Mb desempenha um papel fundamental na diferenciação, proliferação, Sobrevivência e migração de células durante o desenvolvimento embrionário. Na pele, o BM separa fisicamente a epiderme da derme subjacente. Os basalkeratinócitos da epiderme ligam-se à BM subjacente através das integrinas, que se ligam a alguns componentes BM, tais como colagénio,laminina e fibronectina (25).Assim, A BM não só serve como barreira seletiva e suporte estrutural, mas também fornece uma interface de comunicação entre fibroblastos e queratinócitos epidérmicos (2,26).A Mb também se liga a uma série de citocinas e fatores de crescimento,servindo como reservatório para a sua libertação controlada, que regula as interações queratinócito-fibroblastos para promover o desenvolvimento da pele, bem como a cicatrização de feridas (27,28). Estudos anteriores sobre a formação de cicatrizes centraram-se principalmente em fibroblastos e pouco se sabe sobre o Terol dos queratinócitos epidérmicos sobrevoantes (29,30). Há uma crescente evidência de thatkeratinocytes pode desempenhar um importante papel no desenvolvimento ofpathological fibrose através parácrina regulamento de fibroblastfunction (6,9,10).Também tem sido mostrado que queratinócitos derivada da cicatriz tissuesdiffered de queratinócitos normais exibindo diferencial geneexpression perfis (12). Os mecanismos responsáveis pelas anomalias fundamentais dos inkeratinócitos durante a cicatrização de quelóides e hipertróficos permanecem indescritíveis. Os nossos dados indicam uma ligação potencial entre a remodelação da BM e a manutenção da função queratinocitária durante a reparação e regeneração da ferida. É bem conhecido que as moléculas de aderência, suchintegrinas e E – E-E N-cadherina, ancoram células estaminais ao ECM(22). À luz das observações, afigura-se que o MB pode representar uma parte dos componentes de “iche” para o recrutamento de células progenitoras epidérmicas na camada basal da epiderme da pele. Os nossos resultados indicam que o funcionamento anómalo do MB reduz a ligação das células de base ao seu microambiente circundante e induz-as a adoptar um fenótipo proliferativo, o que pode explicar a patogénese das cicatrizes (Fig.8).

Agradecimentos

Este estudo foi apoiado em parte por doações de theNovel Programa de Pequim (nos. 2008B53 e 2009A38) e national de Ciências Naturais da Fundação da China (nos. 30901564,81101883, 81372067, 81121004 e 81230041) e o Nacional BasicScience e Programa de Desenvolvimento (973 Programa, 2012CB518105).

	Fuchs E Raghavan S: ficar sob a pele da morfogénese epidérmica. Nat Rev Genet. 3:199–209. 2002.Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Breitkreutz D, Mirancea N e Nischt R:membranas basais na pele: matriz única de estruturas com diversefunctions? Histochem Cell Biol. 132:1–10. 2009. Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Blanpain C e Fuchs e: caules epidérmicos da pele. Annu Rev Cell Dev Biol. 22:339–373. 2006.Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Snippert HJ, Haegebarth Um, Kasper M, JaksV, van Es JH, Barker N, van de Wetering M, van den Born M, BegthelH, Vries, RG, et al: Lgr6 marcas de células-tronco no folículo piloso thatgenerate todas as linhagens de células da pele. Ciência. 327:1385–1389.2010. Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Broughton G II, Janis JE and Attinger CE: The basic science of wound healing. Plast Reconstr Surg. 117( Suppl7): 12S–34S. 2006. Ver Artigo: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bellemare J, Roberge CJ, Bergeron D,Lopez-Vallé CA, Roy M e Moulin VJ: Epiderme promove dermalfibrosis: papel na patogênese de cicatrizes hipertróficas. J Pathol.206:1–8. 2005. Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Andriessen MP, Niessen FB, Van de KerkhofPC e Schalkwijk J: à cicatriz Hipertrófica é associado withepidermal anormalidades: um estudo imuno-histoquímica. J Pathol.186:192–200. 1998. Ver O Artigo : O Google acadêmico
	Teepe RG, Kreis RW, Koebrugge EJ,Kempenaar JA, Vloemans AF, Hermans RP, Boxma H, Dokter J, HermansJ, Ponec M, et al: O uso de culto autólogo epiderme em tratamento de extensa de queimadura feridas. Trauma J. 30:269–275. 1990.Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Funayama E, Chodon T, Oyama a e SugiharaT: os queratinócitos promovem a proliferação e inibem a apoptose dos fibroblastos subjacentes: um papel importante na patogênese dokelóide. Invest Dermatol. 121:1326–1331. 2003. Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Lim IJ, Phan TT, Baía de BH, Qi R, Huynh H,Tan WT, Lee ST e Longaker MT: Fibroblastos cocultured com keloidkeratinocytes: normal fibroblastos secretam colágeno em um keloidlikemanner. Physiol Cell Physiol. 283: C212-C222. 2002. Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Hahn JM, Glaser K, McFarland KL, AronowBJ, Boyce ST e Supp DM: Os queratinócitos derivados de quelóides apresentam um perfil de expressão do gene anormal consistente com uma causalrole distinta na patologia quelóide. Reparação De Feridas Regen. 21:530–544. 2013.Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Machesney M, Tidman N, Waseem a, Kirby Land Leigh I: ativados queratinócitos na epiderme de cicatrizes hipertróficas. Sou J Pathol. 152:1133–1141. 1998.PubMed/NCBI
	Orazizadeh M, Hashemitabar M, BahramzadehS, Dehbashi FN e Saremy S: Comparação dos métodos enzimáticos e explicativos para a cultura de queratinócitos isolados do prepúcio humano. Rep. Biomed 3: 304-308. 2015.PubMed/NCBI
	Su L, Morgan PR e Lane EB: queratina 14E 19 expressão em oralepitélio normal, displásico e maligno. A study using in situ hybridization andimmunohistochemistry. To Oral Pathol Med. 25:293–301. 1996.Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Michel M, Török N, Godbout MJ, Lussier M,Gaudreau P, Real e Um Germain L’: Queratina 19 como um médico bioquímico de células estaminais da pele in vivo e in vitro: queratina 19 células expressoras são diferencialmente localizadas em função de locais anatômicos, e seu número varia com a idade do doador e culturestagem. J Cell Sci. 109:1017–1028. 1996.PubMed/NCBI
	Khanom R, Sakamoto K, Pal SK, Shimada Y,Morita K, Omura K, Miki Y e Yamaguchi Um: Expressão basal cellkeratin 15 e queratina 19 oral de células escamosas neoplasias representsdiverse pathophysiologies. Histopathol Histol. 27:949–959.2012.PubMed/NCBI
	Fuchs e: células estaminais da pele: subindo para a superfície. J Cell Biol. 180:273–284. 2008. Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Yeh YC, Lin HH) e Tang (MJ: UM conto de twocollagen receptores, integrina b1 e discoidin domínio receptor 1, inepithelial diferenciação celular. Physiol Cell Physiol.303: C1207-C1217. 2012. Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Borowska K, Jedrych B, Czerny K andZabielski S: O papel das integrinas nos processos fisiológicos e patogênicos. Pol Merkur Lekarski. 21:362–366. 2006.Artigo Em Polaco.
	Lane SW, Williams Da and Watt FM: Modulating the stem cell nicho for tissue regeneration. NatBiotechnol. 32:795–803. 2014. ViewArticle : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Breitkreutz D, Koxholt eu, Thiemann K andNischt R: a Pele da membrana basal: a fundação de epidermalintegrity – BM funções e os diversos papéis da ponte moleculesnidogen e perlecano. Biomed Res Int. 2013(179784)2013. Ver artigo: Google Scholar
	Timplr e Brown JC: Supramolecularassembly of basement membranes. BioEssays. 18:123–132. 1996.Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Hennings H, Michael D, Cheng C, SteinertP, Holbrook K e Yuspa SH: Cálcio regulação do crescimento anddifferentiation de mouse da epiderme células em cultura. Celula.19:245–254. 1980. Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Hennings H E Holbrook KA: Calciumregulation of cell-cell contact and differentiation of epidermalcells in culture. Um estudo ultra-estrutural. Exp Cell Res. 143: 127-142. 1983. Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Burgeson RE e Christiano AM: junção epidérmica-dérmica. Curr Opin Cell Biol. 9:651–658. 1997.Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	LeBleu VS, Macdonald B and Kalluri R: Structure and function of basement membranes. Exp Biol Med(Maywood). 232:1121–1129. 2007. Ver O Artigo : Pesquisador do Google
	Iozzo RV: Basement membrane proteoglycans: from cellar to ceiling. Nat Rev Mol Cell Biol. 6:646–656. 2005.Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Werner S, Krieg T e Smola H:interações queratinócitos-fibroblastos na cicatrização de feridas. J InvestDermatol. 127:998–1008. 2007. Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Moulin V, Castilloux G, Auger FA, GarrelD, O’Connor-McCourt M E Germain l: Tocitocinas de resposta modulada de miofibroblastos de cicatrização de feridas humanas em comparação com dermalfibroblastos. Exp Cell Res. 238:283-293. 1998. Ver Artigo : Google acadêmico : PubMed/NCBI
	Gabbiani G, Ryan GB e Majne G: Presenceof modificado fibroblastos no tecido de granulação e seus possiblerole na contração da ferida. Experientia. 27:549–550. 1971.Ver artigo: Google Scholar: PubMed/NCBI