International Journal of Molecular Medicine

Bevezetés

a bőr fizikai és kémiai akadályként szolgál a belső test és a külső környezet között, amely mezodermális eredetű mögöttes dermisből és ektodermális eredetű, átfedő epidermiszből áll. Bár ez a két réteg különböző funkciókat lát el, különböző módokon és különböző szinteken kommunikálnak. A bőr létfontosságú gátfunkcióját elsősorban a felső rétegzett epidermisz biztosítja, amely proliferáló bazális és differenciált suprabasalis keratinocitákból áll (1). Ezeknek a funkcióknak a teljesítéséhez a bazális réteg őssejtjei képesek önmegújulniaz egész életen át, és olyan leánysejteket termelnek, amelyek differenciálódáson mennek keresztül (2). Így a bazális keratinociták proliferációja és differenciálódása közötti egyensúly elengedhetetlen az epidermális integritáshoz, és biztosítja a szövetek megújulását, amely szükséges a normál fiziológiai funkciók teljesítéséhez. A szöveti homeosztázis fenntartása mellett az epidermiszben és a szőrtüszőkben található őssejtek is részt vesznek a sérülés utáni epidermisz helyreállításában (3,4).a bőrben a sebgyógyulás különböző fázisai dinamikusan fejlődnek kölcsönhatások az epidermális sejtek, a dermális sejtek és a csontsejtekből származó sejtek között. A keratinociták képviselik az első sorta test védelme a külső környezettel szemben. Ezért ők az első válaszadók a sérülésekre. A gyulladásos citokinek felszabadulásával és a kollagén rostok összehúzódásával a bazális epidermális keratinociták aktiválódnak, és a sebterületre vándorolnak, ahol szaporodnak és differenciálódnak, amíg a szövet sejttartalma meg nem újul (5). Számos megfigyelés vanazt javasolta, hogy az epidermisz hatással van akután hegek (6,7). Égési betegeknél hipertrófiás hegek gyakrabban fordulnak elő,amikor a sebek másodlagos szándékkal gyógyulnak, míg a korai bőrátültetés úgy tűnik, hogy elnyomja a hegképződést(8). Funayama et aldembizonyította, hogy a keloid eredetű fibroblasztok a keloid eredetű keratinocitákkal együtt tenyésztettek szignifikánsan proliferatívabbak és ellenállóbbak voltak az apoptózissal szemben, mint a normál bőrből származó keratinocitákkal együtt tenyésztettek (9).hasonló társkultúrarendszerben azt találták, hogy a keloid eredetű keratinociták elősegítették a megnövekedett kollagéntermelést, valamint a normál fibroblasztok fokozott proliferációját (10). Különösen a keloid eredetű keratinocitákról kimutatták, hogy a DNS-replikációhoz nélkülözhetetlen hiszton gének megnövekedett expresszióját mutatják, összehasonlítva a normál sejtek expressziós szintjével, és a hipertrófiás hegek epidermiszében lévő keratinociták alternatív differenciálódási útba léptek, és proliferatív fenotípust fejeztek ki (11,12). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a keratinociták proliferációja és differenciálódása közötti egyensúly a hegszövetekben szabályozatlan, és hogy a keratinociták alapvető rendellenességei fontosabb szerepet játszhatnaka bőr regenerációjában és patogenezisében, mint azt korábban értékelték.

ebben a vizsgálatban a normál, sebszél-és hipertrófiás hegszöveteket nyerték és elemezték a morfológiai és immunfluoreszcens módszerek alkalmazásával, hogy megvizsgálják a morfológiai különbségeket, valamint az epidermális regeneráció során a keratin expressziós profilokat. Az eredményeink azt mutatták, hogy az epidermalkeratinocyták keratin expressziós profiljában a normál, a sebszél és a hipertrófiás hegszövet eltérése volt, ami megfelelt az alapmembrán (BM) szerkezetének rendellenességeinek. A Bmkomponensek elleni antitestek paneljének felhasználásával megerősítettük hipotézisünket, és megállapítottuk, hogy a Bmpozitív szabályozója volt a prekurzorszerű sejtek toborzásának az epidermisz bazális rétegében. Adataink azt mutatjáka BM szerkezetében bekövetkező változások elősegítik a bazális keratinocitákatproliferatív fenotípus elfogadása mind in vivo, mind invitro.

anyagok és módszerek

szövetminták

hipertrófiás hegszövet (4 nőstény és 3 hím; életkor: 18-40 év) és sebszélszövet (3 nőstény és 5 hím;életkor: 18-40 év) mintákat vettek olyan betegektől, akik korábban rekonstruktív égési műtéten estek át. Normál bőrszövet (4females és 3 férfi; korosztály, 18-40 év) mellett a scarexcision műtét során használták, mint a kontroll. A fityma isa körülmetélésen átesett férfiakból származik (10 férfi; korosztály,18-20 év). Jelen tanulmányt a kínai PLA általános kórház etikai bizottsága hagyta jóvá (Peking, Kína), ésírásos beleegyezést kaptak minden személytől, mielőtt megkapták a mintákat.

immunfluoreszcens festés

normál bőr, sebél és hipertrófiás hegszövetmintákat rögzítettünk 10% – os pufferolt formalinban, dehidratálva keresztül etanol oldatok megnövekedett koncentrációval egymás után, végül beágyazva paraffinba. A paraffinba ágyazott szöveteket 4-6m vastag részekre vágták, hogy hematoxilinnel és eozinnal (H&E), Masson trikrómjával és meténamin ezüsttel (mindez Zhongshan Golden Bridge-ből, Pekingből,Kínából) festhessék. A képeket optikai mikroszkóppal készítették (BX53;Olympus, Tokió, Japán). Az immunfluoreszcens festés elvégzéséhez a szekciókat 4% paraformaldehidben rögzítettük 30 percig, majd 0,2% Triton X-100-ban (T8787; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) foszfát-pufferelt sóoldatban (PBS) 10 percig. A szekciókat elsődleges anti-testtel inkubáltuk 4CC-n éjszakánként, majd másodlagos antitestekkel 2 órán át szobahőmérsékleten. A következő elsődleges anti-testeket használtuk: egér anti-humancytokeratin (CK)10 (1:200, ab111447) és nyúl anti-human CK14(1:200, ab7800) (mindkettő Abcam, Cambridge, MA, USA), rabbitanti-human CK5 (1:200, ZA-0518; Zhongshan Goldenbridge, Peking,Kína), egér anti-human CK19 (1:200, ab53119; abcam), nyúlanti-humán integrin-61 (1:200, pb0063; Boster, Wuhan, Kína); egéranti-humán integrin-64 (1:200, ab128068; Abcam), egér anti-humanaminin (1:200, ZM-0181; Zhongshan Goldenbridge), nyúl anti-humanaminin-5(1:200, ab14509; Abcam) és egér anti-humán kollagén IV (1:200, ZM-0081; Zhongshan Goldenbridge). A következő másodlagos antitesteket használták: Alexa-Fluor 488-konjugált anti-egér (1:200,ab150117) és Alexa-Fluor 594-konjugált anti-nyúl (1: 200, ab150080) (mindkettő Abcam-ból). A magokat dapi-val festettük (H-1200; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA).Az immunfluoreszcens képeket konfokális lézerscanning mikroszkóppal készítettük (SP8; Leica, Solms, Németország).

sejttenyészet és kezelés

az elsődleges humán epidermális keratinocitákat (HEKs) a hím előbőrből izolálták a korábban leírtak szerint (13), kisebb módosításokkal. A humanimmortalizált keratinocita (HaCaT) sejteket a sejtvonal erőforrásainak kínai Infrastruture-jéből vásárolták (3111c0001ccc000373;Peking, Kína). Mind a HEKs, mind a HaCaT sejteket epilife közegben inkubáltuk (M-EPI-500-CA; Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) kiegészítve 0,06 mM Ca2+, 1% EpiLife által meghatározott növekedési kiegészítéssel (S-001-5; Invitrogen LifeTechnologies) és 1% penicillin/sztreptomicin (P1400; Solarbio,Peking, Kína). A BM szerepének vizsgálata a keratinocita viselkedés szabályozásában in vitro, a HEKs és a HaCaT sejteket 60 mm-es, MaxGel ECM-Mel (E0282) és IV-es típusú kollagénnel (C7521) vonták be (mindkettő Sigma-Aldrich-től).Ca2 + kezelés esetén a sejteket 1,5 mM Ca2+ – val kiegészített Epilifemediumban inkubáltuk 0, 12 és 24 órán keresztül.A MaxGel ECM humán extracelluláris mátrix (ECM) komponenseket tartalmaz, beleértve a kollagéneket, laminint, fibronektint, tenaszcint és elasztint, valamint számos proteoglikánt és glikozaminoglikánt. A Ca2+ – val nem kezelt cellákat kontrollként használtuk.

reverz transzkripció-Kvantitatív (valós idejű) PCR (RT-qPCR)

a teljes RNS-t izoláltuk a sejtekből, miután azokat különböző kezeléseknek vetettük alá TRIzol reagenssel(15596-026; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), majd a cDNS-t goscript reverz transzkriptáz (A5001; Promega, Madison, WI, USA) a gyártó utasításainak megfelelően. A QPCR reakciókat a Gotaq qPCR Master Mix (A6001; Promega) segítségével hajtották végre egy ABI 7500 valós idejű PCR rendszer és szoftver segítségével (Applied Biosystems, Foster City,CA, USA). A reakcióprotokoll a következő ciklusokból állt: 95-15 mp-re, 55-30 mp-re, és 72-30 mp-re, 40 PCR-amplifikációs ciklusra.

Western blot analízis

Összfehérjét izoláltunk a sejtekből, és 20 GB fehérjét oldottunk szubsztrátban oldható pufferben. A fehérjéket ezután SDS-PAGE-vel elválasztották, és ontopolyvinilidén-difluorid (PVDF) membránokat (IPFL00010; Millipore,Billerica, MA, USA) vittek át. A blokkolás után a blotokat az elsődleges antitestekkel teszteltük egy éjszakán át, 4-nél 6CC (C). a nyugati blot analízishez használt antitestek a következők voltak:CK10(1:1000, ab111447), CK14 (1:500, ab7800), CK19 (1: 500, ab53119), integrin-64 (1:500, ab128068) és egér anti-humán (1:5000, ab6276) antitest(mind Abcam). Mosás után a membránokat inkubáltukmásodlagos antitestek, amelyek kecske anti-nyúl és goatanti-egér IgG konjugáltak a torma peroxidázhoz (sc-2004,1:1000; sc-2005, 1:1000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA,USA). Az immunreaktív sávokat az enhancedchemiluminescence (ECL) kit (PE-0010-100; Solarbio, Peking, Kína)segítségével detektálták, és az ImageQuant LAS 4000 rendszerrel (ge HealthcareBio-Sciences, Pittsburgh, USA).

statisztikai elemzés

minden kísérletet legalább 3 alkalommal megismételtünk,hacsak másként nem jeleztük. Az adatok a következők szerint vannak feltüntetve: átlag (SD). Statisztikai elemzést végeztünkspss 20.0 szoftver. Az adatok összehasonlítását az independent Student T-teszt és az egyirányú ANOVA, majd az LSDtest segítségével végeztük. A <0,05 P-érték statisztikailag jelentős különbséget jelez.

eredmények

morfológiai különbségek a normál,a seb szélén és a hipertrófiás hegszövetekben

a bőr sebjavítása pontos átalakítási folyamat,amely klasszikusan négy egymást átfedő fázisra oszlik, és számos különböző szövet és sejtvonal kölcsönhatását foglalja magában (5). Krónikus sebek esetén azonban a normális gyógyulási folyamat megszakad, ami a gyulladás kóros ciklusában és a proteáz felszabadulásában következik be, ami kóros heg kialakulásához vezet. Ebben a vizsgálatban a regeneráló epidermiszben a bőr sebgyógyulása során bekövetkező morfológiai változások értékelésére normál,sebes és hipertrófiás hegszövetek mintáit nyerték a H&e rutin elvégzése és a Masson trichróm festése érdekében. A normál bőrmintákban a bőr szövettani szerkezete látható volt, az epidermisz és a dermis rétegeit mutatva. Az epidermisz 4-5 réteget tartalmazott, amelyekben a keratinociták differenciálódtak ésfokozatosan érlelődtek spinos sejtekké, szemcsés sejtekké és cornifiedsejtekké a kifelé való áthaladás során (ábra. 1A). Sőt, az alapjaidermiszben a fibroblasztok laza kötőszövetet alkottak, amely gazdag voltpárhuzamosan kollagénszálak (ábra.1D). A sebszél körüli szövetekben azonban az epidermis elszaporodott; több különböző morfológiájú keratinocita rétegből állt, láthatóan megnövekedett Vastagsággal (ábra. 1B és E). Az epidermis és a dermis ujjszerű nyúlványokon(úgynevezett rete gerinceken) keresztül kapcsolódott össze, ami megnövelte az epidermisz és a dermis közötti érintkezési felületet. Mind a normál, mind a sebzett szövetekben a bazális keratinocitákat regimentedsingle rétegként rendeztük el kuboidális vagy alacsony oszlopos sejtekből, amelyek a fenti spinous sejtrétegekhez kapcsolódtak (ábra.1A és B). A hipertrófiás hegszövet szövettani szerkezete gazdag vérellátással és vastag epidermális réteggel különbözött a normál bőrszövetétől (ábra. 1C és F). A dermis nagyrészt sűrű, rendezetlen kötőszövetből állt, amely magában foglalja a szabálytalan alakú, nagyobb átmérőjű, vastag kollagénszálakat (ábra). 1F). A normál,sebszél és hipertrófiás hegszövetek szövettani szerkezetében mutatkozó különbségek további tisztázása érdekében meténamin ezüstfestést végeztünk a BM kialakulásának felmérésére, amely azt jelezte, hogy a BM szerkezete kimutatható a normál és a sebszél szöveteiben (ábra. 1 g és H). A hegszövetekben azonban a BM festés hiányzott (ábra.1I).

különbségek az epidermális keratinocitákban a sejtmarkerek expressziójában a normál, sebszél és hipertróf hegszövetekben

tekintettel a normál, sebszél és hipertróf hegszövetekben megfigyelt morfológiai különbségekre,megvizsgáltuk, hogy a bazális keratinociták eltérő-e a sejtek viselkedése a hegképződés során. Kezdetben immunfluoreszcens festést végeztünk a ck10, CK14,CK5, CK19 és integrin-61 expressziójának kimutatására a normál, sebszél és a szövetrészekben. Korábbi tanulmányok igazolták, hogy a CK10 a differenciált keratinociták markere, hogy a CK14 és a CK5 a proliferáló bazális keratinociták vagy TAs markerei, és hogy a CK19 az epidermális progenitor sejtek vagy őssejtek aputatív markere a bőrben (14-17). Úgy gondolják, hogy az Integrin-61 a bőr prekurzor sejtjeinek amarkerje is (18,19). Eredményeink azt mutatták, hogy a CK10-et az epidermisz külső rétegében fejezték ki a normál andwound edge szövetekben (ábra. 2A ésB), valamint a suprabasalis, terminálisan differenciáló sejtekbena hipertrófiás hegszövet epidermiszében (ábra. 2C). A CK14 mind a basalis, mind a suprabasalis rétegekben expresszálódott az összes rétegzett epidermiszbenhárom Szövet (ábra. 2D-F), ésa ck14 széles körű eloszlása volt a hegszövet többrétegűdepidermisében (ábra.2F). A ck5 eloszlási mintája hasonló volt az ofCK14-hez (ábra. 2G-I), amely a proliferáló sejtek számának növekedését jeleztea hiperproliferatív epidermiszben. Az Integrin-61 és CK19 a normál epidermisz bazális rétegében fejeződött ki (ábra. 2J és M), valamint a bazális ésszupra-bazális réteg a seb szélén epidermisz (ábra. 2K és N), de nem volt kimutathatóa hipertrófiás hegszövetek epidermiszében (ábra. 2L és O). Összességében ezek a megfigyelések azt mutatják, hogy a bazalkeratinociták keratin expressziós profilja különbözött a normál, sebél éshipertrófiás hegszövetek között. Bár kevesebb CK19-expresszáló sejtet detektáltak a hipertrófiás hegszövet bazális és szuprabasalis rétegeiben (ábra.2P), proliferatív fenotípust mutattak ki a CK14 és CK5 fokozott expressziója miatt a többrétegű epipidermiszben.

a megváltozott BM szerkezet hozzájárul a differenciál keratin expressziós profilhoz epidermális keratinocitákbanin vivo

az őssejt-rés kulcsfontosságú összetevőjeként az ECM nemcsak horgonyozza az őssejteket, hanem irányítja azok sorsát is (20). Mint fentebb említettük, a BM histológiai szerkezete úgy tűnt, hogy hiányzik ahipertrófiás hegszövetmintákban. Tekintettel a keratin expressziós profilok különbségeire a normál, sebes és hipertrófiás heg epidermisz bazális rétegében, akkor azt feltételeztük, hogy a BM szerkezeti rendellenességei szerepet játszanak a bazális keratinociták sejt sorsának szabályozásában a sebgyógyulás során. Ennek a hipotézisnek a vizsgálatához immunfluoreszcens festést végeztünkhogy a BM komponenseit normál, sebszélben és hipertrófiás hegszövetmintákban jelenítsük meg. Eredményeink azt mutatták, hogycollagen IV expressziót detektáltunk a BM területen mind normál (ábra. 3a) és a seb szélén(ábra. 3B) szövetek. Azonban ABM-szerű struktúrák kialakulása kollagén hiányában Ivexpressziót figyeltek meg a hipertrófiás hegszövetek epidermiszében (ábra. 3C). Bár a laminin expresszióját mindhárom szövettípusban kimutatták (ábra. 3D-F), a laminin-5 és receptorának integrin-64 kettős címkézése tovább igazolta megfigyelésünket, hogy a BM szerkezete megváltozott a hipertrófiás hegszövetek epidermisében; mind a laminin-5, mind az integrin-64 negatív festése (ábra.3I és 4G-I) volt megfigyelhető, mintösszehasonlítva, hogy a normál (ábra. 3G és 4A-C) és sebszél szövetek (ábra. 3H és 4D-F). E megállapítások alapján valószínű, hogy a normál BM hozzájárult az integrin-61-és CK19-expresszáló sejtek toborzásához a normál és a sebszélű epidermisz bazális rétegében. A BM szerkezetének rendellenességei azonban arra késztették a bazális keratinocitákat, hogy megkülönböztessék és átvegyék az aproliferatív fenotípust a hegpatogenezis során.

a megváltozott BM szerkezet elősegíti az epidermalkeratinocyták proliferatív fenotípus felvételét in vitro

a BM által nyújtott mechanikai támaszt elsősorban a IV-es típusú kollagén állvány (21) határozza meg, amelybe a lamininhálózatokat és a perlecan oligomereket a térhálósító nidogének integrálják, hogy végül összeállítsák a lapszerű BM komplexet (22). A BM szerepének további tisztázása az epidermális keratinocita viselkedés szabályozásában, az emberi BM kivonatból származó ECM-et használtuk a tenyésztési edények bevonására a sejt-mátrix adhézió mintázatának szabályozása érdekében. Amint inFig. 5, ECM administrationresulted in the upregulation of integrin-64 kifejezés a HEKs (ábra. 5A) és a HaCaT (ábra. 5B) sejtek, amelyek aplazmamembránon és a sejtmátrix kötődésének helyén voltak jelen. Western blot elemzést is készítettünk az epidermális sejtvonalakban lévő integrin-64 fehérje szintjének vizsgálatára ECMcoating vagy anélkül. Adataink azt mutatják, hogy az ECM-Mel kezelt csoportokban magasabb integrin-64 szint volt kimutatható, mint a kontrollcsoportokban,ami tovább erősítette a fluoreszcens immunfestő eredményeket (ábra. 5C). Ezenkívül a HEKs andacat sejteket 1,5 mMCa2+ tartalmú táptalajra kapcsoltuk a megadott időtartamokra, hogy a korábban leírtak szerint differenciáló epidermális sejteket generáljunk (23,24). A Ca2 + kezelést követően mindkét hek morfológiai változásai (ábra. 6a) és HaCaT sejtek (ábra. 6B) egy fénymikroszkóp alatt figyelték meg, amely magában foglalta a sejtek megnagyobbodását és ellaposodását.Ca2+ indukálta a CK10 expresszióját (ábra. 5D, G és J, és 6C és D) és CK14 (ábra. 5e, H és J, valamint 6C és D) időfüggő módon inepidermális sejtvonalak mindkét mRNS-nél (ábra. 5D, E, G és H, és 6C és D) és fehérje (ábra. 5J) szintek, a ck10 és a CK14 expresszió csúcsszintjét 24 órával figyelték meg az 1,5 mMCa2+ kezelés megkezdése után a HEKs-ben (ábra. 5D, E és J és 6C) és a HaCaT sejtek (ábra. 5G, H és J és 6D). A Ca2 + kezelést követően a CK19 expressziója csökkent a HEKs-ben, elérve a legalacsonyabb szintet 24 órával a Ca2+ kezelés megkezdése után(ábra. 5F és J és 6C). Hasonló eredményeket figyeltek meg ahacat sejtek(füge. 5I és J és 6D). Az ECM-kezelés azonban csökkentette a Heks-és HaCaT-sejtekben a Ca2+ – hoz kapcsolódó keratinocyták differenciáló válaszreakcióit, és fokozta a CK19 expresszióját 12 óra és 24 óra utánca2+ kezelés (ábra. 5F, iés J). A BM potenciális szerepének további meghatározásaaz epidermális keratinocita viselkedés szabályozásában, a IV típusú kollagénbm-szerű szerkezet kialakítására használták in vitro. A kollagén IVtreatment hozzájárult a CK19 expressziójához, és csökkentette a CK10 és CK14 expresszióját az mRNS és a fehérje szintjén mindkét hek-ben (ábra. 7A-C és G) és a Hacatcellák (ábra. 7D-F és G). Ezek az eredmények tovább igazolták in vivo megállapításainkat, miszerint a Bmappozitív szabályozónak tűnik a prekursor-szerű sejtek toborzásában az epidermisz bazális rétegében.A BM szerkezetében bekövetkezett változások elősegítették az aproliferatív fenotípus kialakulását a bazális keratinocitákban, amint azt a sejtproliferációval kapcsolatos markerek, például a CK14 és a CK5 fokozott expressziója jelzi.

megbeszélés

jelen tanulmányban először a sebgyógyulási folyamat epidermális regenerációja során bekövetkező morfológiai változásokat vizsgáltuk. Adataink azt mutatták, hogy a hipertrófiás hegszövetek hisztológiai szerkezete eltér a normál bőrszövetekétől, a bazális réteg és a szaruhártya közötti epidermális vastagság jelentős növekedése figyelhető meg. Nevezetesen úgy tűnt, hogy a BM festése hiányzika hegszövetben. Ezenkívül a CK10,CK14, CK5, CK19 és integrin-61 immunfluoreszcens festése azt mutatta, hogy a bazális keratinocita markerek differenciális expressziója különbözött a normál, sebszél és hipertrófiás hegszövetek mintái között, továbbá a hipertrófiás hegszövet epidermisze proliferatív fenotípust mutatott azáltal, hogy az integrin-61 és ck19 expresszióját CK14 és CK5-re, a sejtproliferáció markereire cserélte a többrétegű epidermiszben. Ezeket a megállapításokat figyelembe véve tehát feltételeztük, hogy a BM szerepet játszik az epidermális keratinociták sejt sorsának szabályozásában a seb során healing.By a BM komponensekhez kapcsolódó antitestek paneljének felhasználásával mimegerősítette hipotézisünket, miszerint a BM szerkezete megváltozott a hipertrófiás hegszövetekben. Eredményeink azt mutatták, hogy a BMC hozzájárult a ck19-expresszáló sejtek toborzásához a normál és a seb szélén lévő epidermisz alaprétegében, ahol a BM szerkezetének rendellenességei miatt a bazalkeratinociták differenciálódtak és proliferatív fenotípust fogadtak el a hegpatogenezis során. Az ECM és a collagen IV használatával in vitro utánoztuk a BM szerkezetét, megerősítettük az invivo megfigyeléseinket, és megmutattuk, hogy a BM csökkentette a keratinociták differenciálódó válaszait, amelyeket a Ca2+ beadása indukált az epidermális sejtvonalakban, és fokozta a ck19 expresszióját, amely az epidermálisprogenitor sejtek feltételezett markere.

a BM alapvető szerepet játszik a sejtek differenciálódásában, proliferációjában, túlélésében és migrációjában az embrionális fejlődés során. A bőrben a BM fizikailagelválasztja az epidermist az alatta lévő dermisből. Az epidermiszben lévő bazalkeratinociták az alapul szolgáló BM-hez kapcsolódnak azintegrineken keresztül, amelyek bizonyos BM komponensekhez,például kollagénhez, lamininhez és fibronektinhez kötődnek (25).Így a BM nem csak szelektív gátként és strukturáliskaffoldként szolgál, hanem kommunikációs interfészt is biztosít a hermális fibroblasztok és az epidermális keratinociták között (2,26).A BM számos citokinhez és növekedési faktorhoz is kötődik, amelyek tartályként szolgálnak szabályozott felszabadulásukhoz, amely szabályozza a keratinocita-fibroblaszt kölcsönhatásokat a bőr fejlődésének, valamint a sebgyógyulásnak a elősegítése érdekében (27,28). A hegképződéssel kapcsolatos korábbi tanulmányok elsősorban a fibroblasztokra összpontosítottak, és keveset tudunk a fedő epidermális keratinociták teroljáról (29,30). Egyre több bizonyíték van arra, hogya keratinociták fontos szerepet játszhatnakpatológiai fibrózis a fibroblasztfunkció parakrin szabályozásán keresztül (6,9,10).azt is kimutatták, hogy a hegszövetekből származó keratinociták különböztek a normál keratinocitáktól a differenciális geneexpressziós profilok bemutatásával (12). Az alapvető rendellenességekért felelős mechanizmusokkeratinocyták a keloid és a hipertrófiás hegesedés során továbbra is tolakodó. Adataink potenciális kapcsolatot jeleztek a BM átalakítása és a keratinocita funkció fenntartása között a sebjavítás és a regeneráció során. Jól ismert, hogy az adhéziós molekulák, mint példáulintegrinek és E – és N-kadherin, az őssejteket az ECM-hez rögzítik (22). Megfigyeléseink fényében úgy tűnik, hogy a BM a bőr epidermiszének bazális rétegében lévő epidermális progenitor sejtek toborzására szolgáló összetevők részét képezheti. Eredményeink azt mutatják, hogy a BM rendellenes működése csökkenti a bazalprogenitor sejtek kötődését a környező mikrokörnyezethez, és proliferatív fenotípus felvételére ösztönzi őket, ami a hegesedés patogenezisét okozhatja (ábra.8).

Köszönetnyilvánítás

ezt a tanulmányt részben a pekingi regényprogram (2008b53 és 2009a38), valamint a kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány (30901564,81101883, 81372067, 81121004 és 81230041), valamint a Nemzeti alaptudomány fejlesztési program (973 program, 2012cb518105).

	Fuchs E és Raghavan S: az epidermális morfogenezis bőrének alá kerülése. Nat Rev Genet. 3:199–209. 2002.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Breitkreutz D, Mirancea N és Nischt R: Alapmembránok a bőrben: egyedi mátrixszerkezetek változatos funkciókkal? Hisztochem Sejt Biol. 132:1–10. 2009. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Blanpain C és Fuchs e: a bőr epidermális szársejtjei. Annu Rev Cell Dev Biol. 22:339–373. 2006.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Snippert HJ, Haegebarth A, Kasper M, JaksV, van Es JH, Barker N, van de Wetering M, van Den született M, BegthelH, Vries RG, et al: az Lgr6 olyan őssejteket jelöl a szőrtüszőben, amelyek a bőr összes sejtvonalát generálják. Tudomány. 327:1385–1389.2010. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Broughton G II, Janis JE és Attinger CE:a sebgyógyítás alapvető tudománya. Plast Reconstr Surg. 117 (Suppl7): 12S–34S. 2006. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Bellemare J, Roberge CJ, Bergeron D, Lopez-Vall Ca, Roy M és Moulin VJ: az epidermisz elősegíti a dermalfibrosist: szerepe a hipertrófiás hegek patogenezisében. J Pathol.206:1–8. 2005. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Andriessen MP, Niessen FB, Van de KerkhofPC és Schalkwijk J: hipertrófiás hegesedés társulepidermális rendellenességek: immunhisztokémiai vizsgálat. J Pathol.186:192–200. 1998. Cikk Megtekintése : Google Scholar
	Teepe RG, Kreis RW, Koebrugge EJ, Kempenaar JA, Vloemans AF, Hermans RP, Boxma H, Dokter J, HermansJ, Ponec M, et al: tenyésztett autológ epidermisz alkalmazása kiterjedt égési sebek kezelésében. J Trauma. 30:269–275. 1990.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Funayama E, Chodon T, Oyama A és SugiharaT: a keratinociták elősegítik a proliferációt és gátolják az alulfekvő fibroblasztok apoptózisát: fontos szerepet játszanak a keloid patogenezisében. J Invest Dermatol. 121:1326–1331. 2003. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Lim IJ, Phan TT, Bay BH, Qi R, Huynh H, Tan WT, Lee ST és Longaker MT: Keloidkeratinocitákkal kókusz fibroblasztok: a normál fibroblasztok kollagént választanak ki keloidlikemannerben. Am J Physiol Sejt Physiol. 283:C212-C222. 2002. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Hahn JM, Glaser K, McFarland KL, AronowBJ, Boyce ST és Supp DM: A Keloid eredetű keratinociták anabnormális génexpressziós profilt mutatnak, amely összhangban áll a keloid patológiában különálló ok-okozati szereppel. Seb Javítás Regen. 21:530–544. 2013.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Machesney M, Tidman N, Waseem A, Kirby Land Leigh I: aktivált keratinociták az epidermiszbenhipertrófiás hegek. J Pathol Vagyok. 152:1133–1141. 1998.PubMed / NCBI
	Orazizadeh M, Hasemitabar M, BahramzadehS, Dehbashi FN és Saremy S: Az enzimatikus ésimplantációs módszerek összehasonlítása a keratinociták tenyésztéséreemberi fityma. Biomed Rep. 3:304-308. 2015.PubMed / NCBI
	Su L, Morgan PR és Lane EB: Keratin 14 és 19 expresszió normál, diszpláziás és rosszindulatú oralepithelia esetén. In situ hibridizációt ésimmunhisztokémia. J Oral Pathol Med. 25:293–301. 1996.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Michel M., T. O., Godbout M. J., Lussier M., Gaudreau P., Royal A. és Germain: Keratin 19, mint a bőr őssejtjeinek biokémiai markere in vivo és in vitro: a keratin 19 expresszáló sejtek differenciálisan lokalizálódnak az anatómiai helyek függvényében, és számuk a donor életkorától és kultúrájától függően változik. J Cell Sci. 109:1017–1028. 1996.PubMed / NCBI
	Khanom R, Sakamoto K, Pal SK,Shimada Y, Morita K, Omura K, Miki Y és Yamaguchi a: a bazális sejtek expressziója a keratin 15 és a keratin 19 orális laphámsejtekben különböző patofiziológiákat képvisel. Histol Histopathol. 27:949–959.2012.PubMed / NCBI
	Fuchs E: Bőr őssejtek: emelkedik afelszínre. J Sejt Biol. 180:273–284. 2008. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Yeh YC, Lin HH és Tang MJ: két kollagén receptor története, integrin 61 és discoidin domén receptor 1, inepithelialis sejtdifferenciálás. Am J Physiol Sejt Physiol.303: C1207-C1217. 2012. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Borowska K, Jedrych B, Czerny K andZabielski S: Az integrinek szerepe a fiziológiai éspatogén folyamatok. Pol Merkur Lekarski. 21:362–366. 2006.Cikk Lengyelül.
	Lane SW, Williams DA és Watt FM: Az őssejt-fülke modulálása a szövetek regenerálásához. NatBiotechnol. 32:795–803. 2014. ViewArticle: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Breitkreutz D, Koxholt I, Thiemann K ésnischt R: bőr alapmembrán: az epidermálisintegritás alapja – BM funkciók és az áthidaló molekulák különböző szerepeinidogén és perlecan. Biomed Res Int. 2013(179784)2013. Cikk megtekintése: Google Scholar
	Timpl R és barna JC: Supramolekularassembly alapmembránok. BioEssays. 18:123–132. 1996.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Hennings H, Michael D, Cheng C, SteinertP, Holbrook K és Yuspa SH: A növekedés Kalciumszabályozása és az egér epidermális sejtjeinek differenciálódása a tenyészetben. Cella.19:245–254. 1980. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Hennings H és Holbrook KA: A sejt-sejt kapcsolat kalciumszabályozása és az epidermális sejtek differenciálódása a tenyészetben. Ultrastrukturális tanulmány. Exp Cella Res. 143:127-142. 1983. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Burgeson RE és Christiano AM: Thedermális-epidermális csomópont. Curr Opin Sejt Biol. 9:651–658. 1997.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	LeBleu VS, Macdonald B és Kalluri R: az alagsori membránok szerkezete és funkciója. Felh.: Biol Med(Maywood). 232:1121–1129. 2007. Cikk Megtekintése : Google Scholar
	Iozzo RV: alapmembrán proteoglikánok: a pincétől a mennyezetig. Nat Rev Mol Sejt Biol. 6:646–656. 2005.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Werner S, Krieg T és Smola H: keratinocita-fibroblaszt kölcsönhatások a sebgyógyulásban. J InvestDermatol. 127:998–1008. 2007. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Moulin V, Castilloux G, Auger FA, GarrelD, O ‘ Connor-McCourt M és Germain L: Modulált válaszaz emberi sebgyógyító myofibroblasztok citokinjei a dermalfibroblasztokhoz képest. Exp Cella Res. 238:283-293. 1998. Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI
	Gabbiani G, Ryan GB és Majne G: módosított fibroblasztok jelenléte a granulációs szövetben és lehetséges szerepük a seb összehúzódásában. Experientia. 27:549–550. 1971.Cikk megtekintése: Google Tudós: PubMed / NCBI