Jurnalul Internațional de Medicină Moleculară

Introducere

pielea servește ca barieră fizică și chimică între corpul interior și mediul exterior, care constă dintr-o dermă subiacentă de origine mezodermică și o epidermă de origine ectodermică. Deși aceste douăstraturi îndeplinesc funcții diferite, ele comunică în diversemoduri și la diferite niveluri. Funcția de barieră vitală a pielii este asigurată în primul rând de epiderma stratificată superioară, compusă din keratinocite suprabazale bazale și diferențiate(1). Pentru a finaliza aceste funcții,celulele stem din stratul bazal sunt capabile să se reînnoiască de-a lungul vieții și produc celule fiice care suferă diferențiere (2). Astfel, echilibrul dintre proliferarea și diferențierea keratinocitelor bazale este esențial pentru integritatea epidermică și asigură apariția reînnoirii țesuturilor care este necesară pentru a finaliza funcțiile fiziologice normale. În plus față de menținerea homeostaziei tisulare, celulele stem care locuiesc în epidermă și foliculii de păr participă, de asemenea, la repararea epidermei după leziune (3,4).în piele, diferite faze ale vindecării rănilor evoluează în interacțiuni dinamice între celulele epidermice, celulele dermice și celulele derivate din os. Keratinocitele reprezintă prima linie de apărare a corpului împotriva mediului exterior. Prin urmare, ei sunt primii care răspund la rănire. Odată cu eliberarea citokinelor inflamatorii și contracția fibrelor colagene,keratinocitele epidermice bazale sunt activate și migrează în zona plăgii, unde proliferează și se diferențiază până la reînnoirea conținutului celular al țesutului (5). O serie de observații aua sugerat că epiderma are un efect asupra patologiei cicatricilor cutanate (6,7). La pacienții cu arsuri, cicatricile hipertrofice apar mai frecvent atunci când rănile se vindecă prin intenție secundară,în timp ce grefarea precoce a pielii pare să suprime formarea cicatricilor(8). Funayama et aldemonstrat că fibroblastele derivate din cheloide co-cultivate cu keratinocitele derivate din cheloide au fost semnificativ mai proliferative și mai rezistente la apoptoză decât cele co-cultivate cu keratinocitele derivate din piele normală (9).într-un sistem similar de co-cultură, s-a constatat că keratinocitele derivate din cheloide au promovat creșterea producției de colagen, precum și proliferarea crescută a fibroblastelor normale (10). În special, s-a demonstrat că keratinocitele derivate din cheloide prezintă expresia crescută a unui set de gene histonice esențiale pentru replicarea ADN-ului incomparabil cu nivelurile de Expresie din celulele normale, iar keratinocitele din epiderma cicatricilor hipertrofice au intrat într-o cale alternativă de diferențiere și exprimă un fenotip proliferativ (11,12). Aceste rezultate sugerează că echilibrul dintre proliferarea și diferențierea keratinocitelor este dereglat în țesuturile cicatriciale și că anomaliile fundamentale ale keratinocitelor pot juca un rol mai important în regenerarea pielii și patogeneza acesteia decât a fost apreciat anterior.

în studiul de față s-au obținut și analizat țesuturi normale, de margine a plăgii și cicatriciale hipertrofice utilizând metode histologice și imunofluorescente pentru a investiga diferențele de morfologie, precum și profilele de expresie a keratinei în timpul regenerării epidermice. Rezultatele noastre au indicat că a existat o variație a profilurilor de expresie a keratinei în keratinocitele epidermice de la marginea normală, rana și cicatricile hipertrofice, care corespundeau cu anomalii în structura membranei bazale (BM). Folosind un panou de anticorpi la Bmcomponente, am validat ipoteza noastră și am stabilit că BMA fost un regulator pozitiv al recrutării celulelor precursoare în stratul bazal al epidermei. Datele noastre indică faptul căalterațiile în structura BM promovează keratinocitelebazalesă adopte un fenotip proliferativ atât in vivo, cât și invitro.

materiale și metode

probe de țesuturi

țesut cicatricial hipertrofic (4 femei și 3 bărbați; agerange 18-40 ani) și țesut de margine a plăgii (3 femei și 5 bărbați;interval de vârstă, 18-40 ani) probele au fost obținute de la pacienți care au suferit anterior o intervenție chirurgicală de arsură reconstructivă. Țesutul normal al pielii (4femeile și 3 bărbați; intervalul de vârstă, 18-40 de ani) adiacent scarexciziei în timpul intervenției chirurgicale a fost folosit ca control. Foreskins au fost,de asemeneaobținute de la bărbați supuși circumciziei (10 bărbați; interval de vârstă, 18-20 de ani). Prezentul studiu a fost aprobat de Comitetul de etică al Spitalului General PLA din China (Beijing, China), iar consimțământul informat scris a fost obținut de la toate persoanele înainte de a primi probele.

colorarea imunofluorescenței

pielea normală, marginea plăgii și țesutul cicatricial hipertroficeșantioanele au fost fixate în formalină tamponată 10%, soluții deshidratate prinetanol cu concentrație crescută succesiv și, în cele din urmă, încorporate în parafină. Parafină-embeddedțesuturile au fost tăiate în secțiuni groase de 4-unqqm pentru colorare cuhematoxilină și eozină (H&E), Tricromul lui Masson și argint metenamină (toate din Podul de aur Zhongshan, Beijing, China). Imaginile au fost capturate folosind un microscop optic (Bx53; Olympus, Tokyo, Japonia). Pentru a efectua colorarea imunofluorescenței, secțiunile au fost fixate în paraformaldehidă 4% Timp de 30 min și apoipermeabilizată în 0,2% Triton X-100 (T8787; Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, SUA) în soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) timp de 10 min. Sectiunile au fost incubate cu anticorpi primari la 4cc peste noapte si apoi cu anticorpi secundari timp de 2 ore la temperatura camerei. Următoarele corpuri anti primare au fost utilizate: mouse anti-humancytokeratin (CK)10 (1:200, ab111447) și rabbit anti-human CK14(1:200, ab7800) (ambele din Abcam, Cambridge, MA, SUA), rabbitanti-human CK5 (1:200, ZA-0518; Zhongshan Goldenbridge, Beijing,China), mouse anti-human ck19 (1:200, ab53119; abcam), rabbitantiumană integrină-INX1 (1:200, pb0063; Boster, Wuhan, China); MOUSEANTIUMANĂ integrină-inx4 (1:200, ab128068; abcam), mouse-ul anti-humanlaminin (1:200, ZM-0181; Zhongshan Goldenbridge), iepure anti-humanlaminin-5 (1:200, ab14509; Abcam) și colagen anti-uman de șoarece IV(1:200, ZM-0081; Zhongshan Goldenbridge). Au fost utilizați următorii anticorpi secundari: Alexa-Fluor 488-anti-șoarece conjugat (1:200,ab150117) și Alexa-Fluor 594-anti-iepure conjugat (1: 200, ab150080) (ambele de la Abcam). Nucleele au fost colorate cu DAPI (H-1200; Vector Laboratories, Burlingame, ca, SUA).Imaginile de imunofluorescență au fost capturate folosind un microscop confocal laserscanning (SP8; Leica, Solms, Germania).

cultură celulară și tratament

keratinocitele epidermice umane primare (HEKs) au fost izolate din prepuțul masculin, așa cum s-a descris anterior (13), cu modificări minore. Celulele keratinocitare umane imortalizate (HaCaT) au fost achiziționate de la infrastructura China a resurselor liniei celulare (3111c0001ccc000373;Beijing, China). Atât celulele HEKs, cât și celulele HaCaT au fost incubate în mediul EpiLife (m-EPI-500-ca; Invitrogen Life Technologies,Carlsbad, CA, SUA) suplimentat cu 0,06 mM Ca2+, 1% EpiLife definit supliment de creștere (S-001-5; Tehnologii) și 1% penicilină / streptomicină (P1400; Solarbio,Beijing, China). Pentru a investiga rolurile BM în reglarea comportamentului keratinocitelor in vitro, celulele HEKs și HaCaT au fost placate în vase de 60 mm acoperite cu MaxGel ECM (e0282) și collagen tip IV (c7521) (ambele de la Sigma-Aldrich), respectiv.Pentru tratamentul cu Ca2+, celulele au fost incubate în EpiLifemedium suplimentat cu 1,5 mM Ca2 + timp de 0, 12 și 24 de ore.MaxGel ECM conține componente ale matricei extracelulare umane (ECM), inclusiv colageni, laminină, fibronectină, tenascină și elastină, precum și un număr de proteoglicani și glicozaminoglicani. Celulele care nu au fost tratate cu Ca2+ au fost utilizate ca controale.

transcriere inversă-cantitativă(în timp real) PCR (RT-qPCR)

ARN-ul Total a fost izolat din celule după ce au fost supuse diferitelor tratamente folosind reactiv TRIzol(15596-026; Invitrogen, Carlsbad, CA, SUA) și apoi ADNc a fost sintetizat folosind transcriptază inversă goscriptază (A5001; Promega, Madison, WI, SUA) conform instrucțiunilor producătorului. Secvențele de primer utilizate pentru amplificarea genelor sunt enumerate în tabelul I. reacțiile qPCR au fost efectuate cu GoTaq qPCR Master Mix (a6001; Promega) utilizând un sistem și un software PCR în timp real ABI 7500 (Applied Biosystems, Foster City,CA, SUA). Protocolul de reacție a constat în următoarele cicluri:95 CTF pentru 15 sec, 55 CTF pentru 30 sec și 72 CTF pentru 30 sec pentru 40 de cicluri de amplificare PCR.

analiza Western blot

proteina totală a fost izolată din celule și 20 de grame de proteină au fost dizolvate în tampon solubil în substrat. Proteinele au fost apoi separate prin SDS-PAGE și transferate pe membrane de difluorură de poliviniliden (PVDF) (IPFL00010; Millipore,Billerica, MA, SUA). După blocare, bloturile au fost probate cu anticorpi primari peste noapte la 4 CTC. anticorpii utilizați pentru analiza Western blot au inclus CK10 (1:1000, ab111447), CK14(1:500, ab7800), CK19 (1:500, ab53119), integrin-irak4 (1:500, ab128068) și anticorp anti-uman pentru actină-actină de șoarece (1:5000, ab6276)(toate de la Abcam). După spălare, membranele au fost incubate cuanticorpi secundari, care au fost IgG anti-iepure și goatanti – șoarece conjugat cu peroxidază de hrean (sc-2004,1:1000; sc-2005, 1:1000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA,SUA). Benzile imunoreactive au fost detectate prin kit enhancedchemiluminescence (ECL) (PE-0010-100; Solarbio, Beijing, China)și imaginate folosind sistemul ImageQuant LAS 4000 (GE HealthcareBio-Sciences, Pittsburgh, SUA).

analiză statistică

toate experimentele au fost repetate de cel puțin 3 ori,cu excepția cazului în care se indică altfel. Datele sunt prezentate ca mijloc de deviație standard (SD). Analiza statistică a fost efectuată folosindsoftware-ul SPSS 20.0. Comparația datelor a fost efectuată utilizând testul t independent al elevului și ANOVA unidirecțională urmată de testul lsdt. S-a considerat că o valoare P <0,05 indică o diferență semnificativă statistic.

rezultate

diferențe morfologice în țesuturile normale,ale marginilor plăgii și ale cicatricilor hipertrofice

repararea plăgii pielii este un proces precis de remodelare,care este împărțit clasic în patru faze suprapuse și implică interacțiunea multor țesuturi și linii celulare diferite (5). Cu toate acestea,în rănile cronice, procesul normal de vindecare este întrerupt, ceea ce rezultăîntr-un ciclu patologic de inflamație și eliberare de proteazăconducând la dezvoltarea unei cicatrici patologice. În acest studiu, pentru a evalua modificările morfologice care apar în epiderma regenerantă în timpul vindecării rănilor cutanate, s-au obținut probe de țesuturi cicatriciale normale, rănite și hipertrofice pentru a efectua rutina H&E și colorarea tricromului Masson. În probele normale de piele, structura histologică a pielii a fost vizibilă, prezentând straturi ale epidermei și dermei. Epiderma conținea 4 până la 5 straturi, în care keratinocitele s-au diferențiat șimaturat treptat în celule spinoase, celule granulare și celule cornificate în timpul trecerii lor spre exterior (Fig. 1A). Mai mult, în substratul dermei, fibroblastele alcătuiau țesut conjunctiv liber, care era bogatîn fibre colagene paralele (Fig.1D). Cu toate acestea, în țesuturile din jurul marginii plăgii, epiderma a proliferat; era alcătuită din mai multe straturi de keratinocite cu morfologie distinctă și avea o grosime vizibil crescută (Fig. 1B și E). Epiderma și derma s-au interconectat prin proiecții asemănătoare degetelor(numite creste rete), care au mărit suprafața de contact între epidermă și dermă. Atât în țesuturile normale, cât și în cele rănite, keratinocitele bazale au fost aranjate ca un singur strat de celule columnare cuboidale sau joase, care s-au conectat lastraturile celulare spinoase de mai sus (Fig.1A și B). Structura histologică a cicatricei hipertrofice diferă de cea a țesutului normal al pielii prin faptul că are un bogatalimentarea cu sânge și un strat epidermic gros (Fig. 1C și F). Dermul a fost compus în mare parte din țesut conjunctiv dens, dezorganizat, care includefibre colagene dure de formă neregulată și un diametru mai mare (Fig. 1F). Pentru a clarifica diferențele de structură histologică între țesuturile normale, ale marginii plăgii și ale cicatricilor hipertrofice, s-a efectuat colorarea cu argint a metenaminei pentru a evalua formarea BM, ceea ce a indicat că structura BM a fost detectabilă în secțiunile țesuturilor normale și ale marginilor plăgii (Fig. 1G și H). Cu toate acestea,în țesuturile cicatriciale, colorarea BM a fost absentă (Fig.1I).

diferențe în exprimarea markerilor celulari în keratinocitele epidermice în țesuturile cicatriciale normale, la marginea plăgii și hipertrofice

având în vedere diferențele morfologice care au fost observate în țesuturile cicatriciale normale, la marginea plăgii și hipertrofice,am examinat dacă keratinocitele bazale au prezentat un comportament celular diferit în timpul formării cicatricilor. Inițial, am efectuatcolorarea imunofluorescenței pentru a detecta expresia CK10,CK14, CK5, CK19 și integrin-inkts1 în secțiunile de margine normală, înfășurată șițesuturi auto. Studiile anterioare au verificat că CK10 este un marker al keratinocitelor diferențiate, că CK14 și CK5 sunt markeri ai keratinocitelor bazale proliferante sau TAs și că CK19 este marker aputativ al celulelor progenitoare epidermice sau al celulelor stem din piele (14-17). Integrin-inkts1 este, de asemenea, considerat a fi amarker de celule precursoare în piele (18,19). Rezultatele noastre au indicat că CK10 a fostexprimat în stratul exterior al epidermei în țesuturile normale și de margine (Fig. 2a și B), iar în celulele suprabasale, care diferențiază terminalepiderma țesutului cicatricial hipertrofic (Fig. 2C). CK14 a fost exprimat în ambele straturi bazale și suprabasale în epiderma stratificată a tuturortrei țesuturi (Fig. 2D-F), șia existat o distribuție extinsă a CK14 în stratul multistrat al țesutului cicatricial (Fig.2F). Modelul de distribuție al CK5 a fost similar cu cel al ck14 (Fig. 2G-I), care a indicatun număr crescut de celule proliferative înepiderma hiperproliferativă. S-au exprimat Integrin-inktokt1 și CK19ÎN stratul bazal al epidermei normale (Fig. 2J și M) și în bazal șistraturile supra-bazale ale epidermei marginii plăgii (Fig. 2K și N), dar nu au fost detectabileîn epiderma țesuturilor cicatriciale hipertrofice (Fig. 2L și O). În mod colectiv, aceste observări indică faptul că profilul de expresie a keratinei bazalkeratinocitelor diferă între marginea normală a plăgii și țesuturile cicatriciale hipertrofice. Deși mai puține celule care exprimă CK19AU fost detectate în straturile bazale și suprabasale ale țesutului cicatricial hipertrofic (Fig.2P), un fenotip proliferativ a fost dezvăluit datorită expresiei crescute a CK14 și CK5 în depiderma multistrat.

structura modificată a BM contribuie la profilul de Expresie diferențială a keratinei în keratinocitele epidermice in vivo

ca o componentă cheie a nișei celulelor stem, ECM nu numai că ancorează celulele stem, ci și le direcționează soarta (20). După cum sa menționat mai sus, structura histologică a BM părea să lipsească în probele de țesut cicatricial hipertrofic. Având în vedere diferențele dintre profilurile de Expresie ale keratinei în stratul bazal al epidermei cicatriciale normale, rănite și hipertrofice, am speculat apoi că anomaliile structurale ale BM joacă un rol în reglarea deciziei de soartă a celulelor keratinocitelor bazale în timpul vindecării rănilor. Pentru a examina această ipoteză, s-a efectuat colorarea imunofluorescenței pentru a vizualiza componentele BM în marginea normală a plăgii și probele de țesut cicatricial hipertrofic. Rezultatele noastre au arătat căexpresia collagen IV a fost detectată în zona BM atât în normal (Fig. 3A) și marginea plăgii (Fig. 3B) țesuturi. Cu toate acestea, formarea structurilor asemănătoare BM cu absența expresiei colagenului IV a fost observată în epiderma cicatricilor hipertrofice (Fig. 3C). Deși expresia lamininei a fost detectată în toate cele trei tipuri de țesuturi(Fig. 3D-F), dubla etichetare a lamininei-5 și a receptorului său integrină-X4 a verificat în continuare că structura BM a fost modificată în epiderma țesuturilor cicatriciale hipertrofice; colorarea negativă a lamininei-5 și a integrinei-x4 (Fig.3I și 4G-I) a fost observat cacomparativ cu cel din normal (Fig. 3G și 4A–C) și țesuturile marginii plăgii (Fig. 3H și 4D-F). Având în vedere aceste constatări, este probabilcă BM normal a contribuit la recrutarea de celule care exprimă integrina-XV1-și ck19 în stratul bazal al epidermei normale și a marginii rănite. Cu toate acestea, anomaliile din structura BM au indus keratinocitele bazale să diferențieze și să adopte fenotipul aproliferativ în timpul patogenezei cicatricilor.

structura modificată a BM promovează keratinocitele epidermice să adopte un fenotip proliferativ in vitro

suportul mecanic oferit de BM este determinat în principal de schela sa de colagen de tip IV (21), în care rețelele de laminină și oligomerii perlecani sunt integrați de nidogenii reticulați pentru a asambla în cele din urmă complexul BM de tip foaie (22). Pentru a clarifica în continuare rolurile theBM în reglarea comportamentului keratinocitelor epidermice, am folosit ECM derivat din extractul BM uman pentru a acoperi vasele de cultură pentru a controla modelul de adeziune celulă-matrice. Așa cum se arată inFig. 5, administrarea ECM a dus la reglarea în sus a expresiei integrin-inx4 în HEKs(Fig. 5A) și HaCaT (Fig. 5B) celule, care a fost prezentă pemembrana plasmatică și la locurile de atașare a matricei celulare. Am efectuat, de asemenea, o analiză western blot pentru a examina nivelurile de proteine ale integrinei-x4 în liniile celulare epidermice cu sau fără ECMcoating. Datele noastre au demonstrat că niveluri mai ridicate de integrină-XV4 au fost detectabile în grupurile tratate cu ECM decât în grupurile de control, ceea ce a confirmat în continuare constatările imunostimulante fluorescente(Fig. 5C). Mai mult, celulele HEKs și hacat au fost trecute la mediu conținând 1,5 mMCa2+ pentru perioadele de timp indicate pentru a genera celule epidermice diferite, așa cum s-a descris anterior (23,24). În urma tratamentului cu Ca2+, modificările morfologice ale ambelor HEKs (Fig. 6A) și celulele HaCaT (Fig. 6B) au fost observate sub o luminămicroscop, care a inclus mărirea și aplatizarea celulelor.Ca2+ a indus expresia CK10 (Fig. 5D, G și J și 6C și D) și CK14 (Fig. 5E, H și J și 6C și D) într-o manieră dependentă de timp linii celulare inepidermale la ambele ARNm (Fig. 5D, E, G și H și 6C și D) și proteine (Fig. 5J), cu niveluri maxime de Expresie Ck10 și CK14 observate la 24 de ore după inițierea tratamentului de 1,5 mMCa2+ în HEKs (Fig. 5D, E și J și 6C) și celulele HaCaT (Fig. 5G, H și J și 6D). După tratamentul cu Ca2+, expresia CK19 a fost reglată în jos în HEKs, atingând cel mai scăzut nivel la 24 de ore după începerea tratamentului cu Ca2+ (Fig. 5F și J și 6c). Rezultate similare au fost observate încelulele hacat (Fig. 5I și J și 6D). Cu toate acestea, tratamentul ECM a redus răspunsurile diferențiatoare ale keratinocitelor asociate cu administrarea de Ca2+ în celulele HEKs și HaCaT și a îmbunătățit expresia CK19 la 12 ore și 24 ore după tratamentul Ca2+ (Fig. 5F, Iand J). Pentru a determina în continuare rolul potențial al BM înreglarea comportamentului keratinocitelor epidermice, colagenul de tip IVA fost utilizat pentru a forma o structură asemănătoare BM in vitro. Tratamentul cu colagen IV a contribuit la exprimarea CK19 și a redus expresia CK10 și CK14 la nivelul ARNm și al proteinelor în ambele HEKs(Fig. 7A-C și G) și celulele Hacat (Fig. 7D-F și G). Aceste rezultate au validat în continuare constatările noastre in vivo conform cărora Bmapare a fi un regulator pozitiv al recrutării celulelor asemănătoare precursorilor în stratul bazal al epidermei.Modificările structurii BM au promovat dezvoltarea fenotipului aproliferativ în keratinocitele bazale, așa cum este indicat de expresia îmbunătățită a markerilor asociați cu proliferarea celulară, de exemplu CK14 și CK5.

discuție

în studiul de față, am investigat mai întâi modificările morfologice care apar în timpul regenerării epidermice ca parte a procesului de vindecare a rănilor. Datele noastre au demonstrat că structura histologică a țesuturilor cicatriciale hipertrofice diferă de cea a țesutului normal al pielii, cu o creștere semnificativă a grosimii epidermice între stratul bazal și stratul cornos fiind observată. În special, colorarea BM părea să fie absentîn țesutul cicatricial. Mai mult,colorația imunofluorescentă pentru CK10, CK14, CK5, CK19 și integrin-XV1 a indicat faptul că expresia diferențială a markerilor bazali ai keratinocitelor diferă între eșantioanele țesuturilor normale, ale marginilor plăgii și ale cicatricilor hipertrofice și, în plus, epiderma țesutului cicatricial hipertrofic a prezentat un fenotip proliferativ prin comutarea expresiei integrin-inkts1 și ck19 la ck14 și CK5, markeri ai proliferării celulare, în epiderma multistratificată. Având în vedere aceste constatări, am emis ipoteza că BM joacă un rol în reglarea deciziei de soartă a keratinocitelor epidermice în timpul plăgii healing.By folosind un panou de anticorpi asociați cu componentele BM, am reevaluat ipoteza noastră că structura BM a fost modificatăîn țesuturile cicatriciale hipertrofice. Rezultatele noastre au indicat că BMC a contribuit la recrutarea celulelor care exprimă CK19 în stratul bazal al epidermei normale și a marginii plăgii, unde anomaliile din structura BM au indus bazalkeratinocitele să diferențieze și să adopte un fenotip proliferativ în timpul patogenezei cicatricilor. Prin utilizarea ECM și a colagenului IV pentru a imita structura BM in vitro, am confirmat în continuare observațiile noastre invivo și am arătat că BM a redus răspunsurile diferențiate ale keratinocitelor induse de administrarea aca2+ în liniile celulare epidermice și a îmbunătățit expresia CK19, un marker presupus al celulelor epidermice.

BM joacă un rol fundamental în diferențierea, proliferarea, supraviețuirea și migrarea celulelor în timpul dezvoltării embrionare. În piele, BM fizicsepară epiderma de dermul subiacent. Bazalkeratinocitele din epidermă se atașează la BM subiacentintegrine, care se leagă de unele componente BM,cum ar fi colagenul, laminina și fibronectina (25).Astfel, BM nu numai că servește ca o barieră selectivă și structuralăcaffold, dar oferă, de asemenea, o interfață de comunicare întrefibroblastele termice și keratinocitele epidermice (2,26).BM se leagă, de asemenea,de o serie de citokine și factori de creștere, servind drept rezervor pentru eliberarea lor controlată, carereglează interacțiunile keratinocitare-fibroblaste pentru a promovadezvoltarea pielii, precum și vindecarea rănilor (27,28). Studiile anterioare privind formarea cicatricilorau axat în principal pe fibroblaste și se știe puțin despre terolul keratinocitelor epidermice suprapuse (29,30). Există tot mai multe dovezi că keratinocitele pot juca un rol important în dezvoltarea fibrozei patologice prin reglarea paracrină a funcției fibroblastelor (6,9,10).s-a demonstrat, de asemenea, că keratinocitele derivate din țesuturile cicatricealediferă de keratinocitele normale prin expunerea profilurilor diferențiale de expresie a genei (12). Mecanismele responsabile pentru anomaliile fundamentale dinkeratinocite în timpul cicatricilor keloide și hipertrofice rămâneluziv. Datele noastre au indicat o legătură potențială între remodelarea BM și menținerea funcției keratinocitelor în timpul reparării rănilor și regenerării. Este bine cunoscut faptul că moleculele de adeziune, cum ar fiintegrinele și E-și n-cadherina, ancorează celulele stem la ECM (22). În lumina observațiilor noastre, se pare că BM poate reprezenta o parte a componentelor de niș pentru recrutarea celulelor progenitoare epidermaleîn stratul bazal al epidermei pielii. Rezultatele noastre indică faptul că funcționarea anormală a BM reduce atașarea celulelor bazalprogenitoare la micromediul înconjurător și le induce să adopte un fenotip proliferativ, care poate explica patogeneza cicatricilor (Fig.8).

mulțumiri

acest studiu a fost susținut parțial de granturi de la novel Program de la Beijing (nos. 2008b53 și 2009A38) și theNational Natural Science Foundation din China (nos. 30901564,81101883, 81372067, 81121004 și 81230041) și BasicScience naționale și programul de dezvoltare (programul 973, 2012cb518105).

	Fuchs E și Raghavan S: obținerea subpielea morfogenezei epidermice. Nat Rev Genet. 3:199–209. 2002.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Breitkreutz D, Mirancea N și Nischt R: membrane bazale în piele: structuri matriciale unice cu funcții diverse? Biol De Celule Histochem. 132:1–10. 2009. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Blanpain C și Fuchs E: tulpină Epidermicăcelule ale pielii. Anu Rev Cell Dev Biol. 22:339–373. 2006.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Snippert HJ, Haegebarth A, Kasper M, JaksV, van Es JH, Barker n, van de Wetering M, van den Born m, Beghelh, Vries RG și colab.: lgr6 marchează celulele stem din foliculul de păr caregenerează toate liniile celulare ale pielii. Știință. 327:1385–1389.2010. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Broughton G II, Janis JE și Attinger ce: știința de bază a vindecării rănilor. Plast Reconstr Surg. 117( Suppl7): 12S–34S. 2006. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Bellemare J, Roberge CJ, Bergeron D, Lopez-Vall ca, Roy M și Moulin VJ: epiderma promovează dermafibroza: rol în patogeneza cicatricilor hipertrofice. J Pathol.206:1–8. 2005. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Andriessen MP, Niessen FB, Van de KerkhofPC și Schalkwijk J: cicatrizarea hipertrofică este asociată cuanomalii epidemice: un studiu imunohistochimic. J Pathol.186:192–200. 1998. Vezi Articolul : Google Scholar
	Teepe RG, Kreis RW, Koebrugge EJ,Kempenaar JA, Vloemans AF, Hermans RP, Boxma H, Dokter J, HermansJ, Ponec M și colab.: utilizarea epidermei autologe cultivate întratamentul rănilor extinse de arsură. J Trauma. 30:269–275. 1990.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Funayama E, Chodon T, Oyama a și SugiharaT: keratinocitele promovează proliferarea și inhibă apoptoza fibroblastelor care stau la baza: un rol important în patogeneza keloidului. J Invest Dermatol. 121:1326–1331. 2003. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Lim IJ, Phan TT, Bay BH, Qi R,Huynh H, tan WT, Lee ST și Longaker MT: fibroblaste coculturate cu keloidkeratinocite: fibroblastele normale secretă colagen într-un keloidlikemanner. Am J Physiol Cell Physiol. 283: C212–C222. 2002. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Hahn JM, Glaser K, McFarland KL, Aronowbj, Boyce ST și Supp DM: Keratinocitele derivate din cheloide prezintă un profil de expresie a genelor anabormale în concordanță cu un rol cauzal distinct în patologia keloidă. Repararea Rănilor Regen. 21:530–544. 2013.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Machesney M, Tidman N, Waseem A, Kirby Land Leigh I: keratinocite activate în epidermacicere hipertrofice. Sunt J Pathol. 152:1133–1141. 1998.PubMed / NCBI
	Orazizadeh M, Hashemitabar M, BahramzadehS, Dehbashi FN și Saremy S: Compararea metodelor enzimatice șiexplant pentru cultura keratinocitelor izolate dinpreputul uman. Biomed Rep. 3: 304-308. 2015.PubMed / NCBI
	Su L, Morgan PR și Lane EB: keratina 14și 19 expresie în oralepithelia normală, displazică și malignă. Un studiu care utilizează hibridizarea in situ șiimunohistochimie. J Oral Pathol Med. 25:293–301. 1996.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Michel M, T-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X-X: Keratina 19 ca biochimicmarker al celulelor stem ale pielii in vivo și in vitro: keratina 19celulele expresive sunt localizate diferențiat în funcție de situsurile anatomice, iar numărul acestora variază în funcție de vârsta donatorului și de vârsta culturală. J Cell Sci. 109:1017–1028. 1996.PubMed / NCBI
	Khanom R, Sakamoto K, Pal SK, Shimada Y,Morita K, Omura K, Miki Y și Yamaguchi a: expresia celulei bazalekeratina 15 și keratina 19 în neoplasmele scuamoase orale reprezintădiverse fiziopatologii. Histol Histopatol. 27:949–959.2012.PubMed / NCBI
	Fuchs E: celulele stem ale pielii: ridicându-se la suprafață. J Cell Biol. 180:273–284. 2008. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Yeh YC, Lin HH și Tang MJ: o poveste despre doi receptori ai colagenului, integrina inkts1 și receptorul domeniului discoidin 1, diferențierea celulelor inepiteliale. Am J Physiol Cell Physiol.303: C1207-C1217. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Borowska K, Jedrych B, Czerny k andZabielski S: Rolul integrinelor în fiziologia șiprocese patogene. Pol Merkur Lekarski. 21:362–366. 2006.Articol În Poloneză.
	Lane SW, Williams da și Watt FM: modularea nișei celulelor stem pentru regenerarea țesuturilor. NatBiotechnol. 32:795–803. 2014. Vizualizarearticol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Breitkreutz D, Koxholt I, Thiemann K șinischt R: membrana bazală a pielii: fundamentul funcțiilor epidermalintegrity – BM și rolurile diverse ale moleculelor de punținidogen și perlecan. Biomed Res Int. 2013(179784)2013. Vizualizare articol: Google Scholar
	Timpl R și maro JC: Supramolecularassembly membranelor de subsol. Bioesays. 18:123–132. 1996.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Hennings H, Michael D, Cheng C, SteinertP, Holbrook K și Yuspa sh: reglarea calciului de creștere șidiferențierea celulelor epidermice de șoarece în cultură. Celula.19:245–254. 1980. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Hennings H și Holbrook KA: Calciureglarea contactului celular-celular și diferențierea epidermicăcelule în cultură. Un studiu ultrastructural. Exp Cell Res. 143: 127-142. 1983. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Burgeson RE și Christiano AM: joncțiunea dermal-epidermică. Biol De Celule Curr Opin. 9:651–658. 1997.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	LeBleu VS, Macdonald B și Kalluri R: structura și funcția membranelor subsolului. Exp Biol Med (Maywood). 232:1121–1129. 2007. Vezi Articolul : Google Scholar
	Iozzo RV: proteoglicani cu membrană de subsol: de la pivniță la tavan. Nat Rev Mol Cell Biol. 6:646–656. 2005.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Werner s, Krieg T și Smola H: interacțiuni Keratinocitare-fibroblaste în vindecarea rănilor. J InvestDermatol. 127:998–1008. 2007. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Moulin V, Castilloux G, Auger FA, GarrelD, O ‘ Connor-McCourt M și Germain L: Răspunsul modulat la citokine ale miofibroblastelor de vindecare a rănilor umane comparativ cu fibroblastele dermice. Exp Cell Res. 238: 283-293. 1998. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Gabbiani G, Ryan GB și Majne G: prezența fibroblastelor modificate în țesutul de granulare și posibilul lor rol în contracția plăgii. Experientia. 27:549–550. 1971.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI