aan te nemen International Journal of Molecular Medicine

Inleiding

de huid dient als de fysische en chemische Barrier tussen het inwendige lichaam en de buitenomgeving, die bestaat uit een onderliggende dermis van mesodermale oorsprong en een overlagende epidermis van ectodermale oorsprong. Hoewel deze twee lagen verschillende functies vervullen, communiceren ze op verschillende manieren en op verschillende niveaus. De vitale barrièrefunctie van de huid wordt in de eerste plaats geleverd door zijn gestratificeerde opperhuid, bestaande uit prolifererende basale en gedifferentieerde suprabasale keratinocyten(1). Om deze functies te voltooien,zijn stamcellen in de basale laag in staat zichzelf te vernieuwen door het hele leven heen en produceren ze dochtercellen die differentiatie ondergaan (2). Zo is het evenwicht tussen de verspreiding en differentiatie van de basale keratinocyten essentieel voor epidermale integriteit, en het zorgt voor het optreden van tissue vernieuwing die nodig is om normale fysiologischefuncties te voltooien. Naast het handhaven van weefselhomeostase, stamcellen die in de epidermis en haarfollikelen verblijven ook deelnemen aan de reparatie van de epidermis na verwonding (3,4).in de huid, verschillende fasen van wondgenezing evolueren in dynamische interacties tussen epidermale cellen, huidcellen en botmarrow-afgeleide cellen. Keratinocyten vertegenwoordigen de ‘eerste lijn van verdediging’van het lichaam tegen de buitenwereld. Daarom zijn zij de eerste responders op letsel. Met de versie van inflammatory cytokines en de samentrekking van collagenous vezels,worden de basale epidermale keratinocytes geactiveerd en migreren naar het Gekronkelde gebied, waar zij zich verspreiden en differentiëren tot de cellulaire inhoud van het weefsel is vernieuwd (5). Uit een aantal waarnemingen is gebleken dat de epidermis een effect heeft op de pathologie van cutane littekens (6,7). Bij brandwondenpatiënten komen hypertrofische littekens vaker voor wanneer wonden genezen door secundaire Intentie, terwijl vroege huidtransplantatie littekenvorming lijkt te onderdrukken (8). Funayama et aldemonstrated that keloid-derived fibroblasten co-cultured withkeloid-derived keratinocytes significant more proliferative and resistant to apoptosis than those co-cultured with normalskin-derived keratinocytes (9).In een vergelijkbaar co-culture systeem, werd gevonden dat keloid-derivedkeratinocytes verhoogde collageenproductie bevorderde, evenals de verhoogde proliferatie van normale fibroblasten (10). In het bijzonder, zijn keloid-derivedkeratinocytes getoond om de verhoogde Expression van een reeks histone genen te tonen essentieel voor de replicatie van DNA onvergelijkelijk met de uitdrukkingsniveaus in normale cellen, enkeratinocytes in de epidermis van hypertrofic littekens zijn een alternatieve differentiatieweg ingegaan en drukken een proliferatiefefenotype uit (11,12). Deze resultaten suggereren dat het evenwicht tussen de proliferatie en differentiatie vankeratinocytes in littekenweefsels ontregeld is, en dat fundamentalabnormaliteiten in keratinocytes een belangrijkere rol in huidregeneratie en zijn pathogenese kunnen spelen dan eerder werd beoordeeld.

in deze studie werden normale, wondrand-en hypertrofische littekenweefsels verkregen en geanalyseerd met behulp van histologische en immunofluorescentiemethoden om de verschillen in morfologie en keratineexpressieprofielen tijdens epidermale regeneratie te onderzoeken. Onze resultaten toonden aan dat er een variatie was in de keratine expressieprofielen in de epidermalkeratinocyten van normale, wondrand en hypertrofische littekenweefsel, die overeenkwam met afwijkingen in de structuur van het keldermembraan (BM). Door gebruik te maken van een panel van antilichamen tegen Bmcomponenten, valideerden we onze hypothese en bepaalden we dat de BMwas een positieve regulator van de rekrutering van precursor-achtige cellen in de basale laag van de epidermis. Onze gegevens wijzen erop dat herhalingen in de structuur van de BM basale keratinocyten bevorderen om een proliferatief fenotype aan te nemen, zowel in vivo als invitro.

materialen en methoden

weefselmonsters

hypertrofisch littekenweefsel (4 vrouwen en 3 mannen; agerange 18-40 jaar) en wondrandweefsel (3 vrouwen en 5 mannen;leeftijdsgroep 18-40 jaar) monsters werden verkregen van patiënten die eerder een reconstructieve brandoperatie hadden ondergaan. Normaal huidweefsel (4 vrouwen en 3 mannen; leeftijdscategorie, 18-40 jaar) grenzend aan de scarexcisie tijdens de operatie werd gebruikt als controle. Er werden ook voorhuiden gemaakt van mannen die een besnijdenis ondergingen (10 mannen; leeftijdscategorie: 18-20 jaar). De huidige studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van het Chinese PLA General Hospital (Beijing, China), en van alle individuen werd schriftelijke geïnformeerde toestemming verkregen alvorens de monsters te nemen.

Immunofluorescentiekleuring

normale huid, wondrand en hypertrofische littekenweefselmonsters werden gefixeerd in 10% gebufferde formaline, gedehydrateerd door ethanoloplossingen met achtereenvolgens een verhoogde concentratie, en uiteindelijk ingebed in paraffine. Paraffine-ingebedde tissues werden gesneden in 4 µm dikke secties voor kleuring methematoxyline en eosine (h&E), Massons trichroom en methenamine zilver (allemaal uit Zhongshan Golden Bridge, Beijing, China). Beelden werden gemaakt met behulp van een optische microscoop (Bx53;Olympus, Tokyo, Japan). Om immunofluorescentie het bevlekken uit te voeren, werden de secties gefixeerd in 4% paraformaldehyde gedurende 30 min, en vervolgens in 0,2% Triton X-100 (T8787; Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, de V. S.) in fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) gedurende 10 min. Deze secties werden geïncubeerd met primaire anti-lichamen bij 4°C ‘ s nachts en vervolgens met secundaire antilichamen gedurende 2 uur bij kamertemperatuur. De volgende primaire anti lichamen werden gebruikt: muis anti-humancytokeratin (CK)10 (1:200, ab111447) en rabbit anti-human CK14(1:200, ab7800) (beide van Abcam, Cambridge, MA, USA), rabbitanti-menselijke CK5 (1:200, ZA-0518; Zhongshan Goldenbridge, Beijing,China), muis-anti-mens CK19 (1:200, ab53119; Abcam), rabbitanti-menselijke integrine-β1 (1:200, PB0063; Boster, Wuhan, China); mouseanti-menselijke integrine-β4 (1:200, ab128068; Abcam), muis-anti-humanlaminin (1:200, ZM-0181; Zhongshan Goldenbridge), rabbit anti-humanlaminin-5 (1:200, ab14509; Abcam) en mouse anti-human collageen IV(1:200, ZM-0081; Zhongshan Goldenbridge). De volgende secundaire antilichamen werden gebruikt: Alexa-Fluor 488-geconjugeerde anti-muis (1: 200,ab150117) en Alexa-Fluor 594-geconjugeerde anti-konijn (1:200,ab150080) (beide van Abcam). De kernen werden gekleurd met DAPI (H-1200; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA).Immunofluorescentiebeelden werden vastgelegd met behulp van een confocale laserscanning microscoop (SP8; Leica, Solms, Duitsland).

celkweek en behandeling

primaire humane epidermale keratinocyten (HEKs) werden geïsoleerd uit de mannelijke voorhuiden, zoals eerder beschreven (13), met kleine wijzigingen. De humanimmortalized keratinocyte (HaCaT) cellen werden gekocht van deChina Infrastruture van cellijn middelen (3111C0001CCC000373; Beijing, China). Zowel de HEKs als de HaCaT cellen werden geïncubeerd in EpiLife medium (m-EPI-500-CA; Invitrogen Life Technologies,Carlsbad, CA, USA) aangevuld met 0,06 mM Ca2+, 1% EpiLife defined growth supplement (S-001-5; Invitrogen LifeTechnologies), en 1% penicilline / streptomycine (P1400; Solarbio,Beijing, China). Om de rollen van BM in het regelen van het gedrag van dekeratinocyten in vitro te onderzoeken, werden de HEKs en HaCaT cellen geplateerd in 60 mm-schotels die met MaxGel ECM (E0282) en collagen type IV (C7521) worden bedekt (beide van Sigma-Aldrich), respectievelijk.Voor Ca2 + – behandeling werden de cellen geïncubeerd in EpiLifemedium aangevuld met 1,5 mM Ca2+ gedurende 0, 12 en 24 uur.De MaxGel ECM bevat menselijke extracellulaire matrix (ECM) componenten, waaronder collagenen, laminine, fibronectine, tenascin en elastine, evenals een aantal proteoglycanen en glycosaminoglycanen. De cellen die niet met Ca2+ werden behandeld, werden als controlegroep gebruikt.

Reverse transcriptie-kwantitatieve (real-time) PCR (RT-qPCR)

totaal RNA werd geïsoleerd uit de cellen nadat ze werden onderworpen aan de verschillende behandelingen met TRIzol-reagens (15596-026; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) en vervolgens cDNA wassynthese met GoScript reverse transcriptase (A5001; Promega, Madison, WI, USA) volgens de instructies van de fabrikant. De voor genamplificatie gebruikte primersequenties zijn vermeld in Tabel I. qPCR reacties werden uitgevoerd met GoTaq qPCR Master Mix (A6001; Promega) gebruikend een ABI 7500Real-Time PCR systeem en software (Applied Biosystems, Foster City,CA, USA). Het reactieprotocol bestond uit de volgende cycli:95°C gedurende 15 sec, 55°C gedurende 30 sec en 72°C gedurende 30 sec voor 40 cycli van PCR-versterking.

Western blot analyse

totaal eiwit werd geïsoleerd uit de cellen en 20µg eiwit werd opgelost in substraat oplosbare buffer. De proteïnen werden vervolgens gescheiden door SDS-PAGE en overgedragen ontopolyvinylideendifluoride (PVDF) membranen (IPFL00010; Millipore,Billerica, MA, USA). Na blokkering werden de vlekken ‘ s nachts bij 4°C gesondeerd met de primaire antilichamen. de antilichamen die voor de analyse van de westelijke vlek werden gebruikt, omvatten CK10 (1:1000, ab111447), CK14(1:500, ab7800), CK19 (1:500, ab53119), integrine-β4 (1).:500, ab128068), en muizen anti-humaan β-actine antilichaam (1:5000, ab6276) (allemaal van Abcam). Na het wassen werden de membranen geïncubeerd met secondaire antilichamen, namelijk goat anti-rabbit en goatanti-mouse IgG geconjugeerd aan mierikswortelperoxidase (sc-2004,1:1000; SC-2005, 1:1000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA,USA). Immunoreactieve banden werden gedetecteerd door enhancedchemiluminescence (ECL) kit (PE-0010-100; Solarbio, Beijing, China)en afgebeeld met behulp van het ImageQuant LAS 4000 systeem (GE HealthcareBio-Sciences, Pittsburgh, USA).

statistische analyse

alle experimenten werden ten minste 3 keer herhaald,tenzij anders aangegeven. De gegevens worden gepresenteerd als de gemiddelde ±standaardafwijking (SD). Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van SPSS 20.0 software. Gegevensvergelijking werd uitgevoerd met behulp van de onafhankelijke Student t-test en one-way ANOVA gevolgd door de LSDtest. Een P-waarde <0,05 werd geacht een statistisch significant verschil aan te geven.

resultaten

morfologische verschillen in normaal weefsel, wondrandweefsel en hypertrofisch littekenweefsel

het herstel van de huidwond is een nauwkeurig remodelleringsproces,dat klassiek is onderverdeeld in vier overlappende fasen en de interactie van veel verschillende weefsels en cellen omvat (5). Bij chronische wonden wordt het normale genezingsproces echter onderbroken, wat resulteert in een pathologische cyclus van ontsteking en protease die leidt tot de ontwikkeling van een pathologisch litteken. Om de morfologische veranderingen in de regenererende epidermis tijdens de wondgenezing van de huid te evalueren,werden in deze studie monsters van normaal, gewondedge en hypertrofisch littekenweefsel verkregen om routine H&E en Masson ‘ s trichrome kleuring te verbeteren. In de normale huidmonsters, was de histologische structuur van de huid zichtbaar, die lagen van de epidermis en dermis tonen. De epidermisbestaat 4 tot 5 lagen, waarin keratinocyten gedifferentieerd en geleidelijk gerijpt in doornige cellen, korrelige cellen en cornifiedcells tijdens hun uitwendige passage (Fig. 1 bis). Bovendien vormden fibroblasten in de onderhuid los bindweefsel, dat rijk was aan parallelle collageenvezels (Fig.1D). In de weefsels rond de wondrand, echter, verspreidde de epidermis; het bestond uit meerdere lagen vankeratinocyten van verschillende morfologie en was van zichtbaar verhoogde dikte (Fig. 1 Ter en E). De epidermis en dermis met elkaar verbonden door vinger-achtige projecties(genaamd rete richels), die het oppervlak van contact tussen de epidermis en de dermis vergrootte. In zowel de normale en gewondedge weefsels, de basale keratinocyten werden gerangschikt als een regimentedsingle laag van cuboïdale of lage zuilvormige cellen, die verbonden met de doornuitstekende cel lagen hierboven (Fig.1A en B). De histologische structuur van de hypertrofische littekenweefsel verschilde van die van normaal huidweefsel door een rijke bloedtoevoer en een dikke epidermale laag (Fig. 1C en F). De lederhuid was grotendeels samengesteld uit dicht, ongeorganiseerd bindweefsel met voldoende collageenvezels met een onregelmatige vorm en een grotere diameter (Fig. 1F). Om de verschillen in histologische structuur tussen het normale weefsel,de wondrand en het hypertrofische littekenweefsel verder te verduidelijken, werd methenamine-zilverkleuring uitgevoerd om de vorming van het BM te beoordelen, hetgeen aantoonde dat de BM-structuur detecteerbaar was in de secties van het normale weefsel en de wondrandweefsels (Fig. 1G en H). In de littekenweefsels was BM-kleuring echter afwezig (Fig.1).

verschillen in de expressie van celmarkers in epidermale keratinocyten in normaal, wondrand-en hypertrofisch littekenweefsel

gezien de morfologische verschillen die werden waargenomen in normaal, wondrand-en hypertrofisch littekenweefsel,hebben we onderzocht of de basale keratinocyten een andercellig gedrag vertonen tijdens littekenvorming. Aanvankelijk, voeren wij immunofluorescentie het bevlekken uit om de uitdrukking van CK10, CK14,CK5, CK19 en integrine-β1 in de secties van normale, gekronkelde rand en scharweefsels te ontdekken. Eerdere studies hebben geverifieerd dat CK10 een marker van gedifferentieerde keratinocytes is, dat CK14 en CK5 tellers zijn van prolifererende basale keratinocytes of TAs, en dat CK19 aputatieve teller is van epidermale voorlopercellen of stamcellen in de huid (14-17). Integrine-β1 wordt ook verondersteld amarker van voorlopercellen in de huid te zijn (18,19). Onze resultaten gaven aan dat CK10 werd uitgedrukt in de buitenste laag van de epidermis in de normale en gewonderandweefsels (Fig. 2A andB), en in de suprabasale, terminaal differentiërende cellen in de epidermis van het hypertrofische littekenweefsel (Fig. 2C). CK14 werd uitgedrukt in zowel basale als suprabasale lagen in de gelaagde epidermis van alle drie weefsels (Fig. 2D-F), en er was een uitgebreide distributie van CK14 in de meerlaagse epidermis van het littekenweefsel (Fig.2F). Het distributiepatroon van CK5 was vergelijkbaar met dat van K14 (Fig. 2G-I), wat duidt op een verhoogd aantal prolifererende cellen in de hyperproliferatieve epidermis. Integrine-β1 en CK19 werden uitgedrukt in de basale laag van de normale epidermis (Fig. 2J en M) en in de basale ensupra-basale lagen van de wond rand epidermis (Fig. 2K en N), maar waren niet detecteerbaar in de epidermis van de hypertrofische littekenweefsels (Fig. 2L en O). Collectief, wijzen deze observaties erop dat het keratine uitdrukkingsprofiel van basalkeratinocytes verschilde tussen de normale, gekronkelde rand en hypertrophic littekenweefsels. Hoewel er minder ck19-expressie cellen werden gedetecteerd in de basale en suprabasale lagen van het hypertrofische littekenweefsel (Fig.2P), werd een proliferatief fenotype onthuld als gevolg van de verhoogde expressie van CK14 en CK5 in de meerlaagse epidermis.Een gewijzigde BM-structuur draagt bij aan hetverschillende keratine-expressieprofiel in epidermale keratinocytesin vivo

als een belangrijk onderdeel van de stamcelniche, verankert het ECM niet alleen stamcellen, maar leidt ook hun lot (20). Zoals hierboven vermeld, dehistologische structuur van de BM bleek afwezig in de hypertrofische littekenweefsel monsters. Gezien de verschillen in thekeratin uitdrukkingsprofielen in de basale laag van normale, woundedge en hypertrofische littekenepidermis, speculeerden wij toen dat destructurele abnormaliteiten van BM een rol spelen in het regelen van de beslissing van het lot van basale keratinocytes tijdens het gekronkelde helen. Om deze hypothese te onderzoeken, werd immunofluorescentie het bevlekken uitgevoerd om de componenten van BM in de normale, wondrand en hypertrophic littekenweefsel steekproeven te visualiseren. Onze resultaten toonden aan dat collagen IV expressie werd gedetecteerd in het BM gebied in beide normaal (Fig. 3A) en gekronkelde rand (vijg. 3B) weefsels. De vorming van BM-achtige structuren met een afwezigheid van collageen Ivexpressie werd echter waargenomen in de epidermis van hypertrofische littekenweefsel (Fig. 3C). Hoewel de expressie van laminine werd gedetecteerd in alle drie de weefseltypen (Fig. 3D-F), bevestigde het dubbel labelen van laminine-5 en zijn receptorintegrine-β4 verder onze waarneming dat de structuur van BM in de epidermis van de hypertrofische littekenweefsels werd veranderd; negatieve kleuring van zowel laminine-5 als integrine-β4 (Fig.3I en 4G-I) werd waargenomen in vergelijking met die in de normale (Fig. 3G en 4A-C) en wondrandweefsels (Fig. 3H en 4D-F–. Gezien deze bevindingen is het waarschijnlijk dat de normale BM bijdroeg aan de rekrutering van integrine-β1-en CK19-expressiecellen in de basale laag van de normale en gewonderandepidermis. De abnormaliteiten in de structuur van BM, echter,veroorzaakten de basale keratinocytes om aproliferative fenotype tijdens littekenpathogenese te differentiëren en goed te keuren.

gewijzigde BM-structuur bevordert epidermalkeratinocyten om in vitro een proliferatief fenotype aan te nemen

de mechanische ondersteuning van BM wordt voornamelijk bepaald door zijn type IV collageensteiger (21), waarin de lamininenetwerken en perlecanoligomeren worden geïntegreerd door de kruisende nidogenen om uiteindelijk het plaatachtige BM-complex te assembleren (22). Om de rollen van theBM in de regelgeving van epidermale keratinocyten gedrag verder te verduidelijken, gebruikten we de menselijke BM extract-afgeleide ECM om de cultuurschotels te bedekken om het patroon van cel-matrixadhesie te controleren. Zoals getoond inFig. 5, ECM administrationresulted in the upregulation of integrin-β4 expression in the HEKs(Fig. 5A) en de HaCaT (Fig. 5B) cellen, die aanwezig waren op het plasma membraan en op de plaatsen van cel-matrix gehechtheid. Wij opereerden ook Westelijke vlekanalyse om de eiwitniveaus van integrin-β4 in de epidermale cellijnen met of zonder ECMcoating te onderzoeken. Onze gegevens tonen aan dat hogere niveaus van integrine-ß4 detecteerbaar waren in de ECM-behandelde groepen dan in de controlegroepen, wat de fluorescerende immunostainingbevindingen verder bevestigde (Fig. 5C). Bovendien werden de HEKs – enhacatcellen gedurende de aangegeven tijdsperioden overgeschakeld op een medium met 1,5 mMCa2+ om verschillende epidermale cellen te genereren zoals eerder beschreven (23,24). Na Ca2 + behandeling, de morfologische veranderingen in beide HEKs (Fig. 6A) en HaCaT-cellen (Fig. 6B) werden waargenomen onder een lichtmicroscoop, waaronder celvergroting en afvlakking.Ca2+ induceerde de expressie van CK10 (Fig. 5D, G en J, en 6C en D) en CK14 (Fig. 5E, H en J, en 6C en D) op een tijdsafhankelijke manier inepidermale cellijnen bij zowel mRNA (Fig. 5D, E, G en H, en 6C en D) en eiwit (Fig. 5J) niveaus, waarbij piekniveaus van ck10 en ck14 expressie worden waargenomen 24 uur na het starten van 1,5 mMCa2 + behandeling in de HEKs (Fig. 5D, E en J en 6C) en de HaCaT-cellen (Fig. 5G, H en J en 6D). Na behandeling met Ca2+ werd de expressie van CK19 in de HEKs verlaagd en bereikte het laagste niveau 24 uur na de start van de behandeling met Ca2+ (Fig. 5F en J en 6C). Vergelijkbare resultaten werden waargenomen in theHaCaT cellen (Fig. 5I en J en 6D). ECM behandeling, echter, verminderde de differentiërende reacties van keratinocyten geassocieerd met Ca2+ toediening in de HEKs en HaCaT cellen, en verbeterde de expressie van CK19 bij 12 h en 24 h naca2+ behandeling (Fig. 5F, I en J). Om de potentiële rol van BM in de verordening van epidermaal keratinocytengedrag verder te bepalen, werd type IV collagen gebruikt om een BM-achtige structuur in vitro te vormen. Collageen IV-behandeling droeg bij tot de expressie van CK19 en verminderde de expressie van CK10 en CK14 bij het mRNA-en eiwitgehalte in beide HEKs(Fig. 7A-C en G) en de HaCaTcells (Fig. 7D-F en G). Deze resultaten bevestigden verder onze in vivo bevindingen dat de BM een positieve regulator lijkt te zijn van de rekrutering van precursor-achtige cellen in de basale laag van de epidermis.Veranderingen in de BM-structuur bevorderden de ontwikkeling van een proliferatief fenotype in basale keratinocyten zoals aangegeven door de versterkte expressie van de markers geassocieerd met celproliferatie, bijvoorbeeld CK14 en CK5.

discussie

in deze studie onderzochten we eerst de morfologische veranderingen die optreden tijdens epidermale regeneratie als onderdeel van het wondgenezingsproces. Onze gegevens toonden aan dat dehistologische structuur van de hypertrofische littekenweefsels verschilde van die van normaal huidweefsel, met een significante toename inepidermale dikte tussen de basale laag en stratum corneumbeing waargenomen. Met name kleuring van de BM bleek afwezig te zijnin het littekenweefsel. Bovendien, immunofluorescentiekleuring voor CK10,CK14, CK5, CK19 en integrine-β1 aangegeven dat de differentialexpression van basale keratinocyten markers verschilden tussen de samplesof normaal, wond rand en hypertrofische litteken weefsel, andfurthermore de opperhuid van de hypertrofische litteken weefsel exhibiteda proliferatieve fenotype door het inschakelen van de expressie ofintegrin-β1 en CK19 te CK14 en CK5, markers van cellproliferation, in de gelaagde structuur van de opperhuid. Gezien deze bevindingen, veronderstelden wij zo dat BM een rol in het regelen van de beslissing van het lot van de cel van epidermale keratinocytes tijdens wond speelt healing.By met behulp van een panel van antilichamen geassocieerd met BM componenten, valideerden we onze hypothese dat de structuur van de BM werd gewijzigd in de hypertrofische littekenweefsels. Onze resultaten toonden aan dat de BM bijdroeg aan de rekrutering van ck19-expresserende cellen in de basislaag van normale en wondrandepidermis, waar abnormaliteiten in de structuur van de BM de basalkeratinocyten induceerden om een proliferatieve fenotypering bij littekenpathogenese te differentiëren en aan te nemen. Door ECM en collageen IV te gebruiken om de BM-structuur in vitro na te bootsen, bevestigden we verder onze invivo-observaties en toonden we aan dat de BM de verschillende responsen van keratinocyten, geïnduceerd door 2C2+ toediening in de epidermale cellijnen verminderde en de expressie van CK19, een vermeende marker van epidermalprogenitorcellen, verbeterde.

de BM speelt een fundamentele rol bij dedifferentiatie, proliferatie, overleving en migratie van cellen tijdens de embryonale ontwikkeling. In de huid, scheidt BM fysisch de epidermis van de onderliggende dermis. De basalkeratinocytes in de epidermis hechten aan onderliggende BM door integrins, die aan sommige BM componenten, zoals collageen,laminine en fibronectin binden (25).Aldus dient BM niet alleen als selectieve barrière en structuralscaffold, maar verstrekt ook een communicatieinterface tussendermale fibroblasten en epidermale keratinocytes (2,26).BM bindt ook aan een aantal cytokines en de groeifactoren,die als reservoir voor hun gecontroleerde versie dienen, die keratinocyte-fibroblastinteractie reguleert om deontwikkeling van huid, evenals gekronkelde het helen te bevorderen (27,28). Eerdere studies over littekenvorming hebben zich voornamelijk gericht op fibroblasten en er is weinig bekend over Desole van de bovenliggende epidermale keratinocyten (29,30). Er is groeiend bewijs datkeratinocyten een belangrijke rol kunnen spelen in de ontwikkeling vanpathologische fibroblastfunctie door paracriene Regulatie (6,9,10).ook is aangetoond dat keratinocyten afgeleid van littekenweefselverschilden van normale keratinocyten door het vertonen van differentiële geneexpressieprofielen (12). Themanisms verantwoordelijk voor de fundamentele abnormaliteiten inkeratinocytes tijdens keloid en het hypertrofische met littekens bedekken blijven ongrijpbaar. Onze gegevens wezen op een potentieel verband tussen BM-remodellering en het behoud van keratinocytenfunctie tijdens wondreparatie en regeneratie. Het is bekend dat adhesiemoleculen, suchintegrins en E – en n-cadherin, stamcellen verankeren aan ECM(22). In het licht van ourobservaties lijkt het erop dat de BM deel kan uitmaken van de iche-componenten voor de rekrutering van epidermale voorlopercellen in de basale laag van de huidepidermis. Onze resultaten wijzen erop dat de abnormale werking van de BM de hechting van basalprogenitorcellen aan hun omringende micro-omgeving vermindert en hen ertoe aanzet een proliferatief fenotype aan te nemen, dat de pathogenese van littekenvorming kan verklaren (Fig.8).

erkenningen

deze studie werd gedeeltelijk ondersteund door subsidies van het novel-programma van Beijing (nrs. 2008B53 en 2009A38) en de National Natural Science Foundation of China (nrs. 30901564,81101883, 81372067, 81121004 en 81230041) en het National BasicScience and Development Program (973 Program, 2012CB518105).

	Fuchs E en Raghavan S: Onder de huid van epidermale morfogenese komen. Nat Rev Genet. 3:199–209. 2002.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Breitkreutz D, Mirancea N en Nischt R: Keldermembranen in de huid: unieke matrixstructuren met diversefunctions? Histochem Cel Biol. 132:1–10. 2009. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Blanpain C en Fuchs E: epidermale stamcellen van de huid. Annu Rev Cell Dev Biol. 22:339–373. 2006.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Snippert HJ, Haegebarth A, Kasper M, JaksV, van Es JH, Barker N, van de Wetering M, Van den Born M, BegthelH, Vries RG, et al: Lgr6 marks stam cells in the hair follicle thatgenerate all cell lineages of the skin. Wetenschap. 327:1385–1389.2010. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Broughton G II, Janis je and Attinger CE: the basic science of wondgenezing. Plast Restr sur. 117 (Suppl7): 12S–34S. 2006. Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bellemare J, Roberge CJ, Bergeron D, Lopez-Vallé CA, Roy M en Moulin VJ: Epidermis bevordert dermalfibrose: rol in de pathogenese van hypertrofische littekens. J Pathol.206:1–8. 2005. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Andriessen MP, Niessen FB, van de KerkhofPC en Schalkwijk J: hypertrofische littekenvorming is geassocieerd metpidermale afwijkingen: een immunohistochemische studie. J Pathol.186:192–200. 1998. Bekijk Het Artikel : Google Scholar
	Teepe RG, Kreis RW,Koebrugge EJ, Kempenaar JA, Vloemans AF, Hermans RP, Boxma H, Dokter J, HermansJ, Ponec M, et al: The use of cultured autologe epidermis in the treatment of extensive burn wounds. J Trauma. 30:269–275. 1990.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Funayama E, Chodon T, Oyama A en SugiharaT: keratinocyten bevorderen de proliferatie en remmen apoptose van de onderliggende fibroblasten: een belangrijke rol in de pathogenese van keloid. J Invest Dermatol. 121:1326–1331. 2003. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Lim IJ, Phan TT, Bay BH, Qi R,Huynh H, Tan WT, Lee ST and Longaker MT: fibroblasten cocultured with keloidkeratinocytes: normale fibroblasten scheiden collageen af in een keloidlikemanner. Am J Physiol Cell Physiol. 283:C212–C222. 2002. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Hahn JM, Glaser K, McFarland KL, AronowBJ, Boyce ST en Supp DM: Keloid-afgeleide keratinocyten vertonen anabnormaal genexpressieprofiel consistent met een duidelijke causalrol in keloid pathologie. Wondreparatie Regen. 21:530–544. 2013.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Machesney M, Tidman N, Waseem A, Kirby Land Leigh I: Activated keratinocytes in the epidermis ofhypertrophic scars. Am J Pathol. 152:1133–1141. 1998.PubMed/NCBI
	Orazizadeh M, Hashemitabar M, BahramzadehS, Dehbashi FN en Saremy S: Vergelijking van de enzymatische enexplant methoden voor de cultuur van keratinocyten geïsoleerd uit menselijke voorhuid. Biomed Rep. 3: 304-308. 2015.PubMed/NCBI
	Su L, Morgan PR en Lane EB: keratine 14 en 19 expressie in normale, dysplastische en kwaadaardige oralepithelia. Een studie die in situ hybridisatie en immunohistochemie gebruikt. J Orale Pathol Med. 25:293–301. 1996.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Michel M, Török N, Godbout MJ, Lussier M, Gaudreau P, Royal A en Germain L: Keratine 19 als biochemicalmarker van de cellen van de huidstam in vivo en in vitro: keratine 19 uitdrukkende cellen zijn differentially gelokaliseerd in functie vananatomic plaatsen, en hun aantal varieert met donorleeftijd en culturestage. J Cell Sci. 109:1017–1028. 1996.PubMed/NCBI
	Khanom R, Sakamoto K, Pal SK,Shimada Y, Morita K, Omura K, Miki Y en Yamaguchi a: expressie van basaalcellkeratine 15 en keratine 19 in orale plaveiselneoplasmata representsdiverse pathofysiologieën. Histol Histopathol. 27:949–959.2012.PubMed/NCBI
	Fuchs E: huidstamcellen: stijgen naar het oppervlak. J Cell Biol. 180:273–284. 2008. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Yeh YC, Lin HH en Tang MJ: een verhaal van tweecollageenreceptoren, integrine β1 en discoïdin domeinreceptor 1, inepitheliale celdifferentiatie. Am J Physiol Cell Physiol.303: C1207–C1217. 2012. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Borowska K, Jedrych B, Czerny K andZabielski S: De rol van integrines in de fysiologische enpathogene processen. Pol Merkur Lekarski. 21:362–366. 2006.Artikel In Het Pools.
	Lane SW, Williams DA en watt FM: moduleren van de stamcelniche voor weefselregeneratie. NatBiotechnol. 32:795–803. 2014. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Breitkreutz D, Koxholt I, Thiemann K andNischt R: Skin basement membraan: de stichting van epidermalintegrity-BM functies en diverse rollen van bridging moleculennidogen en perlecan. Biomed Res Int. 2013(179784)2013. Bekijk artikel: Google Scholar
	Timpl R en Brown JC: Supramolecularassemblage van keldermembranen. BioEssays. 18:123–132. 1996.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Hennings H, Michael D, Cheng C, SteinertP, Holbrook K en Yuspa SH: Calcium regulatie van de groei endifferentiatie van muis epidermale cellen in cultuur. Cel.19:245–254. 1980. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Hennings h en Holbrook KA: Calciumregulatie van cel-celcontact en differentiatie van epidermalcellen in cultuur. Een ultrastructurele studie. Exp Cel Res. 143: 127-142. 1983. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Burgeson RE en Christiano AM: Dedermale-epidermale kruising. Curr Opin Cell Biol. 9:651–658. 1997.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	LeBleu VS, Macdonald B and Kalluri R: structuur en functie van keldermembranen. Exp Biol Med (Maywood). 232:1121–1129. 2007. Bekijk Het Artikel : Google Scholar
	Iozzo RV: Keldermembraan proteoglycans: van kelder tot plafond. Nat Rev Mol Cell Biol. 6:646–656. 2005.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Werner s, Krieg T en Smola H: Keratinocyt-fibroblast interacties in wondgenezing. J InvestDermatol. 127:998–1008. 2007. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Moulin V, Castilloux G, Auger FA, Garrild, O ‘ Connor-McCourt M en Germain L: Gemoduleerde reactie tocytokines van menselijke wondgenezing myofibroblasten in vergelijking met dermalfibroblasten. Exp Cel Res. 238: 283-293. 1998. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Gabbiani G, Ryan GB en Majne G: aanwezigheid van gemodificeerde fibroblasten in granulatieweefsel en hun mogelijke rol in wondcontractie. Experientia. 27:549–550. 1971.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI